生殖发育毒性作用

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,生殖发育毒性,畸胎学（古代）,现代实验畸胎学（十九世纪）,发育毒理学（二十世纪）,第一节 概 述,Teratology (畸胎学) 来自于希腊语monster (怪胎) ，即 teras (畸胎) 。,1651年，William Harvey提出发育障碍学说：畸形起因于器官或结构的不完全发育,。,物理化学因素,鸡蛋,畸形小鸡：,神经管缺陷、无脑畸形、脊柱裂、独眼畸形、心脏缺陷等,作用时间,在决定畸形类型方面比损伤性质,更重要,。,致畸作用因素,电离辐射,化学物和药物,病毒细菌感染,吸烟酗酒,母体代谢失调,反应停(thalidomide)事件,孕妇的理想选择？,1953年，联邦德国一家名为ChemieGruenenthal的制药公司研究人员发现， 反应停（沙立度胺）具有一定的镇静安眠作用，而且 对孕妇怀孕早期的妊娠呕吐疗效极佳。,1957年10月1日该公司将反应停正式推 向市场。,当时反应停成了“,孕妇 的理想选择,” ，在欧 洲、亚洲、非洲和南美洲被医生大 量处方给孕妇以治疗 妊娠呕吐。,科学家们在研制反应停时，并没有料到这种药物会产生如此可怕的副作用。,令人恐怖的副作用,到了1960年，欧洲的医生 们开始发现，本地区畸形婴儿的出生率明显上升。这些婴儿有的是,四肢畸 形,(主要是双上肢的短肢畸形)，有的是,腭裂,，有 的是,盲儿,或,聋儿,，还有 的是,内脏畸形。,调查显示，在,第,34 50天,是反应停作用的敏感期。, 在此时间段以外服用反应停，一般不会导致胎儿的出生缺陷。,支付巨额赔偿金,1970年4月10日，案件的控辩双方于法庭外达成了和解，ChemieGruenenthal公司同意向控方支付总额1.1亿德国马克的赔偿金。,一、生殖发育毒性作用的特点和影响因素,（一）发育各阶段发育毒性作用的特点,1、,着床前期,2、,器官形成期,3、,胎儿期,4、,围生期和出生后的发育期,1、着床前期,事件：发生受精、卵裂、进入子宫腔、囊胚形成、原肠胚形成及着床。,时间：人类为受精后的第1112天；啮齿类动物为最初的天。,特点：此期受损的是早期胚胎的相对未分化细胞，可通过代偿性的细胞增生加以修补，不会产生局部缺陷，最多出现发育迟缓，若受损的细胞较多，可造成胚胎死亡，称为着床前丢失。也有例外，如小鼠妊娠第2.5天、3.5天和4.5天用甲基亚硝脲处理可造成子代神经管缺陷和腭裂。,这一发育阶段被称为,早期不易感期,。,2、器官形成期,事件：细胞增殖、移动和组合形成器官原基，即细胞结构开始分化，并逐渐形成不同的器官和组织。,时间：人类为第38周；啮齿类动物为第13周。,特点：此期细胞增殖分裂速度很快，组织器官生长旺盛，胚胎对致畸物特别敏感，细胞受损可导致结构畸形、生长迟缓或胚胎死亡。,这一发育阶段被称为,致畸敏感期,或,致畸作用危险期（critical period）,。,不同器官敏感期不同，且有交叉重叠。表现为：不同器官致畸高峰时间不同，此期内不同时间给予致畸物会诱发不同器官畸形，同一天染毒可引起多个器官受损。,人类胚胎的致畸敏感期,着床前期,器官形成期,胎儿期,1,3,6,4,5,2,12,11,10,9,8,7,38,20,中枢神经系统,心,耳,眼,上肢,下肢,唇,牙,腭,致畸敏,感度高,致畸敏,感度低,外生殖器,同一致畸物，给予时间不同，会产生不同的畸形。即同一剂量同种致畸物在敏感期中与胚胎接触，可因胚胎所处发育阶段不同而出现不同的畸形。