中成药质量标准研究制定技术要求

*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,中成药质量标准研究制定技术要求,中成药标准制定技术要求,1,中药提取纯化技术要求,2,中药分析方法验证内容,3,报告内容,一,、中成药标准制定技术要求,原则,保证用药,安全,科学、先进、规范、实用,继承,、,发展、创新,促进标准国际化,方法学验证,中药质量标准方法学验证指导原则 （中国药典,2010,年版一部 ）,一,、中成药标准制定技术要求,中药标准制定,国家药品标准,（第四版）,中药质量标准研究制定技术要求,供起草用样品的要求,研究用样品应具有代表性，覆盖面要广，,一般至少应收集,15,批以上样品供研究用；,独家生产的应不少于,10,批，多家企业生产的应尽量收集每家企业的样品,5,家以上企业生产的应至少收集,5,10,家企业生产的样品,样品量除满足起草研究、留样观察外，还应有不少于,3,倍检验量的样品供复核用；,供起草用样品的要求,对于具有多种不同规格的品种，应收齐全部规格的样品,试验用样品必须采用合格原辅料依法生产的样品，收集的每批样品均要有该企业的原辅料和成品的自检报告,及详细生产工艺,。,注意,阴性样品系指按处方除去被测定的药味，按制法制备的样品，注意应包括所有的辅料和工艺步骤，制成量应与原标准相符,供起草用样品的要求,阴性对照样品,生产单位应尽可能提供,研究单位自制,中成药质量标准基本内容,中成药质量标准基本内容,：,名称,处方,制法,性状,鉴别,特征图谱,检查,浸出物,指纹图谱,含量,功能与主治,用法与用量,注意,规格,贮藏,名称,(1),、名称应符合中药及天然药物命名原则。中国药典已收载品种名称原则上不作更改,(2),、,新增品种或原有品种名称若不符合要求确需修改的，可提出申请，由国家药典委员会经过查询后统一进行命名,(3),、,与药典收载品种同方异名的应按药典名称进行规范，与药典同名异方的应更名或按药典规范处方,处方,(1),、,处方排序按君、臣、佐、使，系列品种排序需统一,(2),、,成方制剂中含有现版药典未收载的药材和饮片，应同时制定药材和饮片标准，并应符合中药材和饮片标准制定有关技术要求,(3),、,饮片炮制方法如药典没有收载的应在标准后注明,处方,(4),、中国药典成方制剂中原则上不再收载含有濒危药材的品种。属于濒危物种或若需减去或替换的药材应按相关要求申报，经批准后方可列入中国药典,(5),、,处方药味以提取物（浸膏）表述的，其制法如与药典已收载的提取物标准相同，则应使用药典提取物名称，执行该提取物标准；若与药典标准不同或药典未收载，则应将该提取物标准列于标准正文之下,（,6,）,属于药典分列的品种或易混淆品种应注意核对和明确所用药材品种，不同剂型的系列品种处方药材品种应一致,处方,五味子、南五味子,金银花、山银花,葛根、 粉葛,前胡、 紫花前胡,黄柏、 关黄柏,制法,（,1,）,标准中的,“,制法,”,项作为一个法定的公共标准，对同品种要有其普适性，应按实际生产情况简要表述工艺流程中的主要步骤,（,2,）,制法项内容应符合药典附录制剂通则各剂型有关规定,提取溶剂的名称、提取方法、分离、浓缩、干燥等主要步骤并规定制成总量（除另有规定外，以,1000,为单位），不列详细技术参数。但在起草说明中应列出全部的生产工艺流程和详细技术参数,。,（,3,）,成型工艺中仅用于调整制成量的淀粉、糊精等辅料可不固定用量,制法,（,4,）,大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、水丸等通常可作为同一丸剂的不同规格列入同一品种项下,（,5,）醇沉前的相对密度、测定温度应列出，一般有一个可以规定范围,（,6,）注意同品种多厂家制法的统一，不同规格可折成制成不同量,性状,（,1,）,外观性状是对药品的颜色和外表感官的描述,（,2,）,性状项下应写明品种的外观形状、色、嗅、味等,（,3,）,对制剂颜色的描述可根据,实,样规定一定的范围,（,4,）,注意按照丸剂通则的规定，根据制法和规格对蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、蜡丸、浓缩丸（蜜丸、水丸、水蜜丸）等准确分类并在性状中明确。,鉴别,鉴别,色谱鉴别,理化鉴别,显微鉴别,一般理化鉴别,荧光鉴别,光谱鉴别,薄层色谱鉴别,液相色谱鉴别,气相色谱鉴别,特征图谱鉴别,鉴别,(2),、制剂中各药味的鉴别方法除前处理外，原则上应尽量与该药材和饮片的专属鉴别方法一致，如因其他成分干扰或制剂的提取方法不同，不能采用与该药材相同的鉴别方法时，可采用其他鉴别方法，并在起草说明中予以阐明。,（,1),鉴别试验应符合重现性、专属性和耐用性的验证要求,，首先应建立君药、贵重药、易混淆药的鉴别，并对每味药材逐一进行鉴别研究。,总体要求,鉴别,(3),、,系列品种,其鉴别方法应保持一致,(4),、处方中含多来源植物药味的，若使用对照药材进行鉴别时，应对对照药材的适用性进行考察。若对照药材与供试品图谱差异较大，则不适合采用该对照药材作鉴别对照，可考虑采用对照提取物及对照品进行鉴别。,总体要求,鉴别,（,1,）,应对处方中所有以粉末投料的药材逐一进行研究,（,2,）,选择特征性强、与处方中其它药味无交叉干扰的显微特征作为鉴别依据,，,如果确有干扰，可选用其他显微特征或改用其他鉴别方法,（,3,）,所收载的特征应明显、易于检出,对镜检出现概率低于,60%,的（制片,5,张，可检出规定特征的应不少于,3,张），或镜检难度大的，且已有该药材,TLC,鉴别的，可不作正文规定。