第十章 原核生物的基因表达调控

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,原核生物的基因表达调控,1,1,.1,原核生物基因表达调控概述,基因表达,(gene expression),是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。,典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。,既然从,DNA,到蛋白质的过程称为基因表达，对这个过程的调节就称为基因表达调控（,gene regulation,或,gene control,）。基因表达调控是现阶段分子生物学研究的中心课题。,1,1,.1.1,基因表达调控的意义,基因组,(genome),是指含有一个生物体生存、发育、活动和繁殖所需要的全部遗传信息的整套核酸。,但生物基因组的遗传信息并不是同时全部都表达出来的，大肠杆菌基因组含有约,4000,个基因，一般情况下只有,5,10%,在高水平转录状态，其它基因有的处于较低水平的表达，有的就暂时不表达。,不同组织细胞中不仅表达的基因数量不相同，而且基因表达的强度和种类也各不相同，这就是基因表达的组织特异性,(tissue specificity),。,例如肝细胞中涉及编码鸟氨酸循环酶类的基因表达水平高于其它组织细胞，合成的某些酶,(,如精氨酸酶,),为肝脏所特有；胰岛,细胞合成胰岛素；甲状腺滤泡旁细胞,(C,细胞,),专一分泌降血钙素等。,细胞分化发育的不同时期，基因表达的情况是不相同的，这就是基因表达的阶段特异性,(stagespecificity),。,一个受精卵含有发育成一个成熟个体的全部遗传信息，在个体发育分化的各个阶段，各种基因极为有序地表达，一般在胚胎时期基因开放的数量最多，随着分化发展，细胞中某些基因关闭,(turn off),、某些基因转向开放,(turn on),，胚胎发育不同阶段、不同部位的细胞中开放的基因及其开放的程度不一样，合成蛋白质的种类和数量都不相同，显示出基因表达调控在空间和时间上极高的有序性，从而逐步生成形态与功能各不相同、极为协调、巧妙有序的组织脏器。,从上所述，不难看出：生物的基因表达不是杂乱无章的，而是受着,严密、精确调控,的，,不仅生命的遗传信息是生物生存所必需的，而且遗传信息的表达调控也是生命本质所在。,改变基因表达的情况以适应环境，在,原核生物、单细胞生物,中尤其显得突出和重要，因为细胞的生存环境经常会有剧烈的变化。,例如：周围有充足的葡萄糖，细菌就可以利用葡萄糖作能源和碳源，不必更多去合成利用其它糖类的酶类，当外界没有葡萄糖时，细菌就要适应环境中存在的其它糖类,(,如乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等,),，开放能利用这些糖的酶类基因，以满足生长的需要。,即使是内环境保持稳定的高等哺乳类，也经常要变动基因的表达来适应环境，例如与适宜温度下生活相比较，在冷或热环境下适应生活的动物，其肝脏合成的蛋白质图谱就有明显的不同。,所以，基因表达调控是生物适应环境生存的必需。,基因表达的模式,生物体内的基因调控各不相同，基因表达随环境变化的情况，可以大致把基因表达分成两类：,组成性表达,(constitutive expression),指不大受环境变动而变化的一类基因表达。,其中某些基因表达产物是细胞或生物体整个生命过程中都持续需要而必不可少的，这类基因可称为看家基因,(housekeeping gene),，这些基因中不少是在生物个体其它组织细胞、甚至在同一物种的细胞中都是持续表达的，可以看成是细胞基本的基因表达。,组成性基因表达也不是一成不变的，其表达强弱也是受一定机制调控的。,适应性表达,(adaptive expression),指环境的变化容易使其表达水平变动的一类基因表达。