临床医学检验红细胞的检查以及临床意义

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,临床医学检验红细胞的检查以及临床意义,红细胞,（red blood cell,RBC,;,erythrocyte,）,血液中数量最多的有形成分,主要成分：,血红蛋白,主要功能：,呼吸载体,直径：,6.7 9.5 um，平均7.2 um,形状：,双凹圆盘状,RBC,红细胞的生成,Stem cell,Epo,原始红细胞,早幼红细胞,中幼红细胞,晚幼红细胞,网织红细胞,成熟红细胞,释放入血,72h,48h,平均寿命120 d,红细胞计数,（red blood cell count，RBC）,定义：,单位体积（每升）血液内的红细胞数量,原理：,用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池，于显微镜下计数一定体积范围的红细胞数，并换算得每升血液中红细胞数(/L),红细胞稀释液,稀释液：,保护计数细胞，破坏非计数细胞，同时抗,凝，要求不含杂质,红细胞稀释液：,Hayem液，,由氯化钠、结晶硫酸钠、,氯化高汞组成,作用：,氯化钠,调节渗透压，,结晶硫酸钠,防止细胞,粘连，,氯化高汞,防腐,计数方法,手工法,：取样,稀释,计数,计算,仪器法,：电阻抗分析或激光分析,手工法,10 uL末梢血+2 ml稀释液,混匀稀释,充池,计数,计算,成年男性,（4.0 - 5.5）10,12,/L,成年女性,（3.5 - 5.0）10,12,/L,初生儿,（6.0 - 7.0）10,12,/L,外周血红细胞参考值,思 考,手工法VS仪器法？,血红蛋白测定,（ hemoglobin，,Hb,）,血红蛋白的组成,珠蛋白,（globin）（,4条肽链,）,亚铁血红素,（heme）（,1个,）,血红蛋白,珠蛋白具有种属特异性，含有两条,链,和两条,非链,正常成人的Hb包括：,HbA ,2,2,（90%以上）,HbA2 ,2,2,（2 3%）,HbF ,2,2,（2%以下；新生儿占70%）,受激素调节,红细胞生成素,：直接,雄激素,：直接和间接,自身调节,血红素,过多 氧化为,高铁血红素,负反馈,血红蛋白的合成,血红蛋白的代谢,珠蛋白,氨基酸,血红素,胆色素,（胆绿素、胆红素、,胆素原及胆素）,血红蛋白,还原血红蛋白,（,reduced hemoglobin,，,Hbred,）,氧合血红蛋白,（,oxyhemoglobin,，,HbO,2,）,高铁血红蛋白,（,hemiglobin,，,Hi,）,碳氧血红蛋白,（,HbCO,）,硫化血红蛋白,（,SHb,）,血红蛋白的种类,血红蛋白的测定,定义,指单位体积血液中所含血红蛋白的量,参考值,成年男性：,120-160g/L,成年女性：,110-150g/L,初生儿：,170-200g/L,Hb测定方法,分光光度计比色,氰化高铁血红蛋白测定法,（HiCN）（,国际标准参考方法,）,十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法,（SDS-Hb）（,次选方法,）,叠氮高铁血红蛋白测定法,（HiN,3,）,碱羟血红蛋白测定法,（AHD575）,目视比色,沙利法、测铁法、测氧法、比重法、折射仪法、光谱分析法,仪器法,氰化高铁血红蛋白测定法,（HiCN）,为国际标准参考方法,步骤：,取样 加转化液（溶血、转化） 比色,原理：,血液在血红蛋白转化液中溶血后，除,SHb,外各血红蛋白均可被,高铁氰化钾,氧化成,高铁血红蛋白,，再与,CN,-,结合生成稳定的,棕红色,氰化高铁血红蛋白,，通过比色根据吸光度测得血红蛋白的浓度。