,小鼠孕第8-12天的不同时间给予环磷酰胺，虽然均可引起足趾畸形，但是随着给药时间不同，分别出现多趾、并趾、缺趾、无趾。,大鼠静脉注射硝酸铅，第9.5天引起后部畸形，第10天可引起大鼠死亡。,事件：主要是组织分化、生长和生理学成熟。,时间：人类是从第56-58天起，直到分娩。,特点：胚胎的器官、系统的基本结构形成后，致畸物难以使之发生结构缺陷，通常是变形或异常而非畸形。,胎儿期接触外源性理化物质，很可能对生长和功能成熟产生效应，主要表现为：全身生长迟缓、特异的功能障碍、经胎盘致癌和偶见死胎。,3、胎儿期,此期接触外源性化学物质，主要表现在发育免疫毒性、神经行为发育异常和儿童期肿瘤。,围生期接触外源化学物，会严重影响胎儿T细胞、B细胞和吞噬细胞的发育、迁移、归巢及功能，可能暂时甚至永久性地损伤机体的免疫系统。,许多化学物质具有发育神经毒性，表现为对感觉、运动、自主和认知等方面的影响。,围生期是一生中对致癌物最敏感的时期,。,4、围生期和出生后的发育期,（二）生殖发育毒性的物种差异,发育阶段致畸效应的特异性,：,胚胎所处的发育阶段不同，对于致畸作用呈现不同的敏感性。有性生殖动物的着床前胚泡对致死作用较为易感，对致畸作用较差。在胚胎发育后期和新生儿期的发育毒性表现为:生长迟缓、神经、内分泌及免疫系统机能的改变。胎儿对致死作用的易感性较胚胎为低。,致畸的物种个体差异,：,任何环境有害因素的损害效应都存在物种品系及个体差异，在致畸作用中较突出。例如，杀虫剂西维因对豚鼠具有致畸作用，对家免和仓鼠并不致畸。农药敌枯双对大鼠致畸作用明显，但未得到人群调查的证实资料。同一物种不同品系对一种致畸物敏感性的差别很大，反应停和脱氢皮质酮都有这种现象。,可能由于同一致畸物在不同物种和同一物种的不同品系动物的代谢过程有一定差异；也可能由于致畸物主要是通过母体胎盘作用于胚胎，而不同物种动物胎盘构造也不相同。这些差异可能是由于遗传因素，即基因型差异。,为什么会出现物种及种间差异？,（三）生殖发育毒性的剂量反应关系模式：,A. 正常胎、生长迟缓和结构畸形同时存在，但较高剂量下几乎引起全窝胚胎死亡。这种类型较常见，此类化学物低剂量下主要导致生长迟缓，随剂量的增加，导致畸形和死胎。多为细胞毒性致畸物，包括烷化剂、抗癌药及很多致突变物。,B. 在远低于胚胎致死剂量下即可出现致畸，甚至全窝致畸，致畸胎儿常同时出现生长迟缓。当剂量增加到远远超过全窝畸形时才出现胚胎死亡，后者的剂量范围常常与明显的母体毒性剂量范围重叠。这种模式表示受试物有高度致畸作用，较少见，如沙立度胺、糖皮质类固醇等。,生殖发育毒性的剂量反应关系模式：,C. 只有生长迟缓和胚胎致死但没有畸形发生。往往生长迟缓先出现，曲线较平缓，较大剂量时才出现胚胎死亡，其曲线较陡，接近于“全或无”。表明胚胎存活有明显的界限。这类化学物，可被认为是有胚胎毒性（包括胚胎致死性）的，但不具有致畸作用。,生殖发育毒性的剂量反应关系模式：,二、母体毒性与生殖发育毒性,（,一）母体因素对生殖发育毒性的影响：,母体毒性：,化学毒物对受孕母体产生的损伤作用。,表现为增重减慢、功能异常、临床症状、甚至死亡。,母体因素对生殖发育毒性的影响,1、,遗传学：,母体的遗传结构是胚胎发育的一个决定因素。如唇腭裂的发病率白种人明显高于黑种人，主要原因在于母体，而非胚胎本身的基因结构。,2、,疾病：,母体受病毒感染、未控制的糖尿病等疾病，将会对胚胎产生影响。如怀孕前三个月，母体高热、病毒感染等均可能导致胎儿中枢神经系统畸形。,3、,营养：,母体蛋白质、热量、维生素、微量元素及酶的辅助因子缺乏将对胚胎产生影响。,4、,应激：,不同形式的母体毒性可能通过诱导生理学应激反应而产生发育毒性。