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2.2,动物细胞工程,考纲,考情,三年16考高考指数：,1.动物的细胞培养与体细胞克隆,2.细胞融合与单克隆抗体,三年,考题,2014年(3考)：新课标全国卷T40，浙江T3，福建T33,2013年(6考)：山东T35，江苏T13，福建T33，浙江T6，海南T31，重庆T2,2012年(7考)：山东T35，江苏T9、T22，广东T2，福建T32，浙江T31，安徽T31,考情,播报,1.考查内容：主要是动物细胞培养、细胞融合和单克隆抗体的制备及应用。,2.考查方式：单独考查动物细胞融合和动物细胞培养技术；常结合制备单克隆抗体过程考查原理的应用，还可与基因工程和胚胎工程综合考查。,3.考查题型：以非选择题为主，属中档题。,【知识梳理】,一、动物细胞培养,1.操作流程：,组织 单个细胞的悬浮液,_培养 _培养,原代,传代,2.培养条件：,(1)无菌、无毒的环境：对_和所有培养用具进展无菌处理，,添加_，定期更换培养液以_。,(2)营养：除正常的有机和无机营养外，参加_等一些,天然成分。,(3)适宜的温度和pH：温度为_(哺乳动物)，pH为,_。,(4)气体环境：含95%空气加_的混合气体，其中后者的作用是,_。,3.应用：生物制品的生产，检测_，医学研究。,培养液,抗生素,去除代谢产物,血清、血浆,36.50.5,7.27.4,5%CO,2,维持培养液的pH,有毒物质,二、动物体细胞核移植技术和克隆动物,1.动物核移植：将动物一个细胞,的_移入一个已经去掉细胞,核的_中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚,胎最终发育为_。,细胞核,卵母细胞,动物个体,2.过程：,3.原理：动物体细胞核具有_。,4.结果：获得与供体_根本一样的个体。,5.克隆动物：用核移植方法得到的动物。,全能性,供体细胞培养,遗传物质,去核,重组细胞,胚胎移植,供体,三、动物细胞融合,1.原理,：_。,2.融合方法：聚乙二醇(PEG)、_、电激等。,3.意义：突破了_的局限，使_成为可能，,也为制造_开辟了新途径。,细胞膜的流动性,灭活的病毒,有性杂交方法,远缘杂交,单克隆抗体,四、单克隆抗体,1.制备过程：,杂交瘤细胞,能分泌所需,抗体,2.优点：特异性强、_，并可大量制备。,3.用途：作为_，用于治疗疾病和_。,灵敏度高,诊断试剂,运载药物,【速记卡片】,1.动物细胞培养过程：,(1)分散细胞方法：组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。,(2)生长特点：贴壁生长、接触抑制。,(3)分瓶。,(4)原代培养：动物组织消化后的初次培养。,(5)传代培养：分瓶继续培养。,2.动物细胞培养的条件：,(1)无菌、无毒的环境。,(2)营养：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。,(3)温度和pH：与动物体温相近，pH为7.27.4。,(4)气体环境：CO,2,的主要作用是维持培养液的pH。,3.动物细胞融合：,(1)原理：细胞膜的流动性。,(2)融合方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。,4.单克隆抗体制备：,(1)涉及的三种细胞作用不同。,B淋巴细胞：能分泌单一抗体，但不能无限增殖。,骨髓瘤细胞：能大量增殖，但不能产生抗体。,杂交瘤细胞：既能产生单一抗体，又能大量增殖。,(2)两次筛选的目的不同。,第一次筛选是得到杂交瘤细胞。,第二次筛选是得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。,考点一植物组织培养、动物细胞培养和细胞核移植,1.三者比较：,项目,植物组织培养,动物细胞培养,动物体细胞核移植,原理,植物细胞的,全能性,细胞增殖,动物细胞核的全能性,关键,环节,细胞的脱分化和再分化,细胞增殖和癌变,细胞核融合、细胞分化,项目,植物组织培养,动物细胞培养,动物体细胞核移植,结果,与外植体相同的个体,相同分化程度的细胞群,获得克隆动物,应用,植株快速繁殖,脱毒作物苗的培养,人工种子,细胞产物工厂化生产,转基因植物的培育,生产生物制品,医学研究,检测有毒物质,加速良种繁育,保护濒危物种,生产医用蛋白,作为异种移植的供体,用于组织器官的移植,2.动物细胞核移植的疑难解析：,(1)卵母细胞选择时期及原因：M中期的卵母细胞，此时具备受精能力，细胞质中合成与分裂、分化有关的物质能刺激融合后重组细胞进展分裂分化，形成重组胚胎。,(2)选卵细胞作为受体细胞的原因。,卵细胞大，易于操作。,卵黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。,能激发重组细胞分裂分化。,(3)供体细胞：取供体动物的体细胞培养，一般选用传代10代以内的细胞，因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型，保证了供体细胞正常的遗传根底。,(4)动物体细胞不能经培养直接发育成完整个体的原因：动物体细胞的全能性受到限制。,(5)该过程用到的技术手段：动物细胞培养、动物细胞融合、早期胚胎培养和胚胎移植。