,方法：,计算：,有三种方法求得Hb浓度,1.,A367.7,2.,得A值后，在标准曲线上直接查找,3.,AK,KHb / A,转化液,5ml +,血,20ul(5min)，,比色,读吸光度（A）,(540nm),标准曲线的绘制,用一组已知浓度的,HiCN参考液,，在分光光度计上分别测定A值，以,A,为纵座标，,血红蛋白参考值,为横座标，绘制标准曲线。,例如：HiCN参考品,Hb g/L：,50 100 150 200,A ：,如果标本A为0.32，则标本Hb = 0.32370.37 = 118.52（g/L）,优点,操作简单,呈色快且稳定,除,SHb,外均可检测,根据吸光度直接定值,方法学评价,缺点,KCN有剧毒,HbCO转化较慢,高WBC和高球蛋白血症可致溶液浑浊,红细胞计数与血红蛋白测定的临床意义,生理变化,年龄与性别,新生儿：,RBC高，两周后,下降，6-7岁最低,男性：,25-30岁高峰,女性：,13岁-15岁达高值，,21岁-35岁低水平，以后,渐渐增高,精神因素,肾上腺素 RBC,剧烈体力劳动或运动,相对缺氧 Epo RBC,气压降低,缺氧 代偿性RBC,妊娠中后期,血液稀释 RBC,老年人,造血功能减退 RBC,病理变化,红细胞和血红蛋白增多,相对增多,：,血浆中水分丢失，血液浓缩所致，如呕吐、,腹泻,绝对增多,：,原发性,真性红细胞增多,继发性,低氧血症 Epo （如心血管病、肺,疾病、异常血红蛋白病）,肾上腺皮质功能亢进,红细胞生成素代偿性增加,生理性：,新生儿 高原居民,病理性：,严重慢性心、肺疾患、异常血红蛋白病,红细胞生成素非代偿性增加：,某些肿瘤或肾脏疾患,红细胞和血红蛋白量减少,主要见于贫血：,由于各种原因引起的全身血循环中红细胞总数、血红蛋白和红细胞比积减少，低于该地区、该年龄及性别组的参考范围低限时称贫血。,贫血病因,生成减少,破坏过多,失血过多,1）,骨髓造血功能减退,药物、物理因素、慢性肾衰、再障、白血病、恶性肿瘤骨髓转移,2）,造血原料不足,缺铁,（缺铁性贫血）、,缺乏VitB12或叶酸,（巨幼细胞性贫血）,3）,红细胞破坏增加,溶血性贫血,（输血不合、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症）,4）,红细胞丢失过多,各种原因的失血（如消化性溃疡、痔疮、钩虫病）,注意问题,Hb测定对贫血程度的判断优于RBC计数,在某些病理情况下，Hb和RBC的浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量，如：,急性失血,、,水潴留,、,失水,等,发生大细胞贫血或小细胞低色素贫血时，RBC计数与Hb浓度不成比例,红细胞形态检查,红细胞形态观察,大小及均匀程度,红细胞形状,血红蛋白含量,细胞内结构,红细胞大小改变,直径 例如,小红细胞, 10um 巨幼细胞贫血,巨红细胞, 15um 巨幼细胞贫血,大小不均,增生性贫血,A,C,B,A：,normal,B： megalocyte,C： anisocytosis,红细胞形状改变,球形红细胞,遗传性或获得性,椭圆形红细胞,遗传性,靶形红细胞,珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病,口形红细胞,遗传性,镰形红细胞,异常血红蛋白S（HbS）,棘形红细胞,遗传性或获得性,-脂蛋白缺乏症,新月形红细胞,阵发性睡眠性血红蛋白尿症,泪滴形红细胞,贫血、骨髓纤维化症,缗钱状形成,纤维蛋白原和球蛋白增高,裂红细胞,DIC、微血管病性溶血性贫血,红细胞形态不整,巨幼细胞性贫血,spherocyte,Elliptocyte,人为假椭圆红细胞,Target cell,stomatocyte,Sickle cell,镰形红细胞,acanthocyte,meniscocyte,Tear drop cell,Rouleaux