解读临床微生物学实验室建设基本要求专家共识

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,解读临床微生物学实验室建设基本要求专家共识,2017-11-10岳阳,1,实验室建设几个关注点,科学规划,精心设计,周全考虑,高起点,遵循标准,实验室设计在前，建设在后,尽量少留遗憾及缺憾,2,2,理念,安全性：符合生物安全需要、确保实验室人员及环境的安全,科学性：选址合理、布局规范、流程通畅、设计先进,功能性：功能齐全、满足需要,先进性：超前意识、高要求、空间上留有发展余地,可行性：经济状况,方便性：便于控制、便于操作、便于管理,舒适性: 体现人性化和人文关怀理念、营造舒适的检测环境,安全是前提,3,3,新建实验室依据,1、临床微生物学实验室建设基本要求专家共识,2、生物安全实验室建设技术规范（GB50346-2004）,3、实验室生物安全通用要求GB19489-2004）,。,4,4,5,实验室建设的内容,实验设施建设：实验室及配套建筑,实验室设备: 基本检测设备和发展设备、防护设备,人员建设：业务队伍（梯队、专业）、专业培训及技能演练,技术建设：技术引进、技术储备、技术研发,实验室管理体系建设：规范制度、奖惩、生物安全,6,6,临床微生物试验室建设基本要求,7,7,实验室建设要求,一、微生物安全实验室分级,根据实验室的设计特点、建筑结构和屏障设施等可将生物安全实验室分为四个安全防护等级，即生物安全防护水平一级（biosafety level,BSL-1）生物安全防护水平四级（biosafety level,BSL-4），BSL-1防护水平和隔离要求最低，BSL-4防护水平和隔离要求最高。BSL-1、BSL-2实验室属基础实验室，BSL-3实验室为屏障实验室，BSL-4实验室为高度屏障实验室。,但微生物实验室一般使用的是BSL-2级实验室，因此，这里需要对BSL-2实验室的建设问题重点讨论。,8,8,二、实验室建设的防护要求,生物安全实验室在平面布局上可通过分区物理隔离措施，将实验污染区和其它清洁区进行隔离，还有就是通过气流组织的方式，使实验室形成单向气流（负压梯度），即空气气流由清洁区向污染区方向流动，达到抑制感染性因子外泄的目的。,9,9,三、临床微生物实验室布局要求,1、安全原则：,毒性强、感染性高的专业实验室应及办公区域隔离，成独立或相对独立区域；病原微生物实验室等尽量设在人员流动少的区域（新建最好独立设置）,2、实验室流向：,由安全低毒实验室向高毒高感染性实验室过度，高度高感染性实验室应远离人员活动频繁区域，设在建筑物末端,10,10,3、人流物流通道尽量分开，人员进出通道和物品通道分开洁净物品及污染物品通道分开。,4、按检测功能进行相对分区，如分为标本处理、涂片镜检、分离培养、鉴定药敏、培养基制备和结果报告等区域。,5、 三级医院应有独立的分枝杆菌和真菌检测室。,11,11,6、实验室面积：,面积： 二级医院使用面积不低于60M2,三级医院使用面积不低于160M2,7、实验室走廊和门宽度：,门：1.1-1.5M； 留有设备门,12,12,二、建筑结构及设施要求,（一）建筑结构要求,微生物实验室对建筑物的可靠度和抗震设计方面没有特别明确的规定，根据国家GB 50346-2004生物安全实验室建筑技术规范中要求，实验室可采用窗户进行自然通风，但应设防虫纱窗。有防节肢动物设施。