,【高考警示】,动物细胞培养和核移植技术的理解误区,(1)动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶的作用不同：第一次用胰蛋白酶处理剪碎的组织使之分散成单个细胞，第二次使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来。,(2)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本可能不同。,克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本，与植物组织培养不同(来自一个亲本)，即克隆动物遗传物质来自两个亲本。,在发育过程中可能发生基因突变、染色体变异导致性状改变。,外界环境条件的影响引起不可遗传的变异。,【考题回访】,1.(2021 银川模拟)答复以下有关动物细胞培养的问题：,(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞外表_,时，细胞会停顿分裂增殖，这种现象称为细胞的。,此时，瓶壁上形成的细胞层数是。要使贴壁的细胞从瓶壁上,别离下来，需要用酶处理，常用的酶是。,(2)随着细胞传代次数的增多，绝大局部细胞分裂停顿，进而出现,的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有,些细胞会因遗传物质发生改变而变成细胞，这种细胞,的黏着性，细胞膜外表蛋白质(糖蛋白)的量。,(3)用某种大分子染料对细胞进展染色时，观察到死细胞被染色，,而活细胞不染色，原因是_,_。,(4)检查某种有毒物质是否能改变细胞染色体的数目，最好选用分裂到期的细胞用显微镜进展观察。,(5)在细胞培养过程中，通常在条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中的活性降低，细胞新陈代谢的速率降低。,(6)给患者移植经细胞培养形成的皮肤后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤当作进展攻击。,【解题指南】解答此题需明确三个方面：,(1)细胞贴壁生长与接触抑制。,(2)胰蛋白酶和糖蛋白的作用。,(3)器官移植与排斥反响。,【解析】(1)在动物细胞培养过程中，细胞会表现出接触抑制现象，此时是单层细胞。用胰蛋白酶处理可以使贴壁的细胞从瓶壁上别离下来。,(2)随着细胞传代培养代数的增多，绝大局部细胞分裂停顿，进而出现衰老甚至死亡的现象，但极少数细胞可以连续增殖，有些细胞会因遗传物质改变而变成不死性细胞，这种细胞细胞膜外表糖蛋白减少，细胞黏着性降低。,(3)由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，而死细胞的细胞膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色。,(4)由于细胞分裂中期染色体形态固定、数目清晰，因此最好选用分裂到中期的细胞用显微镜观察染色体数目。,(5)由于在冷冻、超低温或液氮条件下，细胞中酶的活性降低，细胞新陈代谢的速率降低，通常在此条件下保存细胞。,(6)机体把移植的皮肤当作抗原攻击，会发生排斥现象。,答案：,(1)相互接触接触抑制单层(或一层),胰蛋白酶(2)衰老甚至死亡不死性降低减少,(3)活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色(或死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色),(4)中(5)冷冻(或超低温、液氮)酶(6)抗原,2.(2021 安徽名校联考)如下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病(基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素)的过程设计图解，请据图答复以下问题：,(1)图中、所示的构造分别是、。,(2)图中、所示的生物工程技术分别是、,，此外图示过程还应用的工程技术有_(只需写一种)。,(3)过程通常用去核卵母细胞做受体细胞的原因除了它体积大、,易操作外，还因为。,(4)过程通常用作受体细胞的原因是这些细胞没有分化，,具有,，可以定向诱导分化成各类细胞、组织和器官。,(5)过程的完成需要用到的基因操作工具有,。,(6)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是,。,【解析】,图中依次为细胞核、内细胞团、核移植技术、转基因技术。图中涉及的技术包括核移植技术、早期胚胎培养(动物细胞培养)、转基因技术、胚胎干细胞移植等。,答案：(1)细胞核内细胞团,(2)核移植技术转基因技术细胞培养(早期胚胎培养、胚胎干细胞移植、显微操作技术等),(3)营养物质丰富且含有促进细胞核全能性表达的物质,(4)全能性,(5)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体,(6)没有排斥反响,【加固训练】现有A和B两个肉牛品种，A品种牛的细胞组成可表示为,A细胞核、A细胞质，B品种牛那么为B细胞核、B细胞质。