formation,schistocyte,poikilocytosis,血红蛋白含量改变,正常色素性,急性失血、再障、白血病,低色素性,缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血,高色素性,巨幼细胞性贫血,嗜多色性,溶血性或急性失血性贫血,细胞着色不一,铁粒幼红细胞性贫血,normochromic,hypochromic,hyperchromic,polychromatic,人为,面包圈,红细胞,铁粒幼红细胞性贫血,细胞内的异常结构,嗜碱性点彩红细胞：,RNA， 铅中毒,染色质小体,（,豪焦小体,）,：,核残余物，巨幼细胞贫血、,脾切除后,卡波环：,脂蛋白变性，巨幼细胞贫血、铅中毒,寄生虫：,疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫,有核红细胞：,溶血性贫血、造血系统恶性疾患或骨髓转移,性肿瘤、慢性骨髓增生性疾病、脾切除后,Basophilic stippling cell,Howell Jollys body,Cabot ring,疟原虫,（malarial parasite）,有核红细胞,红细胞的各种改变,红细胞比容测定,（Hematocrit，HCT）,定义：,抗凝血在一定条件下离心沉淀，求出单位体积血液中红细胞占的体积百分比（L/L）。,与红细胞数量以及红细胞大小有关,温氏法,（常量，中速离心）,微量法,首选常规方法,放射性核素法,参考方法,折射计法,、,黏度法,、,比重法,、,电阻抗法,（仪器）,测定方法,参 考 值,温氏法,微量法：,仪器法：,离 心 法,EDTA抗凝,离心,Plasm,PLT,WBC,RBC-red,RBC-O2,诊断贫血并判断其,严重程度,，结合有关指数变化可推断贫血,病因,，并对贫血进行,分类,；,评估血浆容量有无增减或稀释浓缩程度，有助于补液量的控制。,增高：,血液浓缩、原发性或继发性红细胞增多症,降低：,贫血、稀释血症（充血性心力衰竭、妊娠、 输液过多）,临床意义,红细胞平均指数,通过,RBC计数,、,Hb测定,、,HCT测定,可计算出红细胞平均指数,定义：,每个红细胞的平均体积。以,飞升,（fL）为单位,计算：,MCV,=,HCT,/,RBC,例如：,RBC为3.5010,12,/ L，Hct为0.36，则：,MCV = 0.36 3.5010,12,/ L = 103 fL,参考值：,手工法 80 92 fL 仪器法80 100 fL,红细胞平均容积,（mean corpuscular volume, MCV）,红细胞平均血红蛋白量,（mean corpuscular hemoglobin，MCH）,定义：,每个红细胞内所含平均血红蛋白的量，以皮克,（pg）为单位,计算：,MCH,=,Hb,/,RBC,例如：,RBC为3.5010,12,/ L，Hb为120 g/L，则：,MCH = 120 g/L 3.5010,12,/ L = 34.20 pg,参考值：,手工法 27 31 pg 仪器法 27 34 pg,红细胞平均血红蛋白浓度,(mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC）,定义：,单位容积红细胞的平均血红蛋白浓度，,以g/L为单位,计算：,MCHC = Hb / Hct,例如：,Hb为120 g/L，Hct为0.36，则：,MCHC = 120 g/L 0.36 = 333 g/L,参考值：,320 360 g/L,临床意义,MCV,、,MCH,、,MCHC,可从不同侧面反映红细胞的病理变化，有利于分析病人红细胞,形态特征,，进行,贫血分类,、,诊断,和,鉴别诊断,。