对不易查见或无专属性的显微特征不要列入,显微鉴别,鉴别,（,4,）,对于多来源的药材，应采用共有的组织、细胞或内含物的特征,（,5,）,药典成方制剂药材粉末通常以细粉（小于,180,m,）投料，应注意显微鉴别项下的特征的大小与药材细度尽量相一致,单一药材粉末的主要特征有时不一定能作为鉴别依据，而某些较为次要的特征有时却能起到重要的鉴别作用。因此在选取处方各药味显微特征时要考虑到其特征性,显微鉴别,（,6,）,对复方中含有原粉入药的成方制剂，应选择被检药材特有的与其它药材区别大的特征,鉴别,（,1,）,应选择专属性强、反应明显的显色反应、沉淀反应等鉴别方法,（,2,）,必要时写明化学反应式,（,4,）,尽量避免用于中药复方制剂中共性成分的鉴别,，关注阴性有无干扰,理化鉴别,（,3,）,一般用于制剂中的矿物药或某一化学成分的鉴别,鉴别,（,1,）,薄层色谱,具分离与鉴别特性，并,具有直观,、,承载信息大、专属性强、快速、经济、操作简便等优点，,是中成药,鉴别的,首选,方法。,（,2,）新建立的薄层色谱应该,图谱清晰，斑点明显，分离度,、专属性、,重现性,与耐用性,符合要求,，并需提供图谱。,薄层色谱,鉴别,（,3,）,应尽量与该药材和饮片的,薄层色谱,鉴别方法一致，如因其他成分干扰或制剂的提取方法不同，可,增加提取、纯化处理或展开剂优化,。,鉴别,供试品溶液的制备,：,应尽可能除去干扰，同时方法尽量简便，,首先进行提取、纯化选择，如回流、超声提取方法，溶剂、时间，,酸碱处理，溶剂萃取，柱子纯化等的,选择,薄层板的选择：吸附剂的比较，选硅胶,G,板还是,GF254,板,对照品选择：,尽量采用以对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照。当对照品不易获得时，可采用对照提取物或对照药材为对照,新增,薄层色谱,鉴别要求,鉴别,提取、纯化选择：提取方法回流、超声或溶剂提取，溶剂选择，酸碱处理，溶剂萃取，柱子纯化,薄层板的选择：吸附剂的比较，选硅胶,G,板还是,GF254,板,对照品选择：,尽量采用以对照品和对照提取物或对照药材同时进行对照。当对照品不易获得时，可采用对照提取物或对照药材为对照,新增,薄层色谱,鉴别要求,点样量的选择：不同点样量比较,鉴别,展开剂选择：,对三个以上的展开系统进行考察,比较,显色条件选择：,日光、紫外光、显色剂,耐用性：,不同厂牌的薄层板、相对温度、湿度等,新增,薄层色谱,鉴别要求,阴性空白试验：,以证明其他药味无干扰,点样量的选择：,不同点样量比较,原点位置,原点位置,溶剂前沿,溶剂前沿,T,：,25 RH,：,51,1,2,3,4,5,6,7,8,9,1,2,3,4,5,6,7,8,溶剂前沿,原点位置,1,2,3,4,5,6,7,8,照片,9,庆余辟瘟丹鉴别（,2,）,TLC,照片,10,鉴别（,2,）,TLC,展开剂比较,薄层板：青岛海洋硅胶,G,板,薄层板：青岛海洋硅胶,G,板,展开剂：甲苯,-,乙酸乙酯,-,异丙醇,-,甲醇,-,水,展开剂：正丁醇冰醋酸水,（）,（,7:1:2,）,1,、缺黄连阴性,1,、缺黄连阴性,3,8,庆余辟瘟丹样品,2,、黄连对照药材,2,、,9,黄连对照药材,3,8,、 庆余辟瘟丹样品,照片,11,鉴别（,2,）,TLC,薄层板比较,薄层板：,MN,硅胶,G,板,展开剂：甲苯,-,乙酸乙酯,-,异丙醇,-,甲醇,-,水,（）,1,缺黄连阴性,2,黄连对照药材,3-8,庆余辟瘟丹样品,庆余辟瘟丹,鉴别,（,1,）,使用对照药材应保证药材的主斑点在样品中均有对应的斑点（可参照制法对药材进行前处理），供试品色谱中不能只有对照药材色谱中的,1,2,个次要斑点相对应。,（,2,）,尽可能采取一个供试液多项多维鉴别使用的薄层色谱方法，达到节约资源、保护环境、简便实用的目的,（,4,）对原方法的验证注意原标准点样量按手铺板制定，现用市售薄层板点样量过大分离度差，点样量可减少,薄层色谱,鉴别,（,3,）注意,“,过柱,”,的影响，不同品牌、不同批号的吸附剂吸附能力有的不同,注意点,鉴别,（,1,）,处方中药味有多种含挥发性成分时，尽可能在同一色谱条件下进行鉴别,应根据待测样品的性质，选用合适的色谱柱、检测器等，进行系统适应性试验，考察分离度,、专属性、耐用性,等,（,2,）,用挥发油对照提取物对照，相关组分峰应达到良好分离，保证结果的重现性,气相,色谱,鉴别,鉴别,处方中,成分量低，薄层色谱有干扰,时，,可试研究用液相,色谱,鉴别,应根据待测样品的性质选用适宜的色谱柱、流动相、检测器等，考察分离度、重复性、,专属性与耐用性,，选择最佳色谱条件,阴性空白试验，确证其他药味无干扰,液相,色谱,鉴别,专属性,峰纯度试验，确证无重叠峰,鉴别,特征图谱是能够体现中药整体特性的图谱,或,选取图谱中某些重要的特征信息，作为控制中药质量的重要鉴别手段。,列于鉴别项下,供试品应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰，并呈现与对照药材或对照提取物保留时间相同的几个色谱峰,特征图谱鉴别,分析方法建立,方法认证,方法学验证,特征图谱鉴别方法的建立,特征图谱方法建立,色谱条件的优化,检测方法选择,HPLC/UV,HPLC/ELSD,波长选择,*,流动相选择,样品的收集,*,药材或饮片,中成药,参照物的选择,洗脱方式比较,流动相系统,不同酸度比较,GC,供试品的制备,对照品,对照提取物,特征图谱,方法认证,特征图谱是否具有代表性,能否表征待测样品所含成分的专属性,峰的确认,找出不同药材在,图中的特征峰,特征峰专属性考察,类似产品的考察,1,2,34,5,6,7,S,8,9,10,茵陈,金银花,栀子,黄芩苷,特征峰的确认,1,2,3,4,5,6,S,专属性考察,6,、金雀异黄素,S,、,5-,甲基蜂蜜曲菌素,乌灵胶囊与近似产品指纹比较,乌灵胶囊,金水宝胶囊,至灵胶囊,百令胶囊,宁心宝胶囊,1,2,3,4,5,6,S,色谱柱考察,不同仪器考察,不同流速考察,不同柱温考察,溶液的稳定性,重复性,重现性,精密度,耐用性,方法学验证,不同,pH,考察,检查,(1),按照制剂通则明确各品种需规定的检查项目并制定限度值。