HPV分型在宫颈癌检测中的意义

,HPV,分型在宫颈癌检测中的意义,宫颈癌,全球聚焦,世界范围,国际癌症研究所（,IARC,）统计,全球每年有,50,万宫颈癌新发病例，,28.8,万死亡病例,其中,83%,发生于非洲、拉丁美洲和亚洲等发展中国家,50,的病例发生在亚洲,宫颈癌成为,发展中国家妇女健康和生命的“,头号杀手,”,宫颈癌的发病趋于年轻化，发病年龄一般在40-60岁,2006,年世界卫生组织指出：如不采取措施，未来,10,年内因子宫颈癌导致的死亡病例将上升,25%,宫颈癌防治已成为全球关注的公共卫生问题！,宫颈癌,中国关注,宫颈癌预防已纳入国家医改、重大公共卫生项目和十一五国家重大支撑计划,2006,年中央财政转移支付,6,个省,6,个亿的宫颈癌筛查,2009,年，卫生部启动两癌（宫颈癌和乳腺癌）筛查项目计划：,2009-2011,年在全国约,200,个县对,1000,万名妇女进行宫颈癌检查,宫颈癌与HPV,昨日回眸,1977年，Laverty,在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在,HPV,颗粒,80,年代，,Harald zur Hausen,首先报告,HPV,与子宫颈癌间的相关性,随后，大量研究及流行病学资料显示,几乎,100%,子宫颈癌和,95%,以上宫颈高度病变中,HPV DNA,检测阳性,1995,年，国际癌症研究机构,(IARC),专题讨论会,HPV,感染是宫颈癌的主要原因，即,HPV,感染是宫颈癌发生的必要条件,宫颈癌与HPV,昨日回眸,2008,年，,Harald zur Hausen,获,诺贝尔生理学或医学奖,HPV,与宫颈癌的关系的明确,宫颈癌成为目前癌症中：,唯一病因明确,唯一可以早期预防和治疗,唯一可以彻底根除的癌症,HPV,病毒学,HPV,是一组病毒的总称,小环状双链DNA病毒，约8kb,颗粒直径为,50,55nm,，无包膜,在自然界中稳定性好,在人和动物中分布广泛,有较高的种依赖性,具有嗜上皮性，在基底层细胞中潜伏,在鳞状上皮细胞中复制、转录和翻译、增殖,HPV,基因结构,HPV16,早期区（E区）,含6个基因，,是维持病毒复制、编码病毒蛋白、维持细胞内病毒高拷贝数的基因,晚期区（L区）,含两个结构蛋白,最保守的区域,长控制区（LCR,）,E6,通过抑制,p53,而阻断凋亡,E7,通过抑制,pRB,使,细胞,周期失控,E2,：,负性调节,E6,和,E7,，维持凋亡和细胞周期的调控。,病毒整合时会破坏,E2,基因的结构，导致失活,E4,：,结合并破坏中表层细胞角蛋白网，形成中表层细胞的挖空外观,L2:,次要衣壳蛋白,抗体主要识别位点,L1:,主要衣壳蛋白，,疫苗研发的主要成分,HPV,病毒分类,以病毒基因组中,L1,区,DNA,同源性,作为分类依据：,属：,L1,区,DNA,同源性在,60%,以下,种：,L1,区,DNA,同源性介于,60%70%,型：,L1,区,DNA,同源性介于71,%,89%,亚型：,L1,区,DNA,同源性介于90,%,98%,变异株：,L1,区,DNA,同源性大于98%,HPV,HPV分型,目前，已发现超过200种人乳头瘤病毒（HPV）,依据与生殖道肿瘤相关性，将HPV分为：,高危型,与宫颈癌及宫颈病变密切相关，如,16,、,18,、,31,、,33,、,35,、,39,、,45,、,51,、,52,、,56,、,58,、,59,、,68,、73、82等,疑似高危型,与宫颈癌有一定的相关性，但由于在人群中的分布频率较低或相关研究数据较少，需进一步研究确认，如26、53、66等,低危型,常引起外生殖道湿疣等良性病变，比如,6,、,11,、40、,42,、,43,、,44,、54、61、70、72、81、candHPV89等,HPV,型别分布,2009-2012.5，全国35万数据（凯普21分型）,阳性率：24.6%（门诊）,HPV,型别分布,2009-2012.5，广东省妇幼保健院9.7万数据（凯普21分型）,阳性率：23.6%（门诊）,HPV引发的癌症,HPV,HPV与宫颈癌,感染途径,性接触传播,丈夫阴茎,HPV,的存在可使妻子宫颈受染的危险增加,9,倍，相同的,HPV,型别可以在性伴侣中检出，与此相反，处女通常是检测不到,HPV,感染,直接皮肤接触,这也是主要的传播途径,母婴传播,母亲生殖道HPV感染也可以传播至她们的婴儿口腔中,HPV与宫颈癌,HPV的入侵,病毒通过皮肤或粘膜的微创口进入表层，然后感染基底层或副基底层细胞，并以附加体的形式在宿主细胞核内复制。,病毒的复制依赖于上皮细胞的分化，在基底层上层细胞中开始复制，在表皮细胞中装配，当这些表皮细胞脱落时，在皮肤表面可发现病毒颗粒。