猪伪狂犬病防控探讨---临床篇

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2017/8/14,#,猪伪狂犬病防控探讨,-,临床应用篇,陈家锃 博士,/,主任,15066253812,2017,年,8,月,22,日,个人介绍,1,、预防兽医学博士，,师从童光志所长、李一经院长和田志军研究员；,2,、从事高致病性蓝耳病,HuN4-F112,的研制及大量的临床试验工作；,3,、参加国家中长期项目（,2008-2020,），,猪瘟和,伪狂犬,净化工作；,2011,年所在团队最早发现了猪,伪狂,犬变异株，并开展疫苗的研制和伪狂犬疾病的防控工作,国际首次报道,IF,7.327,国内首次报道,V,irulent,Pseudorabies virus (vPRV),（超强毒）,Pseudorabies Virus Variant,（变异株）,目前主要从事猪病的临床防控及实验室诊断工作,擅长的领域：,猪场的免疫程序评估及调整,猪疫苗评估的动物实验设计,病毒性疾病诊断及综合防控,每个猪场都面临伪狂犬感染的威胁,不同猪场和感染的不同阶段的表现,如何通过实验室确诊和防控伪狂犬,如何科学地发挥伪狂犬疫苗的作用,伪狂犬“五步法转阴”及注意事项,主要内容,一、每个猪场都面临伪狂犬感染的威胁,伪狂犬病毒的特性：,1,、病毒对外界的抵抗力强,从发病猪排泄的病毒，,37,10,天，,25,40,天，,15,120,天仍存活；,2,、伪狂犬的中间宿主多，散毒方式多样,猪最具耐受性，是自然界病毒唯一的贮存宿主,。,此外，牛、羊、马、狗、猫、鼠等都能被伪狂犬病毒感染并散毒,体内可在多个脏器内繁殖，繁殖快,。,散毒途径多样，可通过唾液、精液等方式散毒,自然感染的途径,：,经鼻感染和经口感染,空气传播,老鼠的传播,苍蝇的传播,虱子,传播,妊娠猪感染给胎儿的途径,：,交配时感染病毒的持续感染,通过白血球传送,病毒（病毒血症时间短，很难检测到）,通过神经节传播，很难防控,病毒在初感染部位的鼻粘膜，咽喉头粘膜，扁桃繁殖，其次在其附近的淋巴结繁殖,。,在上部呼吸道繁殖的病毒借助三叉神经，嗅觉神经，舌咽神经到达中枢神经，引起脑炎,。,增殖,的病毒如果到达肺部，在肺部迅速繁殖，引起肺炎,。,少量的病毒即可感染,大量排毒,潜伏感染,隐性感染,3,、病毒,在猪体内的特征：,接种病毒量和感染成立（岛田，,2006,）,接种量,猪头数,发热（日数）,ELISA,抗体价,1.1 Log10,5,-,0.008,2.1 Log10,4,+,（,3,）,0.526,4.1 Log10,4,+,（,5.5,）,0.694,6.1 Log10,4,+,（,7.3,）,0.818,8.1 Log10,3,+,（,5.3,）,0.784,伪狂犬病毒的最低感染剂量只有猪蓝耳的,1/30,注：任何疾病都有感染的最小剂量，低于最小剂量后猪不会感染，更不会发病；,仔猪感染后短时间内会呈百万倍地排,毒,PRV,接种,后病毒分离阳性率及病毒排泄量（岛田，,2006,）,接,毒,后天数,阳性率,（,%,）,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,NIA-2,株,鼻腔,5/5,5/5,5/5,5/5,3/3,4/4,2/2,3/3,2/2,2/3,97,口腔,5/5,5/5,5/5,4/5,3/3,3/4,2/2,3/3,2/2,3/3,83,直肠,2/5,2/5,1/5,1/5,0/3,1/4,0/2,1/3,0/2,1/3,21,膣,/,包皮,1/5,3/5,2/5,3/5,0/3,1/4,0/2,1/3,0/2,1/3,32,感染,3-5,天的口腔试子和鼻腔试,子排毒量,4.0-8.0Log10,TCID,50,，感染,8-17,天的口腔试,子排毒量,5.9-8.3,Log10TCID,50,，感染,18-25,天的口腔试,子排毒量,6.0,Log10TCID,50,，高峰,时空气中的病毒量为,5.3,Log10TCID,50,按照极致计算，一头猪感染后的,3-5,天的排毒量可以感染,100,万头生猪,被感染猪不表现临床症状，病毒粒子本身检测不到，,但感染猪终生带毒。