如：相对密度、,pH,值、乙醇量、总固体、软化点、黏附力、折光率、喷射速率、喷射试验、注射剂安全性检查等,（,2,）根据各品种的情况制定相应的检查项，如：炽灼残渣、重金属及有害元素、农药残留量、有毒有害物质、有机溶剂残留量、树脂降解产物检查等,（,3,）当药典附录中检查方法有多种并列时，应明确使用第几法，并说明理由,检查,(4),药典未收载的剂型应根据其剂型特点和用药需要制定相应的检查项目,(5),单一成分的制剂或中西合方制剂中的化学药必要时应检查含量均匀度,(6),含有毒性药材的制剂，原则上应制订有关毒性成分的检查项目，以确保用药安全,(,7),使用含有矿物药、可能被重金属和有害元素污染的中药饮片（如地龙）生产的中药制剂，或生产过程可能造成相应污染的中药制剂，原则上应采用铅、镉、砷、汞、铜检查法检查并制定相应的限度,检查,(8),中药注射剂应制定铅、镉、砷、汞、铜检查项，含雄黄，朱砂的制剂应采用专属性的方法对可溶性砷、汞进行检查并制定限度,(9),使用乙酸乙酯、甲醇、三氯甲烷等有机溶媒萃取、分离、重结晶等工艺的中药制剂应进行残留溶剂检查并规定限量,(10),工艺中使用吸附树脂进行分离纯化的制剂，应控制树脂中残留致孔剂和降解产物。根据吸附树脂的种类、型号规定检查项目，主要有苯、二甲苯、甲苯、苯乙烯、二乙基苯等,指纹图谱,指纹图谱是基于图谱的整体信息，用于中药质量的整体评价,，,确保其内在质量的均一、稳定,相关性,在建立成方制剂特征图谱或指纹图谱时还应同时建立药材和饮片、中间体的相应图谱。并须对三者间的相关性进行分析，应具相关性,指纹图谱,分析方法建立,方法认证,方法学验证,指纹图谱方法的建立,数据处理和,评价,浸出物,或总固体,（,1,）,可根据成方制剂中主要成分的理化性质选择合适的溶剂有针对性的对某一类成分进行浸出物测定，应注意避免辅料的干扰,（,2,）,含糖等辅料多的剂型对浸出物的测定有一定影响，一般不采用乙醇或甲醇作为浸出溶剂，可根据所含成分选用合适的溶剂,（,3,）酒剂、注射液等要求进行总固体测定，含糖或其它辅料应先除去再测定,含量测定,。,。,首选制剂处方中的君药、臣药、起主要药效作用的活性成分、类别成分或组分、贵细药及毒性药材中的有效成分、有毒成分,测定成分的选定,上述药味的有效成分不明确或无专属性方法进行测定时，可选择其他药味进行含量测定,若处方中含有化学药成分必须进行含量测定，并规定上下限,含量测定,。,。,尽可能建立多指标含量测定,测定成分的选定,或测定单一有效成分后再测定其类别成分总量，如总黄酮、总生物碱、总皂苷、总鞣质等,同一类别的成分或可相互转化的成分可分别测定其单个成分的含量合并计算总量，如人参皂苷类、苦参碱和氧化苦参碱等,HPLC,的梯度洗脱，同一色谱条件同时测定多个成分,含量测定,。,。,成方制剂所测定的成分应尽量与药材测定成分相对应,测定成分的选定,系列品种质量标准的检测方法及指标应尽可能统一,测定成分应注意避免测定分解产物、不稳定成分、非专属性成分或微量成分,含量测定,。,。,。,根据成分性质选择专属性、重现性、实用性好的方法如,HPLC,、,GC,等,测定,方法,的选定,检测器的选择，如蒸发光散射检测器等检测仪器的应用，扩大了紫外区无吸收成分的检测范围,多指标含量测定,一测多评方法,以对照提取物为对照,双波长测定,脱水穿心莲对照品溶液色谱图（,254nm,）,消炎利胆片,色谱图（,254nm,）,阴性样品溶液色谱图（,254nm,）,穿心莲对照品溶液色谱图（,225nm,）,消炎利胆片,色谱图（,225nm,）,阴性样品溶液色谱图（,225nm,）,消炎利胆片,穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯,双波长,的含量测定,含量测定,。,。,。,。,含量限度应根据中药制剂实测结果与原料药材的含量情况确定,，,至少应有,15,批以上样品数据为依据,含量限度确定,检测方法与药典规定不同的或药典药材中无相应含量测定项的应提供至少,3,批以上的原料药材含量数据，以便计算转移率,原粉入药的转移率一般要求在,90%,以上,含量测定,。,。,。,有毒成分及中西药复方制剂中化学药品的含量应规定上下限,含量限度确定,上下限幅度应根据测试方法、品种情况、转移率及标示量确定，一般应在,10%,20%,之间,中药注射液大类成分的含量限度也应规定,上下限,规格,应根据剂型、品种的特点和临床用法与用量制定规范合理的规格，并提供相应依据,片剂（糖衣片规定片芯重量）、胶囊剂、栓剂、合剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂等剂型应规定每个制剂单位的重（装）量,单剂量包装的制剂应规定每个包装单位的装量。如颗粒剂、散剂、丸剂等,以丸数服用的丸剂、滴丸剂应规定每丸或每,10,丸的重量,单体成分或有效部位、组分制剂可规定每个制剂单位的标示含量,中成药标准制定技术要求,1,中药提取纯化技术要求,2,中药分析方法验证内容,3,报告内容,二、,中药提取纯化技术要求,中药提取纯化方法是中药分析方法的重要组成部分，是得到准确可靠分析结果的重要保证。