药理学研究的科学训练

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,江西中医药大学,药 大,学,87,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,药理学研究的科学训练,科研全过程训练概况,专业课程、,专业,外语、统计学、文献检索、常用软件应用（Word, Excel, PowerPoint,图表制作软件，Photoshop, SPSS, etc）,阅读文献，确定课题（查阅文献能力）,设计实验,实验研究（取得初步结果，可以申请基金）,统计分析资料；,撰写论文,答辩、会议报告（Chinese, English）,2024/9/28,2,一、药理学研究的类型,根据研究目的分类,基础研究：受体、递质、蛋白质、神经通路、信号转导、基因,开发研究：围绕新药研发的药理学研究,应用研究：提高治疗效果、减少不良反应的临床药理学,2024/9/28,3,一、药理学研究的类型,根据研究内容分类,药效及作用机制研究,药动学研究,根据,研究方法,分类,实验研究,整体动物实验,离体器官、细胞实验,临床研究,2024/9/28,4,二,、,对科研素养的,要求,独立研究工作的基本能力,掌握信息, 复习文献的能力,科学实验设计能力,科学实验操作能力,科学论文撰写发表能力,科学基金申请能力,良好的素质，杜绝造假、剽窃,文章的可信率、实验的可重复率,2024/9/28,5,掌握信息, 复习文献的能力,如何针对课题复习文献,2024/9/28,6,1.,站在巨人肩上看世界,知识爆炸时代: 广博、交叉学科知识广博与深入、专业化间的矛盾开卷有益？,2024/9/28,7,2.,按科研需要来复习文献,充分占有文献,方向 专业人员水平,领域 专家水平,课题 No.1 专家水平,2024/9/28,8,2.,按科研需要来复习文献,文献分类,书,教科书: 相关, 交叉学科的基础知识,专著,编著 ( 资料性 ),著作 ( 文献性 )( 方向 ) ( 领域 ),综述,资料性 ( 方向 ) ( 领域 ),文献性 ( 领域 , 课题 ),Original paper 课题 领域 ( 个别 ),Data paper,快报 摘要,会议汇编,自己定位不要变, 别被文献牵着走,2024/9/28,9,3.,如何收集文献,检索,重要文献; 实验室或学者追踪; 确定本学科的重要( 核心 )期刊,分层次收集资料,课题有关文献;尽可能收集原著/快报;要新,全,本领域非课题文献;新综述,影响大的原著,本方向非本领域文献:经典专著/综述,不同方向相关知识:专著,教科书,2024/9/28,10,4.,如何看文献,精读与浏览,看懂:,问题的提出( Background ),目的,设计思想与依据,研究对象与方法,重要结果,结论与启示,熟悉程度,方向: 一般涉及;基础知识;学科水准;当前重大进展与趋势,领域: 了解焦点与热点;已/正/将进行的课题,课题: (全面) 历史 现状 展望；主要方法、手段,2024/9/28,11,5.,文献整理,运用自己专业知识,按照文献的热点与焦点,参照相关综述模式,例 TGF在肾纤维化中的意义 (作用) 背景知识 肾纤维化 TGF的理化特征 TGF的生成与代谢、组织分布等 肾纤维化病程中TGF的变化 血浆的和肾组织的，蛋白与基因表达 病程中的动态变化与临床病理生理表现 的（相关）关系,2024/9/28,12,5.,文献整理,参照相关综述模式, TGF的生物学（肾）效应：整体，器官，细胞及分子效应 外源或刺激内源TGF的效应（在正常和疾病条件） 拮抗或促失活的效应, TGF效应的机理 受体及细胞内信号转导机理 TGF的基因表达和细胞表型改变的机理, 肾脏疾病的TGF高/低表达的机理, TGF与其他已知肾纤维化因子间的关系（包括遗传易感因素）,2024/9/28,13,5.,文献整理, TGF参与肾纤维化发病的临床意义：,诊断，治疗，预防策略,此外，常用方法学和技术的整理 肾纤维化整体活离体模型；,相关细胞的培养；,细胞增殖表型转变；,胶元测定； TGF受体表达与活性检测,2024/9/28,14,6.,如何撰写文献综述,目的,学科带头人与学科骨干写,科研工作人员开题前写,科学情报人员写,研究生毕业论文(?),基层人员为写而写,文献性与资料性,大综述与小专论,2024/9/28,15,6.,如何撰写文献综述,小专论内容审定好内容与题目 (如上述例子)要有思路，有观点，提炼科学问题，要告诉读者什么？