,病毒,的遗传子潜伏在神经细胞内，,当免疫低下时，遗传子再活性化引起在感染,。,被感染猪表现亚临床症状，这种带毒猪可持续,一年,以上排毒。,潜伏感染猪和隐性感染猪成为污染源,侵入途径,1989,年,1-3,月,1989,年,4-6,月,合计,（,%,）,肥育猪的引进,17,36,53,9.8,繁殖猪的引进,10,41,51,9.4,猪的分群,6,39,45,8.3,地域内传播,77,77,154,28.4,野生猪,1,8,9,1.7,机械的传播,1,0,1,0.2,猪的死体,0,4,4,0.7,不明,101,122,223,41.1,其他,0,2,2,0.4,PRV,的侵入途径,-,种猪引进和育肥猪散毒是已知的主要传染源,（美国农务省的调查结果）,一点式饲养散毒风险大,伪狂犬阴性场引进后备必须经过检测确定为伪狂犬阴性,!,综上所述，大多数猪场都存在伪狂犬发病的风险；中小规模猪场的风险尤为突出；,小结,伪狂犬病毒感染剂量低，中间宿主多，猪感染后排毒量巨大，进入猪场途径多，猪场内传播快，公猪传播途径容易被忽视；,变异株的流行导致发病率持续上升,2011,年以前，由于疫苗普遍接种（很多猪场仔猪只做一针的情况下）临床典型病例已较少；,配合鉴别诊断技术，很多猪场实现了伪狂犬转阴或者净化；,变异株的流行导致发病率持续上升,自,2011,年底自北向南猪场陆续出现伪狂犬；经过鉴定不同省份分离的毒株都是高度同源的变异株；,2011,年底最初发生的省份,至,2015,年伪狂犬变异株的分布,PRV,HeN1和,S,株 对小鼠的LD50测定,PRV,HeN1和,SC,株Vero细胞培养液的毒价测定分别为10,7.,6,TCID,50,/0.1mL,;,10,6.8,TCID,50,/0.1mL。,将原液稀释为10,6.0,、10,5.0,、10,4.0,、10,3.0,、10,2.0,、10,1.0,TCID50/0.1mL；,30只5周龄BALB/c小鼠，随机分为6组，每组5只，皮下注射各稀释度病毒0.1mL；,逐日观察小鼠症状及死亡情况。,PRV-,HeN1 株对小鼠的LD50经计算为,10,2.,4,TCID,50,/,只。,PRV-S,C,株 对小鼠的LD50经计算为,10,3.8,TCID,50,/,只。,变异株伪狂犬的致病力,更强,，致死剂量为,国家校检毒株,SC,株,的,1/30,Tong , et al.,Vet. Microbiol. 181 (2015) 236240 .,变异株对仔猪的致死率更高,组别,绵羊数,疫苗株,攻击用毒株,发病数,死亡数,保护数,保护率,A,4,免疫,HeN1,2/4,2/4,2/4,50%,B,3,未免疫,HeN1,3/3,3/3,0/3,0,C,4,免疫,S,C,0/4,0/4,4/4,100%,D,3,未免疫,S,C,3/3,3/3,0/3,0,注：,1,、实验设计,、免疫剂量和攻毒剂量均,参照,Bartha K61,疫苗质量标准；,2,、绵羊对伪狂犬感染是致死性的,3,、,免疫是单针肌注免疫,现有质量标准的疫苗对变异株,(HeN1),的,攻毒保护,效果欠佳,2014,年,7,月,-2015,年的检测数据统计,2016,年检测数据统计数据,伪狂犬变异株的临床症状变化,初次感染场特别是野毒抗体阴性场，损失,惨重,。,母猪,以,流产、死胎木乃伊胎为主；,仔猪出生后,3-5,天神经症状，腹泻、呕吐，死亡率,100,%,；,伪,狂犬野毒抗体呈阴性猪场，迅速转阳，一个月内,gE,抗体阳率超过,50,%,。