,以确保提取效率、准确性和耐用性符合要求,中药,分析方法的建立应充分优化供试样品的提取、纯化方法，最大程度富集待测成分，排除干扰,二、,中药提取纯化技术要求,中药提取纯化方法,提取方法,纯化方法,冷浸,加热回流,索氏提取,超声提取,水蒸气蒸馏法,液,-,液萃取,柱色谱分离纯化,沉淀,衍生化,提取方法的选择,样品的性状,待测成分,的理化性质,不同,工艺的不同,待测成分的含量,选择,3,种,提取方法平行试验,提取方法的选择应根据,提取方法的选择,检测仪器的选择,检测器的选择,检测波长的选择,流动相或展开剂的选择,测定指标的选择,提取方法的选择前应进行以下初步试验选择,提取方法的选择,提取方法,加热回流,索氏提取,超声提取,冷浸,水蒸气蒸馏法,提取条件,的选择,加热回流,超声提取,冷浸,溶剂种类,溶剂用量,提取,时间,提取次数,索氏提取,溶剂种类,提取,时间,水蒸气蒸馏法,浸泡时间,蒸馏时间,提取条件,的选择,选用,3,种有一定极性差的对待测成分溶解性好且较少溶解杂质的溶剂提取,水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醚、石油醚等，亦可选择适当溶剂、适量比例混合,溶剂种类,依次选用不同的溶剂量，从低到高，平行操作，最终选用待测成分含量不再增加的溶剂量,溶剂用量,提取条件,的选择,依次增加提取时间，最终选用待测成分含量不再增加的提取时间。至少,3,个时间,提取时间,提取次数,依次增加提取次数，最终选用待测成分含量不再增加的提取次数,提取条件,的选择,提取条件,的选择,对温度和,pH,敏感的待测成分,平行试验法,正交试验法,还应考察温度和,pH,值的影响,比较方式,地黄药材中麦角甾苷含量测定,提取方式的选择,提取方式,相当于样品的,麦角甾苷峰面积,超声,45 min,446,加热回流,1.5 h,562,索氏提取,6 h,558,结果表明对麦角甾苷的提取效率来说，加热回流比超声提取法要好，与索氏提取无显著差异，由于索氏提取时间较长，考虑方法便捷性和效率，因此选用加热回流作为地黄药材中麦角甾苷的提取方法,地黄药材中麦角甾苷含量测定,的提取溶剂的选择,提取溶剂,相当于样品的,麦角甾苷峰面积,水,520,50%,甲醇,616,甲醇,602,结果表明，甲醇和,50%,甲醇提取率相差不大，,T,检验无显著差异，考虑操作及溶剂回收方便，因此选用甲醇作为提取溶媒,地黄药材中麦角甾苷含量测定溶剂用量的选择,提取溶剂用量（,ml,）,相当于,1g,样品的,麦角甾苷峰面积,20,532,50,562,100,578,结果表明，溶剂,50,倍量提取和溶剂,100,倍提取无显著性差异，而显著高于,20,倍量，因此选用甲醇,50ml,，作为最佳提取溶剂量。,地黄药材中麦角甾苷含量测定提取时间的选择,提取时间（,min,）,相当于,1g,样品的,麦角甾苷峰面积,30,534,60,530,90,527,结果表明，加入甲醇,50ml,，加热回流提取,30min,，,60min,，,90min,时，对麦角甾苷的含量无显著性差异，因此选择提取时间为,30 min,。,分离纯化方法的选择,液,-,液萃取,柱色谱分离纯化,沉淀,纯化方法,液,-,液萃取法,条件选择,液,-,液萃取法,萃取,溶剂,萃取的用量,萃取的次数,萃取,溶剂的选择,常被选用的溶剂,有,甲醇,、,乙醇,、正丁醇等,碱性条件下用三氯甲烷提取生物碱，,乙酸乙酯,可,提取黄酮化合物，,乙醚或石油醚,可,提取脂溶性化合物或挥发性成分,石油醚,可,除去脂肪油等亲脂性色素；,预测成分溶解度的性质，经反复处理，使其转溶于亲脂性溶剂和亲水性溶剂之间，以除去水溶性杂质和脂溶性杂质,能与酸性染料或大分子酸形成离子对，能溶于有机溶剂的性质，利用离子对的萃取与杂质分开,固液萃取法,条件选择,柱色谱分离纯化,法,固定相,选择,洗脱剂,选择,固定相的种类,固定相的用量,洗脱剂的种类,洗脱剂的配比,洗脱剂的用量,洗脱顺序,固液萃取法,条件选择,氧化铝、聚酰胺、大孔树脂、离子交换树脂、活性炭、硅烷化硅胶（,C18,、,C8,）、氨基键合相、硅胶等等,常用的固定相,柱容量考察成分的吸附与过载来确定固定相的用量,固定相的用量,或选用,2,种混合装柱,固液萃取法,条件选择,商品固相萃取柱,不同品牌的提取效率,批号的提取效率,沉淀法,不同沉淀试剂,沉淀试剂用量,沉淀法,试剂使杂质沉淀，保留溶液,试剂使预测定成分沉淀，然后滤取沉淀，弃去滤液,沉淀方式,提取方,法,联用,冷浸超声处理,加热回流沉淀法,中成药标准制定技术要求,1,中药提取纯化技术要求,2,中药分析方法验证内容,3,报告内容,验证项目,鉴别试验,限量检查,残留物、添加剂,含量测定,中药制剂溶出度、释放度,指纹图谱,三、,中药分析方法验证内容,提取效率,准确度,精密度（重复性、中间精密度和重现性）,专属性,检测限,定量限,线性,范围,耐用性,验证内容,在建立中药,定量,分析方法时应对提取效率进行考察,，以保证中药定量分析方法的准确,。,提取效率,Extract Efficiency,提取效率系指用,所建立的方法,可,将待测成分有效提取的程度,，一般用确定的提取方法所得结果与增加提取次数等完全提取方法所得结果的相对偏差表示,。,提取方法类型,完全提取法,（,索氏提取法、多次回流提取法等,）,平衡提取法,（,单次超声提取、单次回流提取等,）,提取效率,完全提取还应选择,1,至,2,种比规定溶剂极性稍大的溶剂同法操作，将选定溶剂测得结果与考察溶剂测得结果进行比较，选定溶剂的提取效率不得少于,95%,。,提取效率,完全提取应在规定的提取次数上增加,1,次至,2,次，测定结果与选定次数提取所得的含量值相比，相对偏差不得大于,5%,。,木芙蓉叶芦丁,含量加热回流提取效率的比较,回流次数,2,次,3,次,相对平均偏差,含量,0.85,0.87,1.2%,比较了加热回流,2,次和,3,次时的含量，及高极性溶剂以考察方法的提取效率，结果发现,木芙蓉叶芦丁,含量用稀乙醇加热回流,2,次法基本上可以将待测成分都提取出来,溶剂,稀乙醇,70%,乙醇,提取效率,含量,0.85,0.86,98.8%,平衡提取效率也可采用不同溶剂不同方法或多次提取的方法进行验证。