,概述 问题的提出-研究的历史与背景-本问题(课题)的意义,背景知识及相关基本知识 （不要写成教科书或讲义）,本专论要论述的主要内容,注意从课题与背景联系的学科高度分析,小结 存在的问题与今后的方向,2024/9/28,16,6.,如何撰写文献综述,资料处理,按专业知识列好提纲; 文献 (作的摘要)编号后按提纲归类,背景材料,基础知识,立论依据;权威甚或经典;“教科书式或讲义式”语言,不同意见,学术观点与资料如何处理,资料的准确性,尤其是翻译,讲不清楚不如不讲,老课题文献多,新课题文献太少,2024/9/28,17,6.,如何撰写文献综述,如何表达自己的学术观点: 评述? 自引? 逻辑分析,内容集中,目标明确,不要广证博引(与研 究生论文不同),参考文献: 新(5年内2/3); 背景材料,立论依据;权威经典;专论内容: 新,反映进展,可引会议,摘要及个人咨询,准确,发表: 刊登进展/综述的专业杂志(如“进 展”“国外医学”); 专业论文杂志;查阅国内类似综述有无,避免重复. 按杂志稿约修改(留底),2024/9/28,18,科学实验设计能力,2024/9/28,19,1.,实验设计的,三个基本原则,随机原则,排除实验者的主观性，使每个实验单位都有同等机会被分配到实验组和对照组。,重复原则,实验的取样例数或实验次数,2024/9/28,20,对照原则,并行对照,配对对照,自身对照,前后对照,2024/9/28,21,2.,研究,元,素,要准确,处理因素（自变量）,试验对象（人、动物；器官、组织、细胞、分子）,试验效应（因变量）,药物、方法和模型的关系,2024/9/28,22,3.,课题,目标要明确,原则: 目标明确;构思新颖;立论依据充分;实验方法恰当,选题 (科研目标,目的),目标具体:用实验手段解决科学问题,问题是什么,攻关，攀科学高峰，“关”、“高峰”是什么,在哪里? (目的与手段,工具的关系),射箭中的,忌打哪儿指哪儿，看看有什么变化，研究甚少，填补空白等。,“三定”基础上明确该课题的学科地位(与原创新关系);注意工作的积累和发展;可参考文献整理中发现的和未解决的问题；将确定的目标逐字推敲写下来。,2024/9/28,23,方法恰当(,不是越新越好,) 方法选择：目的决定方法选择；实验条件选方法；工作者熟练程度选方法；假设全部顺利，所得结果能否达到设计目标？,动物的选择：注意种属、品系、性别差异,给药方法：试药的溶解性、给药途径,实验水平：整体必做！,正常动物与,模型,动物,经典与新建；是否需与人一致或接近；可行性；模型与分组适合研究目的为原则,预防与治疗实验：尽可能做治疗实验,2024/9/28,24,比较实验：选阳性药做量-效关系，证实方法和模型可靠。,药效评价标准,量-效关系：量反应、质反应、时反应（潜伏期、持续时间）,时-效关系：药效难测时可用时-量代替,药-靶关系：药-配体、受体动力学、酶-底物、药-蛋白相互作用,观察指标,多（广）或少（精）好？明确每个指标的原理和意义,背景指标,如证实疾病模型复制成功的指标；反映质控的指标；反映阴性或阳性的对照指标等必须是肯定的结果,探索性指标,前瞻性指标,2024/9/28,25,药物效果,生物差异,实验技术,统计处理,两组例数相等;计量资料与计数资料；同体、配对、前后对比实验；特殊设计：拉丁方、正交、交叉设计,样本数估计的原理,2024/9/28,26,最佳剂量的探索,安全剂量的探索,由已知药物的效价比值来推算。,由剂量折算系数法计算出最大耐受量的等效剂量,剂量递增方案,2024/9/28,27,剂量递增方案,2024/9/28,28,多剂量实验中剂量间距的确定,整体动物：,1：3：9/1：2：4：8,离体实验：,1：10：100：1000,1：3：10：30：100,计算LD50或ED50的实验,0%及100%之间有36个剂量,2024/9/28,29,剂量换算,不同种属动物的剂量换算,2024/9/28,30,建立操作程序,落实每个方法,预试成熟，建立程序,设计实验记录与观察内容实验记录表；单项归纳表；汇总表,2024/9/28,31,预期结果阴性或阳性的解释与再证实；审定设计能否达到目标,预期结果追踪深入研究的方向和可行性,预期结果图表设计（发表是否单薄）,预期结果的学术价值和地位 （写论文的Introduction, M & M ）,2024/9/28,32,2024/9/28,33,怎样写好实验记录,2024/9/28,34,一般要求,记录本应事先印有页码，不得撕掉或挪作他用，即使写错了亦应如此。,封面或首页应写明科研课题名称，开始工作年、月、日，工作者姓名，每本记录前12页应留作写实验目录及页次之用，便于查阅。,所有数据，必须立即用不掉色的笔直接清晰地记录在记录本上，严禁用铅笔记录，因为容易退色和被涂改。如有写错不得涂改擦抹，必须改正时，可在错误处画道线或打，然后写上正确数据，并由课题负责人签字，防止弄虚做假。