,感染后,1,年产房逐渐,平稳,（但持续感染的影响在继续）,神经症状比例减少，腹泻比例增高；,保育及育肥猪干咳及继发感染严重；,长期,免疫抑制,or,传胸混感？,可致死大量育肥中后期猪,母猪,屡配,不孕，返情率高,产房仔猪顽固持续性,腹泻,猪群精神抑郁具有,攻击性,规模化场和中小规模的猪场表现的问题不同,规模化场,具有较强的处置能力与诊断能力,反复加强免疫,种猪,4,次,/,年，仔猪,3,次,/,年,加大剂量免疫,种猪,3,头份,/,次，仔猪,2,头份,/,次,实际效果：,注射时应激大，多次注射，操作麻烦；,可控制临床主要症状（如流产及仔猪神经症状等），但偶有干咳、腹泻等症状,120-150,日龄猪群转阳率高居不下。,中小规模场主要问题误诊为其他疾病,呼吸道症状和繁殖障碍（母猪流产、返情）容易误认为是蓝耳和圆环,伪狂犬引起的腹泻与,PEDV,症状相近，容易被经验所蒙蔽,检测中心二月份采集很多疑似,PEDV,的病料，最终检测结果为伪狂犬引起的腹泻,近年来伪狂犬发病率高，带毒率高，已成为危害我国生猪养殖的最重大疫病之一；,伪狂犬病在呼吸道、消化道、繁殖障碍类疾病中的病原检出率较高，部分症状与蓝耳和,PEDV,类似；,伪,狂犬变异株发病重要的特点：,必然的几个阶段：流产,-,木乃伊和神经症状,-,顽固性腹泻和育肥干咳,-,长期感染散毒导致育肥期猪群的死亡；,感染后的猪场呈亚临床发病，主要问题是仔猪顽固性腹泻和保育及育肥猪干咳,。,小结,三、如何利用实验室检测防控伪狂犬,常用的伪狂犬检测方法：,ELISA,：,gB,抗体，,gE,抗体,中和抗体检测,病原检测：普通,PCR,与荧光定量,PCR,病理切片,三、如何利用实验室检测防控伪狂犬,伪狂犬疫苗是少有的可通过抗体检测区分野毒和疫苗毒的疫苗,目前大多数伪狂犬疫苗是缺失,gE,基因的，因此疫苗免疫不会产生针对,gE,基因的抗体，因此可以通过鉴别诊断技术确定猪场的感染情况。,那么检出野毒抗体意味着什么？是不是猪群在发病或者仔猪感染？,野毒抗体检测的误区,阳性猪场检母猪的抗体,伪狂犬一旦感染终生带毒，野毒抗体持续为阳性母猪，不可能通过免疫将野毒阳性的母猪转阴，更不能因为母猪野毒抗体是阳性就判断猪场有问题；,阳性场,90,日龄之前的仔猪判断为伪狂犬感染,伪狂犬的母源抗体持续期长，母猪野毒抗体阳性仔猪必为阳性，但不能确诊为野毒感染；,野毒抗体检测的应用范围,接种,PRV HeN1,后，第,5,天部分猪,PRV gE,抗体开始阳转，第,7,天全部阳转,。,猪场检测PRV野毒是否正在流行应以检测后备猪,(14-18,周,),gE抗体为主，超过,15,%为正在流行,。,阳性的母猪可产出阴性的后备，通过这一指标可评价疫苗的保护效果,阳性场,野毒抗体检测的应用范围,野毒阴性场可用于监测,新引进种猪：凡阳性必淘汰，剩余公猪可反复间隔,2,周检测，均为阴性可用；,仔猪按日龄采血，确定猪场的感染阶段，采取针对性措施；,普通,PCR,和荧光定量,PCR,样品：扁桃体（持续带毒），肺脏（呼吸道症状），脑组织（神经症状），,鼻腔试子（育肥期检测），精液（如血清抗体,gE,阳性，必检）,感染压力评估时用荧光定量,PCR,误区：,伪狂犬的病毒血症期极短，血清样本往往检测不到病原；,公猪精液的病原检测容易被忽视,病原检测是测序的基础,病原检测的误区及应用范围,四、伪狂犬疫苗的作用及正确应用,1,、,伪狂犬病疫苗可有效保护强毒的攻击而免于临床发病。