将选定方法测得结果与考察方法测得结果进行比较，选定方法的提取效率不得少于,95%,。,提取效率,采用平衡提取法进行中药分析时，可采用规定的溶剂提取后，药渣再以相同体积的溶剂提取若干次，用适宜方法测定残留量，与规定的方法测定结果相比，相对偏差应不大于,5%,养胃颗粒芍药苷含量超声提取效率的比较,批号,超声次数,含量（,mg/,袋）,相对平均偏差,101101,1,次,36.6,-,2,次,35.7,1.2%*,3,次,35.7,1.2%*,比较了超声,1,次、,2,次和,3,次时的含量，以考察方法的提取效率，结果发现药典采用的超声,1,次法基本上可以将待测成分都提取出来,专属性（,Specificity,）,一种分析方法缺乏专属性时，可由其他辅助的分析方法作补充。,专属性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出被测成分的特性。鉴别试验、限量检查、含量测定等方法均应考察其专属性,（,a,）黄连纤维束,（,b,）吴茱萸非腺毛,左金丸显微图,左金丸由黄连和吴茱萸两味中药组成,，因,黄连及吴茱萸,均有石细胞，故分别用,黄连纤维束,与,吴茱萸非腺毛,的 特征作为,显微鉴别,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11,1.,空白阴性,2,6.,供试品,7.,枳壳对照药材（中检所，,121008-200505,）,8.,柚皮苷对照品（中检所，,111730-200603,）,9,11,供试品,通乐颗粒中枳壳的薄层色谱鉴别,妇乐颗粒大黄含测,HPLC,专属性色谱,图,大黄酚、大黄素对照品,缺大黄空白样品,妇乐颗粒样品,专属性验证,阴性干扰试验,色谱纯度试验,易混淆试验,专属性（,Specificity,）,如果处方中,2,味或,2,味以上药味含同一化学成分需要鉴别或测定，则应分别配制不含各单一味药及均不含这些药味的溶液作为空白溶液。,阴性干扰试验,空白阴性样品制备：取不含拟测定药味的群药，按照该药品的制备工艺制成空白阴性样品（注意加入全部辅料），再按拟定的样品制备方法制成空白阴性样品溶液,薄层色谱法目测空白阴性样品在与对照品相应的位置上应不出现相同颜色的斑点,其它色谱法（,GC/HPLC/TLCS,）空白阴性样品色谱图在相应保留时间（或位置）处应无色谱峰，含量测定若有色谱峰出现，一般干扰峰面积应在供试品色谱峰面积,5,以下,溶剂前沿,T: 13,RH,：,65,Merck,板（,UV365nm,）,1 2 3 4 5 6 7 89 10 11,1.,缺味,29.,供试品,10.,何首乌对照药材,11,大黄素对照品,溶剂前沿,T: 13,RH,：,65,Merck,板（氨蒸气熏后）,1 2 3 4 5 6 7 89 10 11,通乐颗粒何首乌的薄层色谱,专属性,图,缺补骨脂样品,HPLC,图,腰痛片,HPLC,图,异补骨脂素,HPLC,图,补骨脂素,HPLC,图,腰痛片,中,补骨脂素与异补骨脂素,专属性试验,含量及限量须采用二极管阵列检测器进行峰纯度检查，还可采用质谱检测对峰化学结构进行确认。,色谱纯度试验,应采用多个溶剂系统验证其专属性，一般可采用,2-3,个展开剂或流动相进行考察。,薄层色谱法还可采用二维展开等技术考察色谱斑点纯度。,除需鉴别的成分外不得分离出其他色谱峰或色谱斑点。,峰纯度考察图,试验中采用二极管阵列检测器对样品中,待测,色谱峰进行了色谱峰纯度检查，结果显示,1号,色谱峰未检测到杂质,，,2,号,色谱峰检测到杂质,对于多来源样品或有类似组分可能影响判定的，必要时应采用适宜方法验证其专属性,易混淆试验,薏苡仁薄层色谱鉴别照片,薏苡仁对照药材,2,、,3,、,4,薏苡仁样品,1 2 3 4,薏苡仁中淀粉粒显微特征图,药典,薏苡仁,有,3,个鉴别：,1,、显微鉴别,2,、薄层鉴别,3,、指纹鉴别,薏苡仁油与不同油类指纹图谱比较色谱图,橄榄油,薏苡仁油,大豆油,94,薏苡仁油,与不同油类指纹图谱比较色谱图,麻油,食用油,鸦胆子油,薏苡仁油,不同油类与薏苡仁油指纹比较色谱图（,2,）,线性（,Linearity,）,线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度直接呈正比关系的程度。,线性试验方法,制备梯度浓度对照品溶液，以相同体积点样或进样测定峰面积值，制备标准曲线，并以峰面积值与对照品浓度（或量）作线性回归，计算线性方程和相关系数。,线性测定的浓度一般最好达到,10,倍以上，其最低浓度可约为定量限浓度，至少制备,5,个浓度的供试品。,2.,制备同一浓度的对照品溶液，以不同体积点样或进样测定，同法处理。,相关系数：,HPLC-UV,、,GC,：,R,，,HPLC-ELSD,：,R,；,TLCS,：,R,线性,数据要求：,应列出回归方程、相关系数和线性图,范围（,Range,）,范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。,考察的区间应尽可能覆盖日后样品可能的含量范围,.,以标示量规定含量限度的，应考察标示含量,80%,和,120%,的范围,范围,对于仅规定含量下限的，至少应在限度的,50%,和,150%,进行考察。,对于规定含量区间的，应在低限含量的,80,50%,和高限含量的,120,150%,进行考察,范 围,范围可结合回收率试验进行,具体试验方法可以在回收率测定的高限和低限至少平行测定,3-6,份，分别计算回收率和精密度，应符合规定。,试验方法,有含量上下限的，应同时进行重复性和准确度考察,范围还可结合重复性试验进行，至少应进行,3,个浓度,9,份样品的试验，应符合规定。