,应环境条件变化基因表达水平增高的现象称为诱导,(induction),，这类基因被称为,可诱导的基因,(inducible gene),；,相反，随环境条件变化而基因表达水平降低的现象称为阻遏,(repression),，相应的基因被称为,可阻遏的基因,(repressible gene),。,1,1,.1.2,原核基因表达调控的特点与方式,基因表达调控主要表现在以下两方面：,1,转录水平上的调控（,transcriptional regulation,）；,2,转录后水平上的调控（,post-transcriptional,regulation,），包括,mRNA,加工成熟水平上的调控,（,differential processing of RNA transcript,）；, 翻译水平上的调控,（,differential translation of mRNA,）。,原核生物,中，,营养状况,（,nutritional status,）和,环境因素,（,environmental factor,）对基因表达起着举足轻重的影响。,真核生物,尤其是高等真核生物中，,激素水平,（,hormone level,）和,发育阶段,（,developmental stage,）,是基因表达调控的最主要手段，营养和环境因素的影响力大为下降。,在转录水平上对基因表达的调控决定于,DNA,的结构,、,RNA,聚合酶的功能,、,蛋白因子及其他小分子配基,的相互作用。,因为细菌,mRNA,在形成过程中与核糖体混合在一起，所以，细菌的转录与翻译过程几乎发生在同一时间间隔内，转录与翻译相耦联（,coupled transcription and translation,）。,真核生物中，转录产物（,primary transcript,）只有从核内运转到核外，才能被核糖体翻译成蛋白质。,1,1,.1.3,原核基因表达调控的几个重要概念,1.,细菌细胞对营养的适应,2.,顺式作用元件和反式作用因子,3.,结构基因和调节基因,4.,操纵基因和阻遏蛋白,5.,组成蛋白和调节蛋白,1,1,.2,操纵子学说,法国巴斯德研究院的,Francois Jacob,与,Jacques Monod,于,1960,年在法国科学院院报,(Proceeding of the French Academy of Sciences),上发表了一篇论文，提出乳糖代谢中的两个基因被一靠近它们的遗传因子所调节。这二个基因为,-,半乳糖苷酶,(-galactosidase),和半乳糖苷透过酶,(galactoside permease),。,在此文中他们首先提出了,操纵子,(operon),和操纵基因,(operator),的概念,，他们的操纵子学说,(theory of operon),使我们得以从分子水平认识基因表达的调控，是一个划时代的突破，因此他们二人于,1965,年荣获诺贝尔生理学奖。,一、操纵子,(,operon),细菌能,随环境的变化，迅速改变某些基因表达的状态,，这就是很好的基因表达调控的实验模型。人们就是从研究这种现象开始，打开认识基因表达调控分子机理的窗口的。,1.,操纵子的提出,大肠杆菌可以利用,葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖,等作为碳源而生长繁殖，当培养基中含有,葡萄糖和乳糖,时，细菌,优先,利用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间的,适应,，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长。,大肠杆菌利用乳糖至少需要,两个酶,：促使乳糖进入细菌的,半乳糖透过酶,(lactose permease),和催化乳糖分解第一步的,半乳糖苷酶,(,-galactosidase),。,在环境中,没有乳糖或其他,-,半乳糖苷,时，大肠杆菌合成,-,半乳糖苷酶量,极少,，加入乳糖,2-3,分钟后，细菌大量合成,-,半乳糖苷酶，其量可提高,千倍,以上，在以乳糖作为唯一碳源时，菌体内的,-,半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量的,3%,。