,13,13,微生物实验室的设计和设施方面的要求，除了满足BSL-2级实验室条件的基础上，还应符合以下要求：,1、实验室门禁的要求,能自动关闭的门禁系统,有可视窗,有防啮齿动物的设施,14,14,2、报警系统,火灾报警器（声、光报警）,停电报警,3、实验室的通风要求,1）可采用自然通风，但应有防虫纱窗,2）人工通风系统，对气流进行组织，形成定向气流，气流从洁净区向污染区方向流动，实验室排出的空气应经高效过滤器过滤后排出。,15,15,4、电源,1）有稳定可靠的电力供应，最好有双路供电或备用电源，保证生物安全柜、培养箱、冰箱等重要设备的正常运行。,2）有应急照明系统,3）有在黑暗中能辨别方向的标识,5、实验空间要求,有足够空间放置实验物品和器材的摆放，实验区域内有存放个人防护用品的条件。,16,16,6、层高要求,实验室层高方面应根据是否设立送排风系统和自然通风的方式有所不同，如果采用自然通风，实验室层高应以2.6-2.7M为宜，如实验室采用送排风（气流组织）的话，则以2.5-2.6M为宜，但同时应考虑设备技术夹层，其高度为1.2-1.5M或更高，保证送排风管道的铺设及检修。,17,17,7、地面及墙面要求,实验室地面需要考虑满足整体无缝隙要求，地面较多采用环氧树脂自流坪或PVC卷材。,实验室墙体可根据实验室专业要求及投入资金状况等选用表面吸附性小、易清洗、光滑平整的材料，有条件的可优先选用厚度薄、保温性好、施工方便、牢度有保障的新型轻质板材。,8、给排水要求,实验室对给水没有特别的要求，但对于实验室排水有比较严格的规定，特别是实验室的废水排放必须符合环境保护要求。要求实验室要设立独立的污水处理系统。,18,18,9、电力供应,在新建或改、扩建实验室时应充分考虑实验室用电负荷，留有足够的附和余量，为了保证仪器设备的正常供电，特别是确保关键设备的电力供应，有条件的应采取双路供电，不具备双路供电的应自备电源，必要时应有不间断电源（UPS）。,实验室用电量容量的设计应以现有实验室用电量的2倍进行估算。分户线宜适当放大，每个实验室都应设置配电盒，安装位置选在实验室入口处。,19,19,10、照明,实验室的照明可采用吸顶式密封防水设计，尽量减少积尘，光照要求不眩目、刺眼，光线柔和。照明包括：正常照明、应急照明和工作状态显示灯。应急照明应能保证30min的照明时间，便于实验人员安全退出实验室。,20,20,临床微生物实验室设备要求,21,21,（一）二级医院微生物实验室,基本配置设备,超低温冰箱（-60-80）、台式高速离心机、孵箱或二氧化碳培养箱（至少两个温度）、显微镜、普通冰箱、比浊仪、震荡器、涡旋器、移液器、紫外灯,有条件可配备的设备,血培养仪和半自动或全自动微生物分析仪等,22,（二）三级医院微生物实验室配备,血培养仪、自动微生物分析仪、浊度仪、CO2培养箱、细胞离心机、荧光显微镜等,有条件可配备的设备,自动染片机、标本自动接种仪、基因诊断平台（包括扩增仪、测序仪等）、冷冻干燥机,化学发光仪、酶标仪、洗板机等设备 、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪,23,23,实验室生物安全防护设备,实验室主要安全防护设备包括：生物安全柜、高压灭菌器、负压通风柜、紫外灯及相关的个人防护装备等。,24,24,1、生物安全柜,根据其正面气流速度，送、排风方式，将生物安全柜分成、级三个类型。可根据各实验室涉及的病原微生物的危害程度及实验室的级别进行选型。,25,25,2、高压灭菌器,高压灭菌器是实验室有毒有害污染废弃物无害化处理的主要设备，也是防止实验室废弃物中感染性物质外泄的关键设备。