,5、,对胎盘的毒性：,胎盘是母体和胚胎进行物质交换的结构，为胚胎提供营养、气体交换、废物排出。胎盘可产生维持妊娠关键的激素，而且能代谢和储存外源化学物。外源化学物既可透过胎盘进入胎儿体内，同时胎盘也可能是其作用靶点，或作为其储存库。,（二）母体毒性与胚胎毒性的关系,1、具有胚胎毒性，但无母体毒性,2、既有胚胎毒性，也有母体毒性,3、具有母体毒性，但不具有胚胎毒性,4、既无母体毒性，也无胚胎毒性,（一定剂量范围内）,三、父源性生殖发育毒性,父源性出生缺陷（paternal birth defect）,影响因素：遗传缺陷、年龄因素和外界暴露因素。,父源性暴露引起子代发育异常包括：流产、死胎、低出生体重、畸形、功能障碍等。,第二节 生殖发育毒性作用机制,1,、,不发育,(agenesis),由于某些重要的原基组织,(primordial tissue),不存在或缺乏邻近组织或前体组织的正常诱导而使原基组织不发生，结果某个器官或躯体部分发生或完全缺如。,2,、,发育不全,(hypoplasia),这种畸形常在名词前冠以“小”字，如小头、小眼等。此外，亦有软骨发育不全等。,3,、,发育受阻,某器官或结构发育至半途时受阻而停止，可分为四类：不合并,(non-fusion,）；,不分裂,(non-division,），,如动脉干永存；抑制迁移,(sup-pressed migration,）；,暂时性结构的保存,(persistence of transitory structure,），,如肛门闭锁、憩室等。,先天畸形的发生方式,4,、,相邻原基粘连,如马蹄肾，,或原基分裂,如分裂输尿管。,5,、,生长过度（,overgrowth,）,如多指、巨指或先天性角化过度等。,6,、,错位（,misplacement,）,如内脏错位等。,7,、,错误迁移（,incorrect migration,）,如卵巢迁移到外生殖器，并耳等。,8,、,不典型分化,(atypical differentiation,）,包括先天性肿瘤的形成、异位和分化。,9,、,返祖（,atavism,）,常见的有多毛、复乳等。,引发机制,1、基因突变与染色体畸变,2、干扰基因表达,3、细胞损伤与死亡,4、细胞凋亡,5、干扰细胞间的交互作用,6、通过胎盘毒性引起发育毒性,7、干扰母体稳态,8、内分泌干扰作用,第三节 生殖毒性试验与评价,外源化学物生殖毒性的评价需要四方面的资料：,环境流行病学资料,控制下的临床研究资料,动物生殖毒性试验资料,体外试验资料,作为一个新产品的登记与审批，主要根据前三类资料。在前三类资料中，首先是动物实验资料，因为大多数情况下新产品在上市前，还没有流行病学资料和控制下的临床资料。,一、动物生殖毒性试验,优点：,容易控制接触条件，控制接触动物的数量、年龄、状态以及选择检测效应指标（终点）。,缺点：,动物实验结果外推到人具有不确定性。,1、动物选择,试验中动物应选择：食性和对受试物代谢过程与人类接近，易饲养、易繁殖和价廉之外，还应特别注意妊娠过程较短、每窝产仔数较多以及胎盘构造与人类接近的动物。,试验可选用二种哺乳动物，一般首先考虑大鼠，此外为小鼠或家兔。,大鼠受孕率高，易于得到足够标本数，且大鼠对大多数外源化学物代谢过程、基本与人类近似。但不足之处是大鼠对一般外源化学物代谢速度很高，对致畸物耐受性强、易感性低，有时出现假阴性结果。,小鼠自然畸形发生率较大鼠高。对形成腭裂的致畸物更较为敏感。,家兔为草食动物，与人类代谢功能差异较大，妊娠期不够恒定，自然发生率也较高。,鸡胚也可进行致畸试验，可同时得到大量鸡胚，胚胎发育条件也较易控制。