,(1)如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A细胞核和B细胞质组成，基,本步骤是：从A品种牛体内取出体细胞，进展体外培养，然后再从培,养细胞中取出注入B品种牛的卵母细胞，经过某种,刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为，将该胚胎移,入代孕母牛的中，通过培育可到达目的。,(2)克隆牛的产生说明具有全能性。克隆牛的性状主要表现,品种牛的特征。由A、B两品种牛杂交得到的牛与克隆牛相,比，杂交牛细胞核的遗传物质来自个亲本，细胞质来自,性亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成(填“相,同或“不同)。,【解析】(1)依据题意可知，要获得由A细胞核和B细胞质组成的重组细胞，就要提取A细胞核然后与去掉细胞核的B细胞质进展重组，得到重组细胞，进一步培养得到重组胚胎，再进展胚胎移植，移植到代孕母牛的子宫里进展培育。,(2)克隆动物利用的是动物细胞细胞核的全能性，得到的新个体的性状主要由细胞核决定，与供核母牛的性状根本一致，杂交牛是由精子和卵细胞融合得到受精卵，细胞核来自两个亲本，由于精子含有很少的细胞质，受精卵的细胞质主要来自卵细胞，所以杂交牛和克隆牛的遗传物质是不同的。,答案：,(1)细胞核去核重组胚胎子宫,(2)动物体细胞核A两雌不同,考点二动物细胞融合、单克隆抗体,1.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较：,比较,项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原理,细胞膜的流动性、细胞的全能性,细胞膜的流动性、细胞的增殖,融合前,处理,除去细胞壁,使细胞分散开,使用,的酶,纤维素酶和果胶酶,胰蛋白酶,比较,项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,诱导,手段,物理法：离心、电激、振动,化学法：聚乙二醇等试剂诱导,除物理法和化学法外，也可用灭活的病毒诱导,结果,杂种植株,杂交细胞,应用,培育植物新品种,主要用于制备单克隆抗体,意义,突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合,相同点,原生质体融合原理相同，原生质体融合的方法相似,2.单克隆抗体的制备：,【高考警示】植物体细胞杂交和动物细胞融合过程中所选酶和结果的辨析,(1)植物体细胞杂交与动物细胞融合中酶的作用对象不同，纤维素酶和果胶酶作用于细胞壁，而胰蛋白酶作用于细胞间的蛋白质。,(2)植物杂交细胞在激素诱导下能表达出全能性，但动物杂交细胞的全能性不能表达。,(3)取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原，否那么不能获得单克隆抗体。,【考题回访】,1.(2021新课标全国卷)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反响的血清最大稀释倍数)，结果如下图。假设要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例参加试管中，再参加聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。,答复以下问题：,(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达,到16 000以上，那么小鼠最少需要经过次免疫后才能有符合,要求的。到达要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B,淋巴细胞的是小鼠，理由是。,(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交,瘤细胞外，可能还有_,，体系中出现多种类型细胞的原因是_,_。,(3)杂交瘤细胞中有个细胞核，染色体数目最多是,条。,(4)未融合的B淋巴细胞经屡次传代培养后都不能存活，原因,是。,【解题指南】,(1)题干关键词：“效价“杂交瘤细胞“传代培养。,(2)隐含信息：柱形图中效价越高，能检测出抗原抗体反响的血清最大稀释倍数越大，说明免疫后小鼠的B淋巴细胞产生抗体的能力越强。,(3)关键知识：制备单克隆抗体的技术流程和动物细胞体外培养的过程。,【解析】此题考察制备单克隆抗体的相关知识。,(1)据图中数据分析，第四次注射后Y、Z小鼠的血清抗体效价均到达16 000以上，免疫后小鼠Y的B淋巴细胞产生抗体效价最高，最适用于制备单克隆抗体。,(2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合在一起融合时，可能发生B淋巴细胞之间的融合，骨髓瘤细胞之间的融合和B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，故体系中会出现多种类型的细胞。,(3)杂交瘤细胞形成后，小鼠的B淋巴细胞核与其骨髓瘤细胞核会融合形成一个细胞核。染色体可达100条，有丝分裂后期染色体数目最多为200条。,(4)未融合的B淋巴细胞经屡次传代培养后，仍然不是能恶性增殖的细胞，分裂次数是有限的。