也是实验室必配的安全设备。,用于实验室废弃污染物消毒灭菌处理的高压灭菌器，建议采用蒸汽内循环的自动高压灭菌器，由于传统的排蒸汽式高压灭菌器在高压过程中需要向外排放冷空气，在排气时废弃物中的病原微生物会随冷空气一同排出，极易污染灭菌环境，导致感染事件，存在安全隐患。,26,26,高压灭菌器应选用品质优良，性能稳定，安全可靠的品牌，同时应定期进行校准和检测，确保高压灭菌器处于正常运行状态，保证实验室安全。,27,27,3、负压通风柜（罩）,负压通风柜（罩）主要功能是防止感染性检材在离心或开放性操作过程中感染性因子外溢导致环境污染或侵害实验人员。也是一种有效的物理抑制设备，要求在负压罩排风口要求安装高效过滤器，以捕获感染性物质，防止病原性感染因子外泄。,28,28,4、其它生物安全设备,除了上述生物安全防护设备外，在选购离心机、冷冻干燥器等实验设备时，也应尽量选择一些具有生物安全防护功能的设备或型号。如离心机可选配具有生物密封型转头或有负压过滤（高效过滤器）装置的机型，还有选择无火焰消毒灭菌灯（接种环或镊子等高温消毒）器材，以减少实验室污染的可能性。,29,29,5、洗眼器及喷淋装置,在实验室出口处应设置洗眼装置，必要时宜设置紧急喷淋装置，用于发生感染性材料溅入眼内或感染性物质污染实验人员外表时的应急处理。,便携式洗眼装置,固定式洗眼装置,30,30,6、个人防护装备,主要用于实验室操作人员的个体防护，主要有手套、口罩、帽子、防护服、防护眼罩、高筒胶靴及防护面罩等。,31,31,人员资质,二级医院微生物室至少有固定人员 人，建议 人及以上。,实验室负责人至少为中级技术职称，有临床医学或检验医学专业学习背景。,并有在三级医院微生物室进修个月以上的经历和 年以上临床微生物工作经验，且每年至少外出学习或进修培训次。,32,32,人员资质,三级医院微生物室至少有固定人员 6 8人，建议10人及以上。,实验室负责人至少为副高技术职称，有临床医学或检验医学专业本科或以上学历，有5年以上临床微生物工作经验。,每年至少外出学习或进修培训1次。,33,33,人员资质,进入微生物实验室工作的人员应经过专业技术、医院感染知识和生物安全培训。有颜色视觉障碍的人员不应从事涉及辨色的微生物学检验。,从事特殊岗位检验，如性病、结核菌和基因扩增检验的人员应通过相应的岗位培训，并具有上岗资格证,34,34,人员培训,微生物室专业组长应对新入岗人员进行培训、并定期（至少每个月1次）对在岗人员进行评估考核。,对由多个人员进行的手工检验项目（如显微镜检查、培养结果判读、抑菌圈测量、结果报告等）应进行人员比对（每个月1次） 。,35,35,检验技术（一）二级医院必备技术,染色镜检：能够进行革兰染色、抗酸染色、墨汁染色和乳酸棉酚兰染色等。,细菌培养：能够采用手工方法或血培养仪对血液及无菌体液进行增菌培养。 能够根据需要对各类标本进行普通细菌培养、苛氧菌培养、厌氧菌和真菌培养。,细菌鉴定：可采用全自动、半自动或手工方法对临床常见的需氧菌、兼性厌氧菌、苛氧菌和酵母菌鉴定到种或属的水平；对于厌氧菌可报告革兰染色性和细菌形态。,36,36,检验技术（一）二级医院必备技术,药敏试验：能够对临床常见细菌进行规范化的药敏试验，并报告敏感 中介耐药结果。,免疫学检测：根据临床需要和科室工作安排，可进行病原菌抗原或抗体检测。,37,37,检验技术（二）三级医院必备技术,染色镜检：除二级医院能开展的项目外，还能开展六胺银染色、免疫荧光染色（夹层杯）和其他特殊染色。