荧光pcr检测原理 powerpoint 演示文稿

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,荧光PCR检测原理,一、荧光信号的检测,荧光标记信号的产生,荧光标记基团在某波长的激发光刺激下，,产生一个更长波长的发射光,FRET？,某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为,FRET,。,荧光,信号,荧光染料,SYBR green,特异性结合双链，释放荧光信号,特异性荧光探针,Taqman,双荧光标记探针,molecular Beacon,荧光标记探针,荧光标记杂交双探针,Taqman,特异性荧光双标记探针,Taqman,53,外切酶活性,Molecular,beacon,荧光标记杂交双探针,二、典型的荧光PCR扩增曲线,阳性标本扩增曲线 阴性标本扩增曲线,Bio-rad iCycler扩增曲线,PE-5700扩增曲线,PE-7700扩增曲线,Roche LightCycler扩增曲线,三、Ct值,样本扩增曲线与阈值线交叉点的循环数,Ct值,四、荧光PCR定量的原理,Unknown,未知样本拷贝数的确定,五、荧光PCR区别于其他PCR方法,主要有以下优点,1) 全封闭反应，无需PCR后处理,2) 特异性强，灵敏度高,3) 采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确,4) 定量范围宽，可达到10个数量级,5) 仪器在线式实时监测，结果直观，避免人为判断,6) 可实现一管双检或多检,7) 操作安全，缩短时间，提高效率,8) 利于自动化和联网管理,