但鸡胚不是哺乳动物，缺乏受试物与母体的相互作用。,2、剂量分组,致畸试验一般应先进行预试验，找出引起母体中毒的剂量。一般用孕鼠810只，在妊娠516天内给予受试物。如出现较严重的母体中毒、流产或胚胎大量死亡，将剂量略为降低，直到找出引起母体轻度中毒一般症状的剂量。根据预试结果进一步确定正式试验剂量。,正式试验最少应设3个剂量组，另设对照组。,高剂量组,该剂量一般不超过LD,50,的1/5-1/3，应引起母体轻度中毒，即进食量减少、体重减轻、死亡不超过10%；,低剂量组,可以为LD,50,的1/100-l/30，不应观察到任何中毒症状；,中剂量组,可以允许母体出现某些极轻微中毒症状，其剂量与高剂量和低剂量成等比级数关系。,如果已掌握或能估计人体实际接触量，也可将实际接触量作为低剂量，并以其10倍左右为最高剂量。,急性毒性较强的受试物，所采用剂量应稍低，反之可较高。,接触受试物的方式与途径应与人体实际接触情况一致。大鼠和小鼠一般可自受孕后第5天开始接触受试物，每日一次，持续到第15天。如研究器官易感性，则应在上述期间增加动物组数，将受试物每日分别给予不同组的动物，根据畸形出现的情况，确定受试物的敏感时间和靶器官。,试验期间每天称取母鼠体重。根据体重增长，随时调整剂量，观察受孕动物的妊娠情况和胚胎发育情况。受孕动物的体重持续增长，表示妊娠过程及胚胎发育正常。,3、,实验终点检查,自然分娩前12日将受孕动物处死剖腹，取出子宫及活产胎仔，记录死胎及吸收胎。一般大鼠在受孕后第1920天，小鼠第1819天，家免在第29天。胎仔在临近出生期间，发育进展极为迅速。相差半日，发育情况即有显著差异，骨骼发育尤为显著。,孕鼠处死后，从子宫顶端依次取出其中活产幼仔、死胎以及吸收胎，并记录编号。,大鼠和家免还应取出卵巢，记录黄体数用来代表排卵数。,活产胎仔取出后，先检查性别，逐只称重，并按窝计算平均体重，然后进行畸形检查。,为保证哺乳机会，一般主张每窝保留8只幼仔，并尽量雌雄数量相等。,动物试验的缺点：,1、动物实验结果外推到人的不肯定性：,由于致畸作用存在种属差异和品系差异，故对一种受试物须多次重复同一实验，均出现一定畸胎发生率，才能认为畸胎发生与该受试物有关。,至少应能在两种以上实验动物的实验中都显示肯定能够的致畸作用才能可靠的推导于人。,但只要受试物在一种动物具有致畸作用，就应警惕它对人类具有的潜在危险性。,2、动物高剂量接触与人类实际低剂量接触的区别,阿司匹林和磺胺类药物,对大鼠有致畸作用，但这些药物人类已长期使用，并未发现肯定的致畸作用，可能是人所利用的剂量未达到可引发致畸的程度。,维生素A,常用作致畸的阳性对照物，给大鼠1000mg/kg剂量可引发畸胎，按此剂量推算，50kg体重的人每天应服用50ml的鱼肝油，才会产生致畸作用，而人类很难摄取如此大量的鱼肝油，故到目前为止，维生素A并未被列为人类的致畸物。,一定要考虑人类的实际接触剂量。此外更要重视流行病学的调查，设法收集接触者的流行病学及临床资料，只有将动物实验结果与流行病学调查资料结合起来，进行综合分析，才能得出正确的结论。,对大多数化学物质来说，,三段生殖毒性试验,设计通常是最适当的，关键因素是,各个生殖阶段之间不得有间隔,，即在三个有关联的阶段接触受试物的时期至少有一天的重叠，并能直接或间接地评价生殖过程的所有阶段。,生殖发育过程可分为6个阶段,A.,从交配前到受孕,：检查成年雄性和雌性生殖功能、配子的发育与成熟、交配行为、受精。,B.,从受孕到着床,：检查成年雌性生殖功能、胚胎着床前发育、着床。,C.,从着床到硬腭闭合,：检查成年雌性生殖功能、胚体发育、主要器官形成。