,细菌鉴定：能够将分离的细菌（包括分枝杆菌、常见丝状真菌、厌氧菌）鉴定到种或属水平。,药敏试验：能够开展苛氧菌、厌氧菌和酵母菌的药敏试验。,38,38,检验技术（二）三级医院必备技术,非培养诊断技术：,根据临床需求可使用、基因测序、芯片、质谱等技术进行病原菌鉴定分型 耐药性检测和同源性分析。,可开展病原体血清免疫学检测、降钙素原、真菌-(1,3)-D-葡聚糖检测、真菌半乳甘露聚糖检测等项目。,39,39,质量和服务,检验申请单的设计和应用、标本采集的指导和培训。,标本运送：（）所有标本均应视为有潜在生物危险，运送过程中应防止溢出；（）应根据标本中的疑似病原菌选择适宜的运送培养基和保温措施；（）所有标本均应尽快运送（在内），特殊标本（如厌氧培养标本、脑脊液标本）应立即运送。,标本验收：）送检标本的容器是否为无菌、封闭、无泄漏；）标本类型是否及申请项目相符合（如痰液标本申请项目为厌氧培养，则为不合格）；（）肉眼观察标本性质是否合格；（）标本送检时间是否已超过允许范围。对不合格的标本应及时进行登记和反馈。,40,40,检验程序,染色镜检：,（）能够根据检验申请、标本类型及可疑的病原菌种类选择正确的染色方法（如怀疑隐球菌性脑膜炎，选择墨汁染色）。,（）对痰标本应进行涂片革兰染色，判断标本质量，观察细菌分布。,（）至少每周用已知的阳性和阴性质控菌株进行 次质控（若检测频率小于每周 次，则在实验当日进行质控） 。,41,41,检验程序,细菌分离培养：,（）能够根据检验申请信息、标本类型及可疑的病原菌选择正确的培养基和培养条件如培养温度、气体环境和培养时间）。,（）每一批培养基（包括自制或购买）均应进行质量和性能验证（无菌试验、生长试验、必要时做生长抑制试验和生化反应）。 记录培养基制备过程（仅对自制培养基）、生产日期、有效期、外观和性能验证结果。应在有效期内使用 。,（）能正确判别各类标本在培养基上生长的有意义的结果。,（）需要定量培养的标本（如尿液、肺泡灌洗液）应按要求接种，并进行菌落计数。,42,42,检验程序,细菌鉴定：,（）能根据细菌菌落形态和涂片染色结果选择适当的鉴定试验项目，并采用适宜的方法将细菌鉴定到种。,（）对细菌鉴定所需要使用的血浆凝固酶、触酶、氧化酶试验及诊断性抗血清等至少应在每个实验当日做阳性和阴性质控。,（）对细菌鉴定所需的其他生化反应试剂至少应在每一批次产品使用前做阴性和阳性质控，并在有效期内使用。,43,43,检验程序,药敏试验：,（）能根据本单位条件及所检测的病原菌种类选择纸片扩散法、稀释法、浓度梯度扩散法（ 试验）或自动化仪器法进行抗菌药物敏感试验。,（）试验过程应遵循标准化操作方法或制造商建议进行操作。,（）药物敏感性试验结果解释至少应遵循上一年度 CLSI药敏试验的判断标准。,（）使用自动化仪器进行药敏试验的实验室应按制造商的要求进行质控。,44,44,检验程序,药敏试验：,（）应定期（至少每年次）使用最新的CLSI文件标准对仪器的药敏试验判断折点进行评估，仅报告符合文件标准的抗菌药物药敏试验结果，对评估不符合要求（如药物稀释度不包括药敏判断折点、折点设置错误、检测结果偏离）的仪器应暂停使用，并及仪器供应商沟通。,（）使用纸片扩散法进行药敏试验的实验室应按要求对每一批号的药敏试验纸片进行质控，如果质控在控，则改为每周质控 次（若检测频率小于每周次，则应在每个检测日进行质控）。,45,45,检验后程序,能够对各类标本染色镜检和细菌培养鉴定结果进行及时准确的报告，并能进行结果解释，以及及临床进行良好的沟通。 