,范 围,验证试验过程中除取样量和进样量可改变外，一般不得改动实验操作中的规定如溶剂体积、提取时间、萃取次数等。,如实验结果证明的范围区间不合适，应根据样品情况改变考察区间或改变标准中样品的前处理条件，并经验证，使适合日后样品可能的含量范围。,金蚧片淫羊藿苷,含量范围试验,取样量,(g),样品含量,(mg),加入量,(mg),测得量,(mg),回收率,(%),平均回收率,(%),RSD,(%),0.1895,0.8186,0.8362,1.6370,97.9,99.2,1.05,0.1877,0.8109,0.8362,1.6404,99.2,0.1874,0.8096,0.8362,1.6525,100.8,0.1876,0.8104,0.8362,1.6342,98.5,1.1637,5.0270,4.9500,9.9324,99.1,99.3,0.95,1.1363,4.9087,4.9500,9.8686,100.2,1.1531,4.9814,4.9500,9.8524,98.4,1.1592,4.9814,4.9500,9.8524,97.9,1.1535,4.9832,4.9500,9.9184,99.7,1.1424,4.9352,4.9500,9.9100,100.5,按限度的,50%,和,300,考察测定范围的准确度,结果表明，本法在限度浓度,50%,300%,范围内能够准确测定,精密度（,Precision,）,精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度,(,离散程度,),精密度,重复性,(Repeatability),中间精密度,(Intermediate precision),重现性,(Reproducibility),精密度（,Precision,）,取同一供试品溶液，在同一薄层板上点,6-12,个相同量的斑点,依法测定，测板内峰面积积分值的,RSD,取同一供试品溶液，在不同的,6,块薄层板上点相同量的斑点，依法测定，测异板峰面积积分值的,RSD,同板精密度试验,异板精密度试验,薄层扫描（,TLCS,）应进行以下试验,试验方法,重复性,(Repeatability),重复性,:,在相同操作条件下，由同一个分析人员在较短的间隔时间内测定所得结果的精密度,重复性,(Repeatability),在规定范围内，取同一浓度的供试品，用,6,个测定结果进行评价；,或设计,3,个不同浓度，每个浓度各分别制备,3,份供试品溶液进行测定，用,9,个测定结果进行评价。,其中间浓度一般为供试品的取样量，其它,2,个浓度至少为测定浓度的,50%,和,150%,，如含量限度以标示量表示的，须用,9,个测定结果进行评价，分别以标示量的,80,、,100,和,120,的浓度进行测定。,试验方法,一般应满足以下规定,相对标准偏差,(RSD%),：,HPLC,、,GC,3%,TLCS,、,HPLC-ELSD,5%,重复性,(Repeatability),测定数据的精度要求,重复性,(Repeatability),生丹颗粒中补骨脂素测定重复性,1,取样量（,mg,）,补骨脂素量（,mg,）,含量,(mg/g,）,含量,平均值,(mg/g,）,平均值,(mg/g,）,含量,（,mg/,袋）,RSD,（）,5.0054,0.3115,0.06223,0.06335,0.06325,0.632,0.37,0.3227,0.06447,5.0066,0.3189,0.06370,0.06298,0.3117,0.06226,5.0144,0.3179,0.06340,0.06348,0.3187,0.06356,5.0066,0.3177,0.06346,0.06348,0.3179,0.06350,5.0038,0.3157,0.06309,0.06327,0.3175,0.06345,5.0145,0.3166,0.06314,0.06295,0.3147,0.06276,生丹颗粒中补骨脂素测定重复性,2,取样量（,mg,）,补骨脂素量（,mg,）,含量,(mg/g,）,含量,平均值,(mg/g,）,平均值,(mg/g,）,含量,（,mg/,袋）,RSD,（）,2.5078,0.1509,0.06017,0.06003,0.06186,0.619,2.82,0.1502,0.05989,2.5042,0.1472,0.05878,0.05870,0.1468,0.05862,2.5026,0.1514,0.06050,0.06046,0.1512,0.06042,5.0054,0.3115,0.06223,0.06335,0.3227,0.06447,5.0066,0.3189,0.06370,0.06298,0.3117,0.06226,5.0144,0.3179,0.06340,0.06348,0.3187,0.06356,7.5020,0.4570,0.06092,0.06163,0.4677,0.06234,7.5024,0.4748,0.06329,0.06284,0.4681,0.06239,7.5102,0.4808,0.06402,0.06326,0.4695,0.06251,生,丹,颗,粒,中,补,骨,脂,素,测,定,重,复,性,3,取样量（,mg,）,补骨脂素量（,mg,）,含量,(mg/g,）,含量,平均值,(mg/g,）,平均值,(mg/g,）,含量,（,mg/,袋）,RSD,（）,1.2571,0.0781,0.06213,0.06201,0.06453,0.645,4.00,0.0778,0.06189,1.2500,0.0782,0.06256,0.