,在上述二阶段生长细菌利用乳糖再次繁殖前，也能测出细菌中,-,半乳糖苷酶活性,显著增高,的过程。,这种典型的,诱导现象,，是研究基因表达调控极好的,模型,。针对大肠杆菌利用乳糖的适应现象，法国的,Jocob,和,Monod,等人做了一系列遗传学和生化学研究实验，于,1961,年提出,乳糖操纵子（,lac,operon,）学说,。,2.,操纵子的基本组成,乳糖操纵子模型已被许多研究实验所证实，对其有了更深入的认识，并且发现其他原核生物基因调控也有类似的,操纵子组织,，,操纵子是原核基因表达调控的一种重要的组织形式,，大肠杆菌的基因,多数以操纵子的形式组成基因表达调控的单元,。,下面就以乳糖操纵子为例子说明操纵子的,最基本的组成元件,（,elements,）。,(1),结构基因群,操纵子中被调控的,编码蛋白质的基因可称为结构基因,(structural gene, SG),。一个操纵子中含有,2,个以上的结构基因,，多的可达十几个。每个结构基因是一个,连续的,开放阅读框,(,open reading frame,), 5,端有起始密码,ATG,，,3,端有终止密码,TAA,、,TGA,或,TAG,。各结构基因,头尾衔接、串连排列，组成结构基因群。,至少在第一个结构基因,5,侧具有,核糖体结合位点,(ribosome binding site,RBS),，因而当这段含多个结构基因的,DNA,被转录成,多顺反子,mRNA,，就能被核糖体所,识别结合,、并起始翻译。核糖体沿,mRNA,移动，在合成完第一个编码的多肽后，核糖体可以,不脱离,mRNA,而继续翻译合成下一个基因编码的多肽,，直至合成完这条多顺反子,mRNA,所编码的,全部多肽。,乳糖操纵子含有,、,和,3,个结构基因。,基因长,3510bp,，编码含,1170,个氨基酸、分子量为,135,000,的多肽，以四聚体形式组成有活性的,-,半乳糖苷酶，催化乳糖转变为半乳糖,(allolactose),，再分解为半乳糖和葡萄糖；,基因长,780bp,，编码有,260,个氨基酸、分子量为,30,000,的半乳糖透过酶，促使环境中的乳糖进入细菌；,基因长,825bp,，编码,275,氨基酸、分子量为,32,000,的转乙酰基酶，以二聚体活性形式催化半乳糖的乙酰化。,基因,5,侧具有大肠杆菌核糖体识别结合位点（,RBS,）特征的,Shine-Dalgarno(SD),序列，因而当乳糖操纵子开放时，核糖体能结合在转录产生的,mRNA,上。,由于,、,三个基因头尾相接，上一个基因的翻译终止密码靠近下一个基因的,翻译起始密码，因而同一个核糖体能沿此转录生成的多顺反子（,polycistron,）,mRNA,移动，在翻译合成了上一个基因编码的蛋白质后，不从,mRNA,上掉下来而继续沿,mRNA,移动合成下一个基因编码的蛋白质，一气依次合成这基因群所编码所有的蛋白质。,(2),启动子,启动子,(promoter,P,),是指,能被,RNA,聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段,DNA,序列,。操纵子至少有一个启动子，一般在第一个结构基因,5,侧上游,，控制整个结构基因群的转录。,用,RNA,聚合酶与分离的一段,DNA,双链混合，再加入外切核酸酶去水解,DNA,，结果只有被,RNA,聚合酶识别结合而被保护的那段,DNA,不被水解，由此可以测出启动子的范围及其序列。,虽然不同的启动子序列有所不同，但比较已经研究过的上百种原核生物的启动子的序列，发现有一些共同的规律，它们一般长,40-60bp,，含,A-T bp,较多，某些段落很相似的，有保守性，称为共有性序列,(consensus sequences),。,启动子一般可分为识别,(R,，,recognition),、结合,(B,，,binding),和起始,(I,，,initiation),三个区段。