电脑测得的数据应输入电脑，自动打印，贮存，最好拷贝一份，以防丢失或损坏。,2024/9/28,35,2.认真、客观、全面,认真、客观、全面的记录。,格式和内容,实验方法,试剂称量,配制时间,气候,仪器设备动物,结果,2024/9/28,36,3.立即、直接、清晰,写记录的要求,立即,不能先记在心上，实验后补写记录，因为记忆有时不可靠。,直接,要直接写在记录本上，不能先写在纸条上，然后重抄，因为重抄有时抄错，有时甚至把纸条丢掉。,清晰,字体清楚，不要潦草，不要词不达意，自己能看懂，别人也看得清楚，今天清楚，日后也看得懂。自动仪器打印的数据、结果、图谱等必须将原件依顺序贴在记录本上，有条件的还可输入电脑保存。,2024/9/28,37,记录的内容,年、月、日。有的实验还应注明室温,实验名称,目的,材料,实验方法，应注明引用参考文献；,结果：包括原始数据，图，表，统计方法,讨论或小结,2024/9/28,38,药物效应的测量,2024/9/28,39,1.,药物-受体相互作用的测定,生化结合研究（全部受体）,功能研究（部分受体）,real time measurement,stop time measurement,2024/9/28,40,1种配体与3种不同受体群的相互作用,配体与受体结合的特异性是相对的，与药物浓度有关,2024/9/28,41,2.,放射受体结合研究,20世纪60年代，,125,I-ACTH、,125,I -血管紧张素;,基本原理：配基与受体特异性结合，以放射性强弱表示结合容量。,与放免分析相似（1955年发明，Yalow）,2024/9/28,42,放射配基结合过程图解,2024/9/28,43,已知药物浓度，可得到受体结合剂量-反应曲线,加入大剂量非标记配基，封闭受体，得到非特异性结合,相应公式计算非特异性结合、总结合,固定配基浓度，改变受体量,符合一级动力学：随时间增加，结合达最大值；能被无药物介质逆转,2024/9/28,44,受体结合研究时的平衡情形,2024/9/28,45,放射性配基结合实验中不同水平的特异性结合,2024/9/28,46,特别注意点,去除非特异性结合,在一定浓度的敏感“窗”内进行,2024/9/28,47,3.,功能性研究,测定功能性反应方法多样,经典生理反应,酶活性,第二信使水平,反应、表达产物测定,报告物质（酶、基因等）,2024/9/28,48,要求：,大的信-噪比：机体、仪器,基础状态稳定,办法：找出衰减规律,设对照（不常用）,也必须在稳定的“窗”内进行,2024/9/28,49,生物制备的稳定窗,2024/9/28,50,不同受体制备进行实验的前提,敏感性和反应性不变（实际不可能）,纠正系统不稳定性,平衡周期达稳态,对照,2024/9/28,51,移动基线对剂量-反应曲线的影响,2024/9/28,52,激动剂作用后指数性细胞死亡对剂量反应曲线的影响,2024/9/28,53,组织失去敏感性后，最大反应也丢失,一个系统不太可能充当不同组织间基础反应变化的良好对照,数据必须在稳定的“窗”内进行，避免继发作用,靠一个剂量得到的反应不能下结论,2024/9/28,54,生物制备反应窗,2024/9/28,55,剂量反应曲线形状的改变显示继发反应,2024/9/28,56,生物放大的基本原则,具有终端器官反应的细胞体系具有很大价值,2024/9/28,57,细胞代谢指示物氢离子从细胞释放调控示意图,2024/9/28,58,4.,药物反应的表述,基础与给药状态的差值,原发反应变异性较大,利用差值较好,有多种转换方法,2024/9/28,59,两种描述药物反应的方法,2024/9/28,60,生物制备剂量反应曲线误差范围,2024/9/28,61,实验数据的不同处理,直接反应以对数浓度作图,有较高精确性,药物反应减去基础值,降低反应测量误差,反应值以基础水平的百分数表示,变异大,以最大反应值的百分数表示,较好；需要较少的实验次数,2024/9/28,62,直接反应以对数浓度作图,2024/9/28,63,从,上,图显示的数据所计算的delta反应,2024/9/28,64,反应以基础值的百分率表示,2024/9/28,65,Delta反应以最大delta反应的百分数计算,2024/9/28,66,连续累积剂量反应曲线,2024/9/28,67,研究结果的表达,2024/9/28,68,一、研究文章的撰写,确定投哪本杂志,文章的质量与杂志的档次要相称,发表周期,2024/9/28,69,论文撰写基本格式与要求,Bacon: Writing makes an exact