06208,0.0770,0.06160,1.2594,0.0805,0.06392,0.06388,0.0804,0.06384,5.0054,0.3115,0.06223,0.06335,0.3227,0.06447,5.0066,0.3189,0.06370,0.06298,0.3117,0.06226,5.0144,0.3179,0.06340,0.06348,0.3187,0.06356,12.4628,0.8309,0.06667,0.06783,0.8598,0.06899,12.6454,0.8453,0.06685,0.06586,0.8203,0.06487,12.4253,0.8477,0.06822,0.06933,0.8752,0.07044,3,种重复性试验方法比较,评价方法,补骨脂素含量（,mg/g,）,RSD,（,%,）,6,份,0.06325,0.37,9,份,0.06186,2.82,9,份,0.06453,4.00,AVERAGE,（,mg/g,）,0.06321,RSD,（,%,）,2.11,结果表明九份不同浓度的,RSD,高于六份同浓度的,RSD,。,重复性,(Repeatability),同板重复性,板间重复性,薄层扫描（,TLCS,）重复性,中间精密度,(Intermediate precision),考察的目的：考察随机变动因素对精密度的影响,考察的变动因素,:,不同时间 不同分析人员 不同设备至少,2-3,人采用同一设备或同一人采用,2-3,台不同设备，对同一批样品测定含量。计算不同操作者或不同设备测定的含量平均值和相对标准偏差。,不能仅考察不同分析时间的测定结果。,有重现性考察的，可以免做中间精密度。,在同一个实验室，不同时间由不同分析人员,用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度。,重现性,(Reproducibility),重现性系指在不同实验室由不同分析人员、不同设备测定结果之间的精密度,目前阶段，该项试验可采用起草和复核试验的测定数据进行评价。但应由起草单位根据复核所的复核数据，报送两个实验室之间的相对标准偏差。,考察的目的：当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验,起草单位与复核实验室的数据计算相对偏差，一般不得过,10%,。,如采用薄层扫描法，可适当放宽为不得过,15%,若前处理方法操作复杂或含量极低可视情况适当放宽。,重现性,建立的分析方法至少要有一家不同的实验室进行复核,*市药品,检验所,*省药品,检验所,批号,芍药苷含量（,mg/,丸）,芍药苷含量,（,mg/,丸）,相对平均偏差（）,7121642,13.0,14.0,3.70,7122247,12.5,13.1,2.34,8125344,10.3,10.9,2.83,8125345,11.3,12.1,3.42,参芍片,的,芍药苷含量测定,重现性,结果,准确度,(Accuracy),系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，有时也称真实度，一般用回收率,(%),表示。,以加入对照品测定的回收率表示，一般有空白回收（制剂空白）和加样回收测定的方法（中药材、复方制剂等）,以经典方法的测定值作为真值，建立方法的测定数据与之比较（该法适用于化学单体药物）,准确度,(Accuracy),在加样回收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差,回收率,%=,（,C-A,）,/B100%,式中,A,为供试品所含被测成分量；,B,为加入对照品量；,C,为实测值。,准确度,(Accuracy),同一样品，制备相同浓度的,6,份样品（样品取样量减半，以,1,：,1,比例加入对照品）,试验方法,同一样品，制备,3,个浓度的供试品，每个浓度分别制备,3,份供试液，对照品的加入有以下,3,种方式：,准确度,(Accuracy),取相同量样品,9,份（一般为样品取样量的一半），设计,3,个浓度，按不同比例加入对照品。中间浓度一般按,1,：,1,比例加入，低、高浓度可选：,1,、：,1,的比例。加入的对照品的量要适当，保证供试品溶液的浓度（或量）在考察的线性范围内。,按标示量计算的组分，可参照化学药品测定方法，取,9,份样品，按：,1,、,1,：,1,、,1,：的比例加入对照品（样品取样量减半）,取,3,个不同量的样品各,3,份，每个取样量分别按,1,：,1,比例加入对照品，中间,取样量为供试品减半的量,，其他,高低浓度至少为所取样品含量的,50%,和,150%,，,也,可以选择范围的最高、最低点进行测定。,准确度,(Accuracy),供试品取样量,样品中待测成分含有量,对照品加入量,测定量,回收率计算值（,%,）,相对标准偏差（,RSD%,）,报告的数据,痕量分析,含量, 1%,回收率,95%-105%,回收率具体要求视样品含量范围不同而定,准确度,(Accuracy),准确度,(Accuracy),一般应满足以下规定,相对标准偏差（,RSD%,）,HPLC/GC,3%,TLCS,5%,，,测定数据的精度要求：,感冒清热颗粒中葛根素含量测定回收率,1,编号,样品含量,(ug),加入葛根素的量,(mg),测得葛根素总量,回收率,(%),平均回收率,(%),RSD(%),1,881,930,1853,104.52,97.22,3.71,2,877,1785,97.63,3,875,1764,95.59,4,884,1767,94.95,5,883,1773,95.7,6,878,1761,94.95,准确度,(Accuracy),感冒清热颗粒中葛根素含量测定回收率,2,编号,样品含量,(ug),加入葛根素的量,(mg),测得葛根素总量,回收率,(%),平均回收率,(%),RSD(%),1,881,1853,104.52,2,877,930,1785,97.63,99.25,4.71,3,875,1764,95.59,7,881,1341,98.92,8,882,465,1340,98.49,97.7,1.79,9,883,1328,95.7,10,885,2240,97.13,11,884,1395,2254,98.21,97.51,0.62,12,881,2237,97.2,将序号,1-3,7-12,进行统计分析，结果平均回收率为,98.15,，,RSD=2.65%,。