实验一abo及rh血型鉴定20133

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验一ABO血型鉴定和Rh血型鉴定,临床检验诊断学实验室,1,实验内容,一、,5%,红细胞悬液的配制二、,ABO,血型鉴定（试管法、纸片法）,三、,Rh,血型鉴定,?,2,一、5%红细胞悬液的配制,原理：,使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，获出最佳结果。,器材,:,小试管,（玻璃及塑料皆可）,、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。,试剂,:,生理盐水。,标本,:,抗凝或非抗凝静脉血。,3,操作,1、全血2ml 1000g离心5min，吸取分离上清至另一干净试管（备用）；,2、压积加生理盐水约23ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液；,3、重复离心（1000g，60s）洗涤红细胞3次，去掉上清液制备压积红细胞；,4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中，在其中加入19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%的红细胞悬液。,4,目的：,掌握,ABO,正反定型的原理、方法。,原理：,红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定,ABO,血型。,正定型,：用已知,血型特异性抗体,（抗,-A,、抗,-B,）来测定红细胞上有无相应的抗原；,反定型,：用已知,血型试剂红细胞,测定血清中有无相应的抗体。,二、ABO鉴定,5,6,器材,:,记号笔、小玻璃试管、,滴管、试管架、离心机、,鉴定纸板、,显微镜。,试剂,:,1. ABO,血型抗体：抗,A,、抗,B(-A,、,-B),；,2,试剂红细胞：,3,5,Ac,、,Bc,及,Oc,。,3.,生理盐水。,标本,:,抗凝或非抗凝静脉血。,7,操作,（试管法）,(1),标记试管：,正定型：取洁净小试管,2,支，分别标明,A,、,B,；反定型：取,3,支小试管，标记,Ac,、,Bc,、,Oc,。,(2),配,5%,悬浮红细胞：,取静脉血,2,滴于小试管中，加,2ml,生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复,3,次。取管底,1,滴压积加,19,滴生理盐水，即为,5%,悬红。,(3),加样：,正定型管,中分别加入,1,滴试剂,和,1,滴悬红，,反定型管,中分别加入,2,滴血清,和,1,滴试剂红细胞。,（,4,）离心：,1000g离心,15,秒。,(5),结果：,轻摇试管,观察有,无凝集或溶血现象,。,8,4+,红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。,3+,红细胞凝集成大小块，血清清晰。,2+,红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。,l+,肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。,镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。,mf,混合凝集外观（,mixed field,）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。,表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。,红细胞凝集强度判断标准,9,试管法结果判定,10,表,l ABO,血型正反定型结果,试剂血清+受检红细胞 受检血清+试剂红细胞,（正定型） （反定型）,-A -B 受检血型 Ac Bc Oc, A , B , O , AB ,判断标准,11,操作：玻片法(鉴定纸板),(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者10红细胞悬液l滴，混匀。,(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。,(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充分混匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。,玻片试验时可用低倍镜观察结果。,12,正定型 反定型,13,注意事项,1.,试剂,2.,悬红,3.,蛋白,4.,溶血,5.,冷抗体,6.,老年、儿童,7.,污染,14,目的,掌握Rh血型鉴定的原理、方法。,原理,Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。,在临床输血中,一般只做D抗原的鉴定,，被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。,三 、,Rh,血型鉴定,15,器材,小试管、滴管、试管架、,记号笔,、鉴定纸板、显微镜、离心机。,试剂,1.Rh抗血清：常用的为,IgM抗,抗D（其他为抗C、抗c、抗E、抗e）。,2.己知Rh阳性和阴性的5红细胞悬液各1份,3.生理盐水。,标本,静脉血,。,16,操作(盐水试管测试法),1.取单克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。,2.每管各加1滴35待检红细胞悬液。,3.充分混匀，以1000 g离心15秒。,4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。,5.判定结果,17,18,注意事项,1用抗D血清进行Rh血型鉴别时，结果为阴性，不能直接报告Rh阴性，需进一步检测,弱D型还是部分D型。,2Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。,3.Rh血型系统的抗体多为后天免疫刺激产生，不需要做反定型。,19,作业,简述导致血型鉴定出现正反定型不一致的常见原因。,20,