man.,2024/9/28,70,二、基本要求,值得研究,数据真实、经过统计学处理,按照国际科学界公认的格式编排,文体要好，含义确切、合乎逻辑,2024/9/28,71,1978年1月美、加、英医学期刊编辑：温哥华宣言,1991年 国际医学期刊编辑委员会修改Br Med J 1991; 302:338-341,1995年,人民军医出版社医学生物学文献方法学,2024/9/28,72,题目（title）,作者姓名（authors name）,作者单位地址（address）,摘要（abstract）,关键词（key words）,引言（introduction） Nature 例外,材料与方法（materials and methods）,结果（results）,讨论（discussion）,总结或结论（conclusion or summary）,致谢（acknowledgement）,参考文献（reference）,2024/9/28,73,题目（title）： 短！,具体；简洁：通常不超过20个字,确切；通常在论文写完后确定,“甲氨蝶呤加四物汤治疗白血病46例”,避免“关于 的研究、调查、分析、观察”,作者姓名（authors name）： 第一作者,correspondence; contributed equally,作者单位地址（address）,2024/9/28,74,摘要（abstract）,目的、方法、结果、结论。150250个字符，或不超过1000个英文字母。,关键词（key words）：37个。,引言（introduction）：,背景、本项研究的理论基础、为什么要进行此研究或提出假说。,全部论文的1/10左右篇幅。,引言的最后一句：目的。,2024/9/28,75,材料与方法（materials and methods）,动物：种类、数量、来源、性别、年龄、体重、饲养条件,微生物、细胞：种、型、株、系、培养条件,技术、方法的步骤、条件控制,仪器设备名称、产地、型号、精度,药品试剂来源、规格、纯度、配制、存放条件,计算机软、硬件来源; 采用的统计学手段,2024/9/28,76,正确、恰当地表达结果,文字叙述、图、表、照片、数据,文字图表互不重复,注意图、表的格式、各种单位的应用,连续性数据用线图，非连续性数据用条图,图注、表注，自明,用标准差SD,有效数字是标准差的1/3。,进位：四舍六入，五进单。,4045；200 g 15 g；不用mg%，而用molL,-1,。,2024/9/28,77,结果（results）,文字叙述、图、表、照片、数据,文字图表互不重复,注意图、表的格式、各种单位的应用,连续性数据用线图，非连续性数据用条图,图注、表注，自明,用标准差SD,有效数字是标准差的1/3。,进位：四舍六入，五进单。,4045；200 g 15 g；不用mg%，而用molL,-1,。,2024/9/28,78,讨论（discussion）,回答本文目的,发明、创新,发现、验证了什么？,对结果作分析，对预期结果以外现象的说明与解释,与过去及别人结果的比较及分析,交代不足之处,可以提出设想与建议,2024/9/28,79,讨论的禁忌,文献综述,重复叙述结果,隐瞒结果,以假设证明假设,以未知说明未知,循环推理，泛泛而谈,2024/9/28,80,总结或结论（conclusion or summary）,通常是讨论的最后一节的内容,严谨、精炼、准确、逻辑性强。,致谢（acknowledgement）,参考文献（reference）,写论文的依据,评论科学价值的重要依据,尊重别人的劳动,为读者深入探讨某些问题提供线索,2024/9/28,81,参考文献的格式,哈佛系统：采用按作者姓氏字母顺序排列。,角码数序系统（温哥华系统）：按引用顺序排。,不要怕退稿！,2024/9/28,82,科研标书的撰写,科学基金申请能力,2024/9/28,83,1.,定位,三定:,稳定,的,方向,定研究方向 很稳定,定研究领域 相对稳定,定研究课题 非常活跃,如何定位:,学科发展的前景与可行性,单位的可能条件,个人兴趣,2024/9/28,84,如何选题导师：给方向、提供条件、审阅文章、组织答辩（不同于technician）,根据导师的研究方向,基金资助情况,确有兴趣的探索可以做出开创性的工作,2.,选题,2024/9/28,85,创新构思,Idea的来源: 临床; 文献; 交叉学科启迪; (学科发展)自己工作的连续性， 避免被文献牵着鼻子走，或赶时髦; 新技术应用更重视新思维;交叉学科别交叉走了(转向),2024/9/28,86,设计思想合理,依据充分,提纲挈领,简明扼要,2024/9/28,87,谢谢观赏！,2020/11/5,88,