,D.,从硬腭闭合到妊娠结束,：检查成年雌性生殖功能、胚体的发育与生长、器官的发育与生长。,E.,从出生到断乳,：检查成年雌性生殖功能、新生仔对宫外生活的适应性、断乳前的发育与生长。,F.,从断乳到性成熟,：检查断乳后的发育与生长，对独立生活的适应、达到完全的性功能。,三段生殖毒性试验,生育力和早期胚胎发育毒性试验（一般生殖毒性试验）,胚体-胎体毒性试验(致畸试验),出生前后发育毒性试验(围生期毒性试验),三段生殖试验图解,.,生育力和早期胚胎发育毒性试验（一般生殖毒性试验）,.,胚体-胎体毒性试验（致畸试验）,.,出生前后发育毒性试验（围产期毒性试验）,1、生育力和早期胚胎发育毒性试验 （一般生殖毒性试验）,研究目的,：评价化学毒物对配子发生和成熟、交配行为、生育力、胚体着床前和着床的影响。,实验动物,：至少一种，首选大鼠。每组雌雄各1620只（窝）。,给药时间,：交配前雄性4周，雌性2周，交配期（23周），雌性着床前（大鼠孕6天）。,终末处理,：雄性证实交配并使雌性受孕成功后处死，雌性在受孕1315天终止妊娠。,观察指标,雄性,：饮水量、摄食量、体重变化、睾丸、附睾重量及脏器系数、附睾精子计数、活动度和形态观察、生育率、睾丸附睾病理组织学检查；,雌性,：饮水量、摄食量、体重变化、一般健康状况及死亡数、交配行为、受孕率、卵巢和子宫组织学检查；,孕鼠,：妊娠体重变化，处死后检查黄体数、着床数、吸收胎、死胎和活胎数。,结果评定,：F0代和F1代毒性及NOAEL，考虑各组受影响的窝数等。,2、胚体-胎体毒性试验 （致畸试验）,研究目的,：评价母体自胚泡着床到硬腭闭合期间接触受试物对妊娠雌性和对胚体-胎体发育的有害影响。,实验动物,：通常两种，啮齿类首选大鼠，非啮齿类可选家兔，每组雌雄各1620只（窝）。,给药时间,：大鼠、小鼠孕615天，家兔孕618天。,终末处理,：妊娠结束前一天处死，胎仔一半茜素红染色，观察骨骼，另一半Bouins液固定，观察内脏。,观察指标,母体,：体重变化、中毒症状、黄体数、着床数、吸收胎、早死胎、晚死胎和活胎数、胎盘重量；,胎仔,：性别、体重、身长、外观畸形、内脏畸形、骨骼畸形和发育情况。,结果评定,：母体毒性及NOAEL，胚胎毒性、致畸性及NOAEL。,3、出生前和出生后发育毒性试验,（围生期毒性试验）,研究目的,：研究母体自着床至断乳期间接触化学毒物对妊娠哺乳母体、孕体及子代发育直至成熟的有害影响。,实验动物,：至少一种，首选大鼠，每组雌雄各1620只（窝）。,给药时间,：雌性从着床到哺乳期结束，大鼠孕15天至产后28天。,终末处理,：断乳后处死母体和部分幼仔，每窝选8只抚育到性成熟并交配，评价生育力的F1代在F2代出生后处死。,观察指标,母体,：饮水量、摄食量、体重变化、中毒状况及死亡率、妊娠分娩时间、产仔数、受孕率；,F1代,：性别比例、外观畸形、出生存活率、哺育存活率、生长指数，生理发育和断乳前神经行为检测；哺乳后处死检查主要脏器及睾丸附睾或卵巢子宫重量、内脏畸形；断乳后行为测试，交配行为及受孕率。,结果评定,：母体毒性及NOAEL，胚胎毒性、致畸性、子代神经行为影响及NOAEL。