,转录起始第一个碱基（通常标记位置为,+1,）最常见的是,A,；在,-10bp,附近有,TATAAT,一组共有序列，因为这段共有序列是,Pribnow,首先发现的，称为,Pribnow,盒（,Pribnow box,）；在,-35bp,处又有,TTGACA,一组共有序列。,不同的启动子序列不同，与,RNA,聚合酶的亲和力不同、启动转录的频率高低不同，即不同的启动子起动基因转录的强弱不同，例如：,P,L,、,P,R,、,P,T7,属强启动子，而,P,lac,则是较弱的启动子。,(3),操纵区,操纵区（,operator,）是指能被,调控蛋白特异性结合的一段,DNA,序列,，常与启动子邻近或与启动子序列重叠，当调控蛋白结合在操纵子序列上，会影响其下游基因转录的强弱。,以前将操纵区称为操纵基因（,operator gene,）。但现在基因定义是为蛋白质或,RNA,编码的核酸序列，而操纵序列并不是编码蛋白质的基因，却是起着调控基因表达强弱的作用，正如启动序列不叫启动基因而称为启动子一样，操纵序列就可称为操纵区。,operon,译为操纵子，即基因表达操纵的单元之意。,以乳糖操纵子中的操纵区为例，其操纵区（,o,）序列位于启动子（,p,）与被调控的基因之间，部分序列与启动子序列重叠。,仔细分析操纵区序列，可见这段双链,DNA,具有回文（,palindrome,）样的对称性一级结构，能形成十字形的茎环（,stem loop,）构造。不少操纵区都具有类似的对称性序列，可能与特定蛋白质的结合相关。,阻遏蛋白与操纵区结合，就妨碍了,RNA,聚合酶与启动子的结合,及其后,-,半乳糖苷酶等基因的转录起始，从而阻遏了这群基因的表达。,最早只把与阻遏蛋白结合、起阻遏作用的序列称为操纵区，但其后发现有的操纵子中,同一操纵序列与不同构像的蛋白质结合，可以分别起,阻遏或激活,基因表达的作用，阿拉伯糖操纵子中的操纵序列就是典型的例子。因而凡能与调控蛋白特异性结合、从而影响基因转录,强弱,的序列，不论其对基因转录的作用是,减弱、阻止或增强、开放，都可称为操纵区,。,（,4,） 调控基因,调控基因,(regulatory gene),是,编码能与操纵序列结合的调控蛋白的基因,。调控蛋白有：,阻遏蛋白,(repressive protein),：与操纵区结合后能减弱或阻止其调控的基因转录，其介导的调控方式为,负调控,(negative regulation),；,激活蛋白,(activating protein),：与操纵区结合后能,增强或起动,其调控的基因转录，所介导的调控方式为,正调控,(positive regulation),。,某些,特定的物质,能与调控蛋白结合，使调控蛋白的,空间构像,发生变化，从而改变其对基因转录的影响，这些特定物质可称为,效应物,（,effector,）。有两种：,诱导剂,(inducer),：能引起诱导发生的分子；,阻遏剂或辅助阻遏剂,(corepressor),：能导致阻遏发生的分子。,例如在乳糖操纵子中，调控基因,lac I,位于,P,lac,邻近，有,其自身的启动子和终止子,，转录方向和结构基因群的转录方向,一致,，编码产生由,347,个氨基酸组成的调控蛋白,R,。,在环境没有乳糖存在的情况下，,R,形成分子量为,152,000,的,活性四聚体,，能特异性与操纵区,紧密结合,，从而阻止利用乳糖的酶类基因的转录，所以,R,是乳糖操纵子的阻遏蛋白,；,当环境中有足够的乳糖时，,乳糖与,R,结合，使,R,的,空间构像变化,，四聚体,解聚成单体,，,失去与操纵区特异性紧密结合的能力,，从而,解除了阻遏蛋白的,作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。,在这过程中,乳糖就是诱导剂,，与,R,结合起到,去阻遏作用,(derepression),，诱导了利用乳糖的酶类基因,转录开放,。,许多调控蛋白都是,变构蛋白,（,allosteric protein,），通过与上述类似的方式与效应物结合改变空间构像，从而改变活性，起到调节基因转录表达的作用。,二、,乳糖操纵子的表达调控,大肠杆菌能以乳糖为唯一碳源生长，这是由于它能产生一套利用乳糖的酶。