,准确度,(Accuracy),感冒清热颗粒中葛根素含量测定回收率,3,编号,样品含量,(ug),加入葛根素的量,(mg),测得葛根素总量,回收率,(%),平均回收率,(%),RSD(%),1,881,1853,104.52,2,877,930,1785,97.63,99.25,4.71,3,875,1764,95.59,13,228,453,96.98,14,228,232,453,96.98,97.99,1.78,15,229,461,100,16,1322,2656,95.63,17,1321,1395,2640,94.55,95.03,0.58,18,1319,2643,94.91,将序号,1-3,，,13-18,进行统计分析，结果平均回收率为,97.42,，,RSD=3.13%,。,3,种回收率试验方法比较,1,、,同量同加,2,、同量异加,3,、异量同加,检测限,（,Limit of,Detection,，,LOD),检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。,试验方法：,直观法,仪器法（信噪比法）,检测限试验方法,1,、,目测法,主要用于非仪器方法。采用直接观察理化反应的颜色、浊度，薄层色谱的斑点颜色、荧光强度等方法，判断方法的检出限量。,理化反应,采用被测物或已知被测物含量的样品，配制一系列低浓度溶液，按拟定方法试验，以目测可明显观测到的颜色或浊度样品的浓度或量作为检出限,。,薄层色谱法,采用被测物质的对照品，或已知被测物含量的样品，配制成一系列低浓度溶液，按拟定的方法试验，目测比较斑点颜色或荧光强度等，以目测可明显观测到斑点的浓度或量作为检出限。,2,、,信噪比法,适用于能显示基线噪音的分析方法，主要为各种色谱法等仪器方法。,检测限试验方法,可采用被测物质的对照品，或已知被测物含量的样品，配制成一系列低浓度溶液，按拟定的方法试验，记录上述样品和空白样品的基线噪音，并进行比较。以样品峰高高度明显大于,3,倍或,2,倍空白样品基线高度的相应浓度（或量）作为检出限。,定量限（,Limit of Quantitative, LOQ,）,定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。,一般以,10,倍于噪音的对照品溶液重复点样或进样,5-6,次，计算重复点样或进样的峰面积值的,RSD%,。当,RSD%,3%,（薄层扫描法）或,2%,（高效液相色谱法,/,气相色谱法）的浓度（或量）为方法的定量限。若,RSD%,较大，应重新调整对照品溶液的浓度，进行测定。,试验方法,耐用性（,Robustness,）,耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据,开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明,经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效,耐用性,HPLC,、,GC,溶液的稳定性,：,一般应在配制后,0,24,小时内选择,6,个时间点进样。,峰面积相对标准偏差,RSD,3%,稳定性试验,TLCS,斑点的稳定性,：,显色之后,0,4,小时之内,4,6,个时间点扫描斑点的峰面积,相对标准偏差,RSD,5%,溶液的稳定性,：,对照品和供试品溶液配制后,0,24,小时内选择,6,个时间点,相对标准偏差,RSD,5%,耐用性,稳定性试验,时间,峰面积,平均峰面积,RSD(%),0,602.4318,1h,603.6310,2h,606.7673,3.5h,609.8906,607.7464,0.61,7h,608.7551,14h,609.7924,20h,612.9564,健胃片稳定性试验测定结果,分离纯化的耐用性,固液萃取法,：,应考察至少,2,3,个品牌或厂家的柱填料或固相萃取小柱的适用性，考察样品分离纯化的效果，其测定结果应无显著差异。,不同品牌,C,18,小柱相似度比较结果,序号,生产公司,型号,相似度,1,Phenomenex,公司,strata C18,E,1.000,2,Agilent,公司,Bond II ODS C18,1.000,3,天津开发区富集色谱技术发展公司,Bond Elute C18,样品净化柱,0.999,4,瓦里安公司,Bond Elut-C18,1.000,5,Alltech,公司,Extract-clean columns C18,1.000,比较结果认为：五种小柱的提取液的指纹图谱一致，说明该固相萃取条件适用强,不同批号固相萃取小柱处理结果,C18,小柱批号,1,号峰,2,号峰,3,号峰,4,号峰,5,号峰,6,号峰,7,号峰,8,号峰,9,号峰,峰面积百分比,S201-9,1.45,2.08,24.24,3.59,48.64,4.36,3.63,5.95,6.12,S201-2