,观察指标,：,受孕率（）,:,反映雄性动物生育能力以及雌性动物受孕情况,正常分娩率（）,:,反映雌性动物妊娠过程是否受到影响,幼仔出生存活率（）,:,反映雌性动物分娩过程是否正常,幼仔哺育成活率（）,:,反映雌性动物授乳哺育幼仔的能力,性别比,生育指数：受孕雌鼠,/,同笼雌鼠,除上述指标外，还应该注意出生幼仔是否有畸形存在，对死亡的幼仔应进行畸形检查，可为下一步致畸试验提供参考,生殖毒性及其评定,生殖毒性的评价,生殖毒性试验的特殊性,毒性表现形式的多样性、延续性和滞后性,动物交配和分娩时间的非同步性,多层次分组（给药组及检测指标亚组）,统计数据的多样性,窝效应和窝大小的不均一性,数据采集、处理和分析的准确可靠性,计算机管理系统,（二）体内预筛试验（C.K试验）,又名生殖发育毒性筛选试验,依据：大多数出生前受到的损伤将在出生后表现为存活力下降和或生长障碍。因此在仔鼠出生后，观察其外观畸形，胚胎致死，生长迟缓等发育毒性表现，而不进行传统常规试验中内脏和骨骼的检查，就可达到筛选的目的。,优点：所用动物少，检测终点少，实验周期短，能提供有关化学物对生殖和或发育可能发生影响的初步信息。,1、化学物致畸潜力分类和安全系数确定,根据动物试验中发育毒性效应的类型、严重性和发生率将化学物分为四类，并规定各类型的不同的安全系数范围，用以评定待测物发育毒性的危险度。,国际生命科学院(International Life Sciences Institute,ILSI) 提出,2、ICH人类用药危险度分类:,ICH：人用药品注册技术要求国际协调会。,ICH 在研究设计中规定：被批准的新药要根据动物发育毒性的研究结果和从人类使用经验得到的信息，将该药品在妊娠用药类别中定位，并要求医生在开处方时遵守，以使怀孕妇女按规定使用这些药品。,A、B、C2：仅在如果明显地需要时，在怀孕期间可使用。,C1：仅在如果证明可能的效益与对胎儿的可能的危险比较是可,取时，在怀孕期间可使用。,D：如果在怀孕期间使用，应通知病人对胎儿可能的危害。,X：在怀孕或可能怀孕的妇女中禁止使用。,3、根据动物试验人群调查资料对致畸物分级,根据欧共体（EEC）和经济与发展组织（OECD）建议,4、确认人类致畸物的标准,(1)一种特殊的缺陷或几种缺陷并发(综合征)频率突然增加。,(2)缺陷的增加与某种已知的环境改变相交联，如一种新药的广泛使用巧合。,(3)已知在妊娠的特殊阶段暴露于接触环境的改变，产生有特征性缺陷的综合征。,(4)缺少妊娠时引起特征性缺陷婴儿产生的其他共同的因子。,已知的人类致畸物,电离辐射：,放射治疗、放射性碘、原子武器,感染：,风疹、巨细胞病毒、单纯性疱疹、梅毒、弓形体病毒,代谢失调：,克汀病、糖尿病、苯丙酮酸尿、男性化肿瘤、高温,药物和化学品：,反应停、 Abameetin、 酒精、 氨基蝶呤、 雄性激素、麻 醉剂、抗甲状腺药物、白消安、咖啡因、氯代联苯类、香豆素抗凝剂、环磷酰胺、二已基乙烯雌酚、敌螨普、三氟氯溴乙烷 、异维A酸、锂、甲巯咪唑、有机汞化合物、有机溶剂类、苯妥因、腐霉利、四环素、三甲恶唑烷二酮、丙(基)戊酸,黄芪甲苷对SD大鼠和 兔致畸性的研究,前 言,黄芪甲苷是黄芪的重要生理活性成分，常作为黄芪药材的定性定量指标。,降压消炎，镇静镇痛，影响血清和肝脏蛋白质合成，影响血浆cAMP及再生肝DNA合成，促进NK细胞(自然杀伤细胞)活性及抗肝损伤,为提高该功能因子在食品中应用的安全性，了解黄芪甲苷是否具有胚胎毒性、胎儿毒性和致畸性。,采用啮齿类和非啮齿类两类动物，对其进行了致畸敏感期毒性试验，为该功能因子的毒性评价提供临床前资料。,受 试 物,名 称：黄芪甲苷（原料药）,批 号：030510,剂 型：淡黄色液体，10mg/ml,溶 剂:生理盐水1/4稀释的1:1丙二醇:乙醇,材料与方法,实验动物,SD大鼠:,购自军事医学院实验动物有限公司，动物许可证号：SCXK（津）20030002，,孕兔:由天津医科大学提供，动物合格证号： SCXK（津）20030008,材料与方法,剂量选择,SD大鼠：0.25,0.5和1.0 mg,kg,-1,体重3个剂量组，每,组至少20只孕鼠，于GD6GD15按10 mlkg体重连,续尾静脉注射给药。