,这些酶受,乳糖操纵子,的控制。大肠杆菌乳糖操纵子是大肠杆菌,DNA,的一个特定区段，由,调节基因,I,，启动基因,P,，操纵基因,O,和结构基因,Z,、,Y,、,A,组成。,P,区是转录起始时,RNA,聚合酶的结合部位。,O,区是阻遏蛋白的结合部位，其功能是控制结构基因的转录。,平时,I,基因经常进行转录和翻译，产生有活性的阻遏蛋白。,Z,编码,-,半乳糖苷酶；,Y,编码,-,半乳糖苷透过酶；,A,编码,-,半乳糖苷乙酰基转移酶。,-,半乳糖苷酶是一种,-,半乳糖苷键的专一性酶，除能将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。,-,半乳糖苷透过酶的作用是使外界的,-,半乳糖苷（如乳糖）能透过大肠杆菌细胞壁和原生质膜进入细胞内。,-,半乳糖苷乙酰基转移酶的作用是把乙酰辅酶,A,上的乙酰基转到,-,半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。,RNA,聚合酶结合部位,阻遏物结合部位,1.,阻遏蛋白的负调控,当大肠杆菌在,没有乳糖,的环境中生存时，,lac,操纵子处于,阻遏状态,。此,基因在其自身的启动子,Pi,控制下，低水平、组成性表达产生阻遏蛋白,R,，每个细胞中仅维持约,10,个分子的阻遏蛋白,。,R,以四聚体形式与操纵子,结合，阻碍了,RNA,聚合酶与启动子,P,lac,的结合，阻止了基因的转录起动。,R,的阻遏作用,不是绝对,的，,R,与,偶尔解离,，使细胞中还有,极低水平的,半乳糖苷酶及透过酶,的生成。,当,有乳糖存在,时，乳糖受,半乳糖苷酶的催化转变为,别乳糖,，与,R,结合，使,R,构象变化，,R,四聚体解聚成单体，失去与,的亲和力，与,解离，基因,转录开放,，使,半乳糖苷酶在细胞内的含量可,增加,1000,倍,。这就是乳糖对,lac,操纵子的诱导作用。,乳糖操纵子的控制模型，其主要内容如下：,Z,、,Y,、,A,基因的产物由同一条多顺反子的,mRNA,分子所编码。 这个,mRNA,分子的启动子紧接着,O,区，而位于,I,与,O,之间的启动子区（,P,），不能单独起动合成,-,半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。 操纵基因是,DNA,上的一小段序列（仅为,26bp,），是阻遏物的结合位点。 当阻遏物与操纵基因结合时，,lac mRNA,的转录起始受到抑制。 诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结合，从而激发,lacmRNA,的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始,mRNA,的合成。,当一个,mRNA,含有编码一个以上蛋白质的编码信息，而且这些蛋白质都是以独立的多肽被翻译时，这样的,mRNA,称之多顺反子,mRNA,。多顺反子,mRNA,在细菌中是很普遍的。,多顺反子,lac mRNA,中的,lacZ,，,lacY,，,lacA,经翻译生成的产物分别为,LacZ,（,-,半乳糖苷酶（,-galactosidase,）、,LacY,（,-,半乳糖苷通透酶（,-galactoside permease,）和,LacA,（,-,半乳糖苷转乙酰基酶（,thiogalactoside transacetylase,）。,半乳糖是,lac,操纵子转录的活性诱导物，人们发现一个合成的、结构上类似于别乳糖、不能被,-,半乳糖苷酶水解的,-,半乳糖苷异丙基硫代半乳糖苷（,isopropyl thiogalactoside,：,IPTG,）起着,lac,操纵子的一个诱导物的作用，所以,IPTG,常用于诱导含有使用了,lac,启动子的质粒载体的细菌中的重组蛋白的表达。,一些化学合成的,乳糖类似物,，不受,半乳糖苷酶的催化分解，却也能与,R,特异性结合使,R,构象变化，诱导,lac,操纵子的开放。