,答案：,(1)四YY小鼠的抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，没有特异性且融合率达不到100%,(3)1200(4)不能无限增殖,2.(2021 潍坊模拟)人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析答复以下问题。,(1)制备单克隆抗体过程中要用到,和,技术。,(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于,，,使小鼠产生分泌相应,的淋巴细胞，此过程属于特异性免,疫中的,免疫。,(3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主要途径是在细胞内由糖,和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。,另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶的,催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。,利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其,中添加的,具有筛选杂交瘤细胞的作用。,最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是,。,(4)此过程生产的单克隆抗体可以与_,特异性结合，从而诊断早孕。,【解题指南】解答此题的关键：,(1)明确单克隆抗体的制备过程。,(2)熟知在培养基中能够生长增殖的细胞是具有DNA复制途径的细胞。,【解析】(1)制备单克隆抗体过程中要用到动物细胞培养和动物细胞融合技术。(2)给小鼠注射HCG，使小鼠进展体液免疫，产生能分泌抗体的B淋巴细胞。(3)骨髓瘤细胞的DNA合成只有一条途径，在培养基中参加氨基嘌呤，阻断了骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合体的增殖。杂交瘤细胞有两条合成DNA的途径，因此在选择培养基上杂交瘤细胞能生存并无限增殖。B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单一抗体。(4)此单克隆抗体是针对人绒毛膜促性腺激素(HCG)作抗原产生的，可以与人绒毛膜促性腺激素(HCG)特异性结合。,答案：,(1)动物细胞培养动物细胞融合,(2)抗原抗体体液(3)氨基嘌呤,能无限增殖并分泌特异性抗体,(4)人绒毛膜促性腺激素(或HCG),【延伸探究】,题中(3)经过氨基嘌呤处理后，能够存活的细胞类型有哪些？,提示：,由于骨髓瘤细胞没有DNA合成的辅助途径，而氨基嘌呤阻断主要途径，所以经处理后，能够存活的细胞是B淋巴细胞和B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后的细胞。,【加固训练】如图为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图，据图答复以下问题：,(1)图中向小鼠注射包含多种抗原决定簇的抗原后，所获得的免疫,抗血清实际上是含有,(填写抗体的名称)的混合,物，这种方法制备的多克隆抗体不仅产量低、而且纯度低。,(2)图中选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，说明细胞,膜具有,，如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有,种类型。,(3)图中两次筛选的目的不同，其中筛选的目的是筛选出，筛选的目的是筛选出。,(4)科学工作者正在研究的用于治疗癌症的“生物导弹就,是。用“生物导弹治疗癌症的方法优,于化疗的原因是_,_。,【解析】(1)结合题图可看出获得的免疫抗血清实际上是Ab1、Ab2、Ab3、Ab4多种抗体的混合物。,(2)动物细胞融合的过程表达了细胞膜的流动性；仅考虑两个细胞的融合，可得到B淋巴细胞+B淋巴细胞、骨髓瘤细胞+骨髓瘤细胞及B淋巴细胞+骨髓瘤细胞3种类型的融合细胞。,(3)在单克隆抗体的制备过程中，筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，筛选的目的是获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。,(4)把单克隆抗体跟抗癌药物相结合制成“生物导弹，注入患者体内，借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损伤正常细胞，又减小了用药剂量，而且疗效高、毒副作用小。,答案：(1)Ab1、Ab2、Ab3、Ab4(2)流动性3,(3)杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞,(4)单克隆抗体上连接抗癌药物可以原位杀死癌细胞，还不损伤正常细胞，且用药剂量小，疗效高、毒副作用小,
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