,兔：0.5,1.0和2.0mgkg,1,。 每组12只以上孕兔。于,GD8-GD17连续耳缘静脉给药。,溶剂对照组：生理盐水1/4稀释的1:1丙二醇:乙醇,材料与方法,试验方法: 大鼠标准致畸试验和兔致畸敏感期试验,观察指标: 给药期间观察一般毒性，分娩前一天剖,杀动物（大鼠GD20,兔GD30），观察母体孕期体重变,化,黄体数、活胎率、死胎率、吸收胎率，胎儿身,长、体重和胎盘重,胎儿外观和内脏畸形、以及骨骼,的发育情况。,统计学方法: 应用SPSS 统计软件，均数的比较用方,差分析。,材料与方法,黄芪甲苷对母体的影响,孕期增重:GD20体重与GD0体重的差值，,SD大鼠：1.0 mg,kg,-1,剂量时孕鼠增重与对照组比,较明显降低，差异具有统计学意义。这说明在此剂,量下黄芪甲苷对SD大鼠有一定的母体毒性。,新西兰兔：黄芪甲苷在0.5mgkg,1,，1.0mgkg,1,和，2.0mgkg,1,剂量下孕期增重与对照组比较差异,无统计学意义。对新西兰兔无母体毒性,结 果,黄芪甲苷的胚胎毒性,活胎率、死胎率和吸收胎率,SD大鼠：在1.0 mgkg,1,剂量时活胎率和死胎率与对照组比较差异具有统计学意义，表现为活胎率降低和死胎率升高，表明在1.0 mgkg,1,剂量时对SD大鼠有一定胚胎毒性。,结 果,新西兰兔：,各受试剂量下活胎率与对照组比较均有差异具有统计学意义，表现为各剂量组活胎率降低，中、低剂量下吸收胎率和高剂量下死胎率升高，与对照组比较有差异具有统计学意义，表明黄芪甲苷在受试剂量下对新西兰兔具有一定的胚胎毒性。,黄芪甲苷的胎儿毒性,胎儿身长、体重和胎盘重,SD大鼠：,胎鼠身长在受试剂量下与对照组比较差异无统计学意义；在0.25 mgkg,1,和0.5 mgkg,1,剂量组胎鼠体重和胎盘重略低于对照组，但无明显剂量反应趋势；表明黄芪甲苷在受试剂量下对胎鼠无胎儿毒性。,结 果,胎兔：,在受试剂量下体重、身长和胎盘重与对照组比较差异无统计学意义；表明黄芪甲苷在受试剂量下对胎兔无胎儿毒性。,黄芪甲苷对胎儿骨骼发育的影响,观察了胎儿的尾椎数、骶椎数/荐椎数、胸骨节数、掌骨数、近端指骨数、远端指骨数、跖骨数、近端趾骨数、远端趾骨数、胸骨骨化不全和胸骨缺失的情况。,结 果,发现在受试剂量下，胎鼠和胎兔尾椎数、骶椎数、胸骨节数、掌骨数、近端指骨数、远端指骨数、跖骨数、近端趾骨数、远端趾骨数、胸骨骨化不全和胸骨缺失与对照组比较差异无显著性，表明黄芪甲苷在各受试剂量下对胎鼠和胎兔的发育明显无影响。,黄芪甲苷的致畸性,胎鼠：,在受试各剂量组均未观察到明显的骨骼、外观和内脏畸形。,胎兔：,对照组、低剂量组和高剂量组出现外观畸形，对照组和高剂量组有一只出现内脏畸形。,但外观畸形、内脏畸形和骨骼畸形率与对照组比较均无显著性差异。,黄芪甲苷对SD大鼠和新西兰兔无致畸作用,结 果,中剂量组：脑外观肿胀，前肢内翻,右前肢外翻，左前肢内翻,腹部膨隆，打开腹腔后发现胃内有大量积液,高剂量组：左右心室肥大,结 论,母体毒性：,研究结果表明，黄芪甲苷在1.0 mg,kg,-1,以上剂量,时对SD大鼠具有一定的母体毒性，而对新西兰兔在受试剂量,下均无母体毒性出现。表明在母体毒性方面对SD大鼠较敏感,胚胎毒性：,SD大鼠在1.0 mg,kg,-1,以上剂量时出现活胎率降低,死胎率增高现象，而新西兰兔在0.5 mg,kg,-1,剂量时即出现胚,胎毒性，两种种属的动物均出现胚胎毒性，这表明黄芪甲苷,对胚胎毒性方面较敏感。,