例如,异丙基硫代半乳糖苷,(isopropylthiog-alactoside,，,IPTG),就是很强的诱导剂；不被细菌代谢而十分稳定。,X-gal,（,5-,溴,-4-,氯,-3-,吲哚,-,半乳糖苷）也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被,半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作,半乳糖苷酶活性的指示剂。,IPTG,和,X-gal,都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。,lac,操纵子受,LacI,阻遏蛋白调控。,在没有诱导剂（乳糖或,IPTG,）存在时，,LacI,阻遏蛋白与,lac,操纵子,DNA,序列结合得非常紧密，,lac,基因不能进行转录。当,IPTG,存在时，,IPTG,与,LacI,阻遏蛋白相互作用，形成,LacI,阻遏蛋白,IPTG,复合物，体外研究表明，该复合物对,lac,操纵基因的亲和性为单独,LacI,阻遏蛋白的亲和性的千分之一。所以,IPTG,作为,lac,基因表达的一个诱导剂，起着转录去阻遏作用。就象（下图）表示的那样，,RNA,聚合酶的结合部位（,lac,操纵基因）也是,LacI,阻遏蛋白的结合部位，实验表明,RNA,聚合酶和,LacI,阻遏蛋白对操纵基因序列的结合是相互排斥的。,原核生物基因表达的调控,乳糖代谢基因表达调控图解：,(,没有乳糖时,),lac,Z,lac,Y,lac,A,调节基因,启动子,操纵基因,结构基因,RNA,聚合酶,信使,RNA,转录,翻译,阻抑物与,操纵基因,结合，结,构基因转,录受阻,阻抑物,原核生物基因表达的调控,乳糖代谢基因表达调控图解：,(,有乳糖时,),lac,Z,lac,Y,lac,A,调节基因,启动子,操纵基因,结构基因,RNA,聚合酶,信使,RNA,转录,翻译,阻抑物与乳糖结合后构象发生了改变，,因而不能与操纵基因结合，使得结构,基因进行转录。,阻抑物,乳糖,转录,半乳糖苷酶,酶,酶,乳糖分解代,谢调控过程,是一个自我,调控过程,2.,CAP,的正调控,细菌中的,cAMP,含量与葡萄糖的分解代谢有关,，当细菌利用葡萄糖分解产生能量时，,cAMP,生成少而分解多，,cAMP,含量低；相反，当环境中无葡萄糖可供利用时，,cAMP,含量就升高。细菌中有一种能与,cAMP,特异结合的,cAMP,受体蛋白,CRP(,cAMP receptor protein,),，当,CRP,未与,cAMP,结合时它是没有活性的，当,cAMP,浓度升高时，,CRP,与,cAMP,结合并发生空间构象的变化而活化，称为,CAP,(CRP-cAMP activated protein),，能以二聚体的方式,与特定的,DNA,序列结合,。,在,lac,操纵子的启动子,P,lac,上游端有一段序列与,P,lac,部分重叠的序列，能与,CAP,特异结合,，称为,CAP,结合位点,（,CAP binding site,）。,CAP,与这段序列结合时，可,增强,RNA,聚合酶的转录活性，使转录提高,50,倍,。相反，当有葡萄糖可供分解利用时，,cAMP,浓度降低，,CRP,不能被活化，,lac,操纵子的结构基因表达下降,。,由于,P,lac,是,弱启动子,，单纯因乳糖的存在发生去阻遏使,lac,操纵子转录开放，还不能使细菌,很好利用乳糖,，必需同时有,CAP,来加强转录活性，细菌才能合成足够的酶来利用乳糖,。,lac,操纵子的强诱导,既需要有乳糖的存在又需要没有葡萄糖可供利用,。通过这机制，细菌是优先利用环境中的葡萄糖，只有无葡萄糖而又有乳糖时，细菌才去,充分利用乳糖,。,细菌对葡萄糖以外的其他糖（如阿拉伯糖、半乳糖、麦芽糖等）的利用上也有类似对乳糖利用的情况，在含有编码利用阿拉伯糖的酶类基因群的,阿拉伯糖操纵子,（,ara,operon,）、,半乳糖操纵子,（,gal,operon,）中也有,CAP,结合位点,，,CAP,也起类似的,正性调控作用,。