,2,、,弱毒疫苗的保护效果比灭活苗好且免疫持续期,长,3,、伪狂犬活苗注射免疫会受到母源抗体的干扰，滴鼻免疫是有效的免疫途径（,1,）不受母源抗体干扰；（,2,）建立黏膜免疫阻止病原经过呼吸道传播途径；,4,、伪狂犬的母源抗体持续期特别长，在感染压力比较大的场，为尽早肌注免疫，建议在妊娠中后期母猪不要免疫伪狂犬疫苗；,5,、伪狂犬是少有的几个可以做紧急免疫的疫苗，断奶后仔猪出现伪狂犬引起的干咳及腹泻症状或瘙痒症状，紧急注射伪狂犬可有效缩短病程和发病率；,6,、对育肥猪注射伪狂犬疫苗，特别是一点式猪场；,五、伪狂犬“五步转阴”法,伪狂犬温和净化的关键点,1,、疫苗株,要能有效压制散毒,-,不扩大感染压力,2,、快速产生主动保护,-,通过佐剂缩短空窗期,3,、阳性母猪可产阴性后备,-,阴性,后备补充,4,、控制公猪精液传播,-,预防再次感染母猪群,5,、按照产次自然淘汰,-,逐渐降低猪群的风险,6,、生物安全灭鼠工作,-,保卫,净化成果,7,、配套的检测方法,-,评估,猪场感染压力,感染压力分析,保证后备的阴性,阳性母猪随产次自然淘汰,定期抗体监测,1,2,3,4,5,伪狂犬“五步转阴”步骤,活跃度评估,压制散毒,后备净化期,稳定自然淘汰期,验收监测期,公猪淘汰及疫苗压制（包括育肥）、生物安全,野毒阳性数,/,样本数,野毒阳性率,后备母猪,34/43,79.07%,一产母猪,82/104,78.85%,二产母猪,45/58,77.58%,三产母猪,33/51,64.71%,四产母猪,16/26,61.54%,五产母猪,17/25,68%,六产母猪,26/47,55.30%,七产母猪,59/87,67.80%,种公猪,12/26,46.15%,母猪合计,332/441,73.02%,合计,344/467,73.66%,第一次种猪伪狂犬,gE,抗体检测情况,调整免疫程序后半年后检测数据,猪的种类,检验总数,抗体阴性数,抗体阳性数,野毒阳性率,后备母猪,192,（累计）,192,0,0,种公猪,25,16,9,36%,一产母猪,327,181,146,44.65%,二产母猪,188,37,151,80.32%,三产母猪,101,20,81,80.20%,四产以上母猪,82,23,59,71.96%,合计,915,469,436,47.65%,淘汰阳性种公猪后的结果,野毒阳性数,/,样本数,野毒阳性率,与净化前同产次比较,第一次配种母猪,3/89,3.37%,降,75.7%,一产母猪,10/116,8.62%,降,70.23%,二产母猪,23/132,17.4%,降,60.18%,三产,+,四产母猪（净化前零产）,167/264,63.3%,降,0.33%,五产母猪（净化前一产）,54/81,69.2%,六产母猪（净化前二产）,45/59,76.3%,七产母猪（净化前三产）,18/24,75.0%,八产母猪（净化前四产）,7/11,63.6%,后备母猪,1/49,2.04%,1,年后净化结果,野毒阳性数,/,样本数,野毒阳性率,与净化前同产次比较,预留后备母猪,0/124,0,种公猪,1/24,4.17%,降,41.63%,预留后备公猪,1/11,9.09%,生产后母猪,324/687,47.1%,降,22.74%,种母猪,327/826,39.58%,降,33.44%,净化后出生种猪（二产以前,及预留后备和后备母猪,）,37/510,7.25%,合计,330/984,33.5%,降,40.26%,2,年后净化结果,野毒阳性数,/,样本数,野毒阳性率,后备母猪（累计）,0/176,0,种公猪,0/25,0,20,日龄育肥猪,1/60,1.67%,60,日龄育肥猪,1/60,1.67%,一产母猪,0/178,0,二产母猪,2/153,1.31%,三产母猪,4/129,3.1%,四产母猪,5/135,3.7%,四产以上,27/82,32.93%,合计,40/1008,3.97%,加强型疫苗技术核心：,快速起效，免疫空窗期短,安全有效，保护时间更久,配套的检测技术：,评估感染压力，了解感染阶段,可鉴别可诊断，减少误判错判,转阴和净化成本：,不干扰生产秩序，不增加生产成本,成本可控，经济有效,第二阶段即达到减少伪狂犬床危害，最终达到转阴净化目的，降低远期风险,五步法转阴的优势,汇报,完毕,谢谢大家,