,HPV与宫颈癌,细胞、组织的改变,一过性,HPV,感染,持续性,HPV,感染,正常宫颈,感染,清除,HPV,感染,演进,消退,癌前病变,癌,浸润,HPV与宫颈癌,影响因子,树木的成长（宫颈癌的发生）,=,种子,(,高危,HPV)+,土壤,(,未成熟的宫颈转化区化生上皮,)+,cofactors,多个性伴侣,口服避孕药,HIV、STI感染,免疫缺陷,多产、密产,吸烟等,宫颈癌的筛查,筛查现状,宫颈癌的筛查,筛查对象,所有女性应在有性生活3年开始做宫颈癌筛查,（最晚不超过21岁）,2009.1 NCCN,子宫颈癌筛查临床实践指南,2003,卫生部,宫颈癌筛查及早诊早治指南,高危妇女人群,：多个性伴侣、性生活过早、,HIV/HPV,感染、免疫功能低下、卫生条件差,/,性保健知识缺乏的妇女,决定妊娠的妇女,宫颈癌的筛查,技术的发展,1943年巴氏涂片应用于宫颈癌的筛查,1988年,TCT,应用于宫颈癌的筛查,2003,年高危,HPV(HC2),应用于宫颈癌的筛查,(,辅助,),2004,年中国指南,HPV+TCT,为最佳宫颈癌筛查手段,2007,年欧洲,EUROGIN,推荐,HPV,作为宫颈癌筛查首选手段,2011,年,HPV,分型检测是国际公认最重要的宫颈癌筛查手段,2005,年,IARC/WHO,推荐,HPV,检测可以用于宫颈癌筛查,2006,年,HPV,分型检测（凯普）应用于宫颈癌筛查,宫颈癌的筛查,巴氏涂片的应用,对妇女健康作出很大贡献,局限性,:,取样误差,/,制片误差,/,读片误差,敏感性差、假阴性率高（,2%50%,）、假阳性率高、漏诊多,可重复性差，受阅片人主观影响,正常,高度病变,HSIL,低度病变,LSIL,癌变,Cancer,宫颈癌的筛查,TCT的应用,准确性97%,敏感度低，,尤其是腺体病变,重复性差,，没有改变传统的,阅片方式，与人为主观因素相关,无法预测患病的风险性,宫颈癌的筛查,HPV DNA检测,细胞学检测,HPV DNA,检测,对细胞形态改变的检查手段,对病原体检查手段,针对结果，评估临床阶段,针对病因，评估发病风险,敏感性相对稍低,敏感性高,方法不易质控,方法易于质控,宫颈癌的筛查,有充足的证据表明：,HPV DNA,检测可作为子宫颈癌的初筛手段，并可以降低子宫颈癌的发病率和死亡率。,-IARC/WHO,，,2005,HPV检测为首选,宫颈癌的筛查,HPV+TCT的应用,欧洲生殖道感染和肿瘤组织（,EUROGIN)2007,年提出的宫颈癌筛查方案,宫颈癌的筛查,HPV分型的应用,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,区分一过性感染或持续性感染,只有两次检测属于同一基因型才能确认为HPV持续性感染,只有高危型持续性感染才是宫颈癌发生的必要条件,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,区分单一感染或多重感染,早期的文献报道，,HPV,的多重感染与宫颈癌直接相关,现在越来越多的报道发现，,HPV,的多重感染与宫颈癌之间，不存在显著性的关系,不同型别的致癌风险不同,不同的高危型促进,LSIL,向,SCC,转变的能力有差异。,HPV16,，,18,的致宫颈癌风险性大于其他高危型,HPV,。,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,阴道镜适应征,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,阴道镜适应征,2009,年，美国阴道镜和宫颈病理学会（,ASCCP,）发布了,HPV,基因分型检测指南，明确指出,: 30,妇女，细胞学未见上皮内病变和恶性细胞，,HPV16,，,18,建议阴道镜,;,其他,HPV,高危型，则在,12,个月后重复,HPV DNA,检测和细胞学检查。,（,American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, 2009,）,2010年，,杨英捷、赵健、毕蕙,等人的研究数据表明，HPV31、33的致癌风险也很高，建议,HPV31、33,直接行阴道镜检测,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,ASCUS分层管理,NCCN ,子宫颈癌筛查临床实践指南, (,源自英文版,V1,2009),指出：对发生在成年人的,ASC-US&LSIL,有,3,个可供选择的方案，可选择,HPV-DNA,检测将患者分流、,6,个月复查细胞学或立即阴道镜检查。,直接阴道镜检查或多点病理活检，引起创伤和过度诊治（,40-60%,）,重复细胞学检查，有,25%,失访率，此外复检会增加病人经济及精神负担,HPV,检测：为,目前的最优方法,。,HPV,检测阴性，可列入常规筛查人群；如,HPV,检测阳性，则考虑配合阴道镜检查,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,宫颈病变的随访,宫颈病变治疗后,失败,的主要原因是,同一基因型HPV的持续性感染,社会因素：家族性遗传,特性：宫颈解剖结构,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,宫颈病变的随访,HPV分型检测,临床应用,HPV分型检测用于,指导疫苗的开发,针对,衣壳蛋白（,L1,）,的,IgG,和,IgA,中和抗体在病毒感染的早期较为重要,-,预防性疫苗,针对,早期基因（,E6/E7,）,的细胞免疫反应对最终清除病毒可能更为重要,-,治疗性疫苗,根据不同地区HPV型别的流行情况，开发有针对性的疫苗,34,检测原理,凯普HPV21分型,PCR,，,Polymerase Chain Reaction,（聚合酶链式反应）,导流杂交技术,（凯普自主创新技术）,高效、快速、灵敏、准确,35,实验过程,凯普HPV21分型,36,产品优势,凯普HPV21分型,一次可同时得,到单一感染或,多重感染的丰,富信息,在一张基因芯,片上同时完成,对杂交和扩增,过程的全面监,控,独特的导流杂,交原理使得操,作更便捷，节,约时间,在一张基因芯,片上可检出,15,种高危型和,6,种低危型,分型,检测,省时,省力,双重,对照,信息,丰富,创新专业追求卓越,