所以,CAP,的通用名称是,分解代谢基因激活蛋白,（,catabolic gene activator protein,）。,不难看出：,CAP,结合位点就是一种起,正性调控作用的,操纵子，,CAP,则是对转录起正性作用的调控蛋白激活蛋白，编码,CRP,的基因也是一个调控基因，不过它并不在,lac,操纵子的附近，,CAP,可以对,几个操纵子,都起作用。,从上所述，乳糖操纵子属于,可诱导操纵子,（,inducible operon,），这类操纵子通常使是关闭的，当受效应物作用后,诱导开放转录,。这类操纵子使细菌能适应环境的变化，最有效地利用,环境能提供的能源底物。,乳糖操纵子的诱导,1,1,.4,色氨酸操纵子的表达调控,色氨酸是构成蛋白质的组分，一般的环境难以给细菌提供足够的色氨酸,，细菌要生存繁殖通常需要自己经过,许多步骤合成色氨酸,，但是一旦环境能够,提供色氨酸,时，细菌就会充分利用,外界的色氨酸,、减少或停止合成色氨酸，以减轻自己的,负担,。细菌所以能做到这点是因为,有色氨酸操纵子（,trp,operon,）的调控。,trp,操纵子的结构,trp,操纵子的结构见下图：五个结构基因（,E,、,D,、,C,、,B,、,A,）分别编码从分支氨酸起始合成色氨酸途径的酶或酶亚基。在结构基因之前为调控区域，包括启动子区（,P,）、操纵区（,O,）、前导肽编码区（,L,）和弱化子区（,a,）。,弱化子（衰减子）：在,trpE,与操纵基因之间有一段前导序列,L,（,162bp,），它能编码出一个内含两个并连的,trp,的,14,肽，由于这两个,trp,的合成速度能控制核糖体在,mRNA,上的移动，使得前导序列的转录产物,mRNA,可形成特殊的结构，类似转录终止信号，因此编码该结构区域的基因被称为弱化子（衰减子）。,在,trpA,之后有两个终止信号,t,和,t,，其中,t,为,因子所识别，因此因子也参与了调控。,Trp,操纵子的调节基因（,trpR,）产生辅阻遏蛋白，远离,trp,操纵子。,1.,色氨酸操纵子的结构,trp,操纵子的调控：,启动子调控,阻遏系统,弱化子（衰减子）调控,2.,阻遏蛋白的负调控,合成色氨酸所需要酶类的,基因,E,、,D,、,C,、,B,、,A,等头尾相接串连排列组成结构基因群,，受其上游的启动子,P,trp,和操纵子,的调控,，调控基因,trpR,的位置,远离,P-,-,结构基因群,，在其自身的启动子作用下，以组成性方式低水平表达其编码分子量为,47000,的调控蛋白,R,，,R,并没有与,结合的,活性,，当环境能提供足够浓度的色氨酸时，,R,与色氨酸,结合后构象变化而活化,，就能够与,特异性亲和结合,，,阻遏结构基因的转录,。,色氨酸操纵子的可阻遏调控,因此色氨酸操纵子属于一种,负性调控的、可阻遏的操纵子,（,repressible operon,），即这操纵子通常是,开放转录,的，有效应物（色氨酸为阻遏剂）作用时则阻遏关闭转录。细菌不少生物合成系统的操纵子都属于这种类型，其调控可使细菌处在生存繁殖,最经济最节省,的状态。,3.,弱化子及其作用,实验观察表明：当色氨酸达到,一定浓度,、但还没有,高到能够活化,R,使其起阻遏作用的程度时,，产生色氨酸,合成酶类的量已经明显降低,，而且产生的酶量与色氨酸浓度呈负相关。仔细研究发现这种调控现象与色氨酸操纵子,特殊的结构有关,。,在色氨酸操纵子,P,trp,-,与第一个结构基因,trp,E,之间有,162bp,的一段先导序列,（,leading sequence,，,L,），实验证明当色氨酸有一定浓度时，,RNA,聚合酶的转录会,终止在这里。,这段序列中含有编码由,14,个氨基酸组成的短肽的开放阅读框,，其序列中有,2,个色氨酸,相连，在此开放阅读框前有核糖体识别结合位点（,RBS,）序列，提示这段短开放阅读框在转录后是能,被翻译的,。,mRNA,前导区序列分析,trp,前导区的碱基序列已经,全部测定,， 发现完整的前导序列可分为,1,、,2,、,3,、,4,区域,，这四个区域的片段能以两种不同的方式进行,碱基配对,（图,9-10,），,色氨酸操纵子的转录与翻译调控,有时以,1-2,和,3-4,配对,，有时只以,2-3,方式,互补配对。