有检验医师的微生物室，可发出“临床微生物检验诊断报告” 。,对各类标本培养阴性结果应进行规范报告：,1.如血液增菌培养报告“培养 无菌生长”,2.脓液、引流液、脑脊液、穿刺液等培养报告“培养 小时无菌生长”,3.咽拭子、痰液等报告“正常菌群生长”或“未分离出致病菌”,4.粪便或肛拭子等报告“未培养出志贺菌、沙门菌”或“未培养出霍乱弧菌”等。 。,46,46,检验后程序,血液、脑脊液、骨髓等无菌体液标本检出细菌（镜检或培养） 应分级报告，并按危急值报告和登记。,当鉴定出高致病性病原微生物（如布鲁菌、弗朗西斯菌）时，应按相关法规要求进行上报和处理。,短时间（ ）内在同一科室分离出 株或以上同种病原菌，或某种耐药菌分离率异常增高时应报告医院感染管理部门。 。,47,47,检验后程序,对药敏试验结果应按规定进行审核和报告，应特别关注天然耐药、罕见耐药菌株和特殊部位分离的病原菌药敏试验结果的审核和报告。,对医院感染管理规定监测的多重耐药菌要进行报告和预警。,应定期（至少每年次）对抗菌药物敏感性试验结果进行统计分析，并向医院感染部门和临床医师通报。,应参加全国或地区性的耐药监测 。,48,48,仪器设备质量控制和性能验证,1. 对冰箱、培养箱和水浴箱至少每日观察并记录次温度。,2. CO2培养箱应每日记录CO2浓度。,3. 紫外灯应每日记录消毒时间，应定期（每个月）监测紫外线强度并监测紫外灯消毒的效果。,4. 压力灭菌器应每次使用化学指示剂，每周使用生物指示剂监测灭菌效果。,5. 细菌浊度仪至少每个月应进行检定或校准次。,6. 生物安全柜的高效过滤器、气流和负压等参数，压力灭菌器的压力表以及卡尺、温度计、湿度计、移液器的准确性应定期验证、检定或校准。,49,49,能力验证,1. 按要求参加相应的能力验证室间质评。,2. 应对“不满意”和“不合格”的能力验证室间质评结果进行分析并采取纠正和预防措施。,3. 对没有开展能力验证室间质评的项目，应至少每个月及其他实验室（或其他试验方法）进行次性能比对评估试验。,50,50,临床微生物室属于二级生物安全实验室，应按照相关法规要求进行实验室设计和管理。,临床微生物室应定期（至少每年一次）进行生物安全风险评估。,应根据风险评估结果配备必要的生物安全防护设备，如生物安全柜、高压消毒灭菌器、紫外灯、应急灯、洗眼和喷淋设施。根据所配备的生物防护设备设施和个体防护能力明确规定本实验室所能开展的检验项目 。,生物安全,51,51,应根据风险评估结果对检验人员进行生物安全防护教育，并配备个人防护装备和用品（如手套、口罩、帽子、实验用鞋、防护服、防护眼罩等）。,二级医院不建议保存菌种（质控菌株和需要进一步确认的临床菌株除外），三级医院可以保存非高致病性病原微生物菌种，但应指定专人负责，应有存储、使用、转运、销毁记录。,实验中如遇到疑似高致病性菌（按照人间传染的病,原微生物名录），应立即向上级汇报，不要再进行后续的试验和标本处理。,对超过规定保存时间的标本和培养物应高压灭菌。,生物安全,序号,病毒名称,危害程度分类,实验活动所需生物安全实验室级别,运输包装分类f,备注,病毒培养a,动物感染实验b,未经培养的感染材料的操作c,灭活材料的操作d,无感染性材料的操作e,A/B,UN编号,英文名,中文名,分类学地位,Alastrim virus,类天花病毒,痘病毒科,第一类,BSL-4,ABSL-4,BSL-3,BSL-2,BSL-1,A,UN2814,52,52,谢 谢！,53,