核糖体经过前导区继续翻译的能力,控制着这两种结构的转换,，它决定,mRNA,是否形成终止所需的结构。前导序列的终止区与一般的转录,终止位点特点相同，具有,成串的,U,和潜在的能形成茎环的二重对称结构,。通过,RNaseT1,降解实验（此酶不水解配对的,RNA,）表明纯化的,trp,前导序列中只有,1-2,和,3-4,的配对方式。由此定位的,3-4,配对区正好位于终止密码子识别区，当这个区域发生,破坏自我碱基突变,，有利于转录的,继续进行,。,转录的弱化理论认为，,mRNA,转录的终止是通过,前导肽基因的翻译来调节,的，在前导肽基因中有两个相邻的,色氨酸密码子,，在翻译时对,tRNA,Trp,的浓度十分敏感。当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的,tRNA,Trp,也少,，由此推断，翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会,很慢,，当,4,区被转录完成时，核糖体才进行到,1,区（或停留在两个相邻的色,氨酸密码子处），这时的前导区结构是,2-3,配对,，不形成,3-4,配对,的终止结构，所以转录可继续进行，直到将色氨酸操纵子中的结构基因全部转录完毕为止。测定结果发现，在,缺乏色氨酸时所有的,RNA,聚合酶都能经过弱化子继续参与转录,。加上取消阻遏增加的约,70,倍的表达，总表达量可,增加约,700,倍,。,当培养基中色氨酸,浓度高,时，核糖体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子，在,4,区被转录之前，核糖体就到达,2,区,，这样使,2-3,不能配对,，,3-4,区可以自由配对形成茎,-,环式的终止子结构，使得只有约,10,的,RNA,聚合酶能继续参与色氨酸操纵子结构基因的转录（图,9-10,）。由此可见，弱化子对,RNA,聚合酶转录的终止依赖于前导肽翻译中,核糖体所处的位置,，而细胞中色氨,酸,存在与否,，决定了,mRNA,转录的,弱化子结构,，使弱化子中,1,、,2,、,3,、,4,区域呈现竞争性,配对，,从而,产生弱化效应,，这是色氨酸操纵子,第二水平调控的机制,。应该指出，色氨酸含量变化对阻遏过程和弱化过程的作用,方向是相同,的。前者主要控制操纵子基因表达的,启动,，而后者主要决定转录和翻译,是否能继续进行下去,。,弱化子作用,前导区的转录,无色氨酸时，转录可持续进行,有色氨酸存在时，转录在弱化子区域终止,Trp,操纵子的弱化子调控,有色氨酸时，核糖体的移动阻止了,2,、,3,茎环的形成，但,3,、,4,茎环形成，终止转录,无色氨酸时，核糖体在,trp,密码子处停留，形成,2,、,3,茎环，阻止了,3,、,4,茎环的形成，转录继续,1,1,.5,细菌的应急反应,细菌有时会碰到紧急状况，比,如氨基酸饥饿时，就不是缺少一二种氨基酸，而是氨基酸的全面匮乏。为了紧缩开支，渡过难关，细菌将会产生一个应急反应，包括生产各种,RNA,、糖、脂肪和蛋白质在内的几乎全部生物化学反应过程均被停止。,实施这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸（,ppGpp,）和鸟苷五磷酸（,pppGpp,）。产生这两种物质的诱导物是空载,tRNA,。,当氨基酸饥饿时，细胞中便存在大量的不带氨基酸的,tRNA,，这种,空载的,tRNA,会激活焦磷酸转移酶，,使,ppGpp,大量合成，其浓度可增加,10,倍以上。,ppGpp,的出现会关闭许多基因，当然也会打开一些合成氨基酸的基因，以应付这种紧急状况。,关于,ppGpp,的作用原理还不大清。,ppGpp,与,pppGpp,的作用范围十分广泛，它们不是只影响一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以它们是超级调控因子。,