,贫血分类,MCV,MCH,MCHC,常见病因,正常细胞性,正常,正常,正常,再障、急性失血、急性溶血、白血病,大细胞性,增高,增高,正常,巨幼细胞性贫血,单纯小细胞性,减低,减低,正常,慢性感染、尿毒症,小细胞低色素性,减低,减低,减低,缺铁性贫血、地中海贫血、慢性失血,贫血的红细胞形态学分类,红细胞体积分布宽度,（RBC Volume Distribution Width，RDW）,定义,红细胞体积分布宽度是由血液分析仪根据,红细胞体积,的直方图导出，反映周围血红细胞体积,异质性,的参数，是反映,红细胞大小均一程度,的客观指标，常用,变异系数,（CV）或,标准差,（S）表示。,临床意义,与MCV结合进行贫血分类：,这种分类法更能反映贫血的病理变化，对贫血的鉴别诊断有一定的价值。,诊断缺铁性贫血：,IDA的病人95%以上RDW增高，可与-珠蛋白生成障碍性贫血（88%RDW正常）鉴别。,贫血类型 常见疾病,大细胞均一性 部分再障,大细胞不均一性 巨幼细胞性贫血,正细胞均一性 急性失血,正细胞不均一性 再障、部分溶贫,小细胞均一性 地中海贫血,小细胞不均一性 缺铁性贫血,思 考,某女性病人，测得红细胞为 2.8*,10,12,/L，血红蛋白为65g/L，血细胞比积0.20。,计算：,MCV,、,MCH,、,MCHC,该病人属于哪种类型的贫血,下一步检测的方向,网织红细胞计数,（reticulocyte，Ret）,Ret是介于,晚幼红细胞,和,成熟红细胞,之间尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质（,核糖体,和,RNA,），可被某些染料（如,煌焦油蓝,等）活体染色呈蓝色网状或颗粒状结构，故而得名。,直径：,8 9.5 um,骨髓中网织红细胞数比外周血高约3倍,定 义,根据Ret的形态特征和成熟程度分为五型：,0,型,（,花冠型,）：,有核网织红细胞,型,（,丝球型,）：红细胞几乎被网织物充满,型,（,网 型,）：红细胞中央线团样结构开始松散,型,（,破网型,）：网织结构稀小，呈不规则枝点状排列,型,（,点粒型,）：呈分散的细颗粒、短丝状,ICSH将网织红细胞分为,I IV型,方法学选择,手工法,（manual）,染料：,新亚甲蓝,、,煌焦油蓝,等,新亚甲蓝,对Ret染色力强且稳定，为WHO推 荐染料。,煌焦油蓝,应用历史长，但易产生沉淀。,原理：,RNA带负电荷，与带正电荷的染料形成复合物，呈深染的颗粒状或彼此连缀成网状结构。凡含,两个,以上的,深染颗粒,或具有,线网状结构,的无核红细胞，即为Ret。,玻 片 法,10 g/L 煌焦油蓝乙醇溶液,加染液,加血液,制备涂片,观察，计算,混合血液中水分易蒸发，染色时间短，染料沉渣干扰，计数结果不准确。,试 管 法,10 g/L 煌焦油蓝生理盐水溶液,染液 + 血液（等量），混匀，置室温 15 20分钟,制备涂片,观察、计算,重复性好，染色时间长。,Miller窥盘计数法,将,Miller窥盘,置于接目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位计数。,A,B,计算,1.,网织红细胞%,= 100,2.,绝对值计算,：（ 10,9,/L）,大格网织红细胞总数,小格红细胞总数9,仪 器 法,染料：,荧光染料（吖啶橙等）,原理：,荧光染色，激光测量。,方法：,流式细胞仪,网织红细胞计数仪,可同时将Ret分为,高荧光强度,（HFR）、,中荧光强度,（MFR）、,低荧光强度,（LFR）,测量细胞多，避免主观因素的影响，方法易于标准化,如遇,NRBC,、,Howell-Jolly小体,、,巨大血小板,可呈假阳性,Reference value,成人：,25 75 10,9,/L,新生儿：,临床意义,正常外周血中网织红细胞多为,型,（0.20.3）和,型,（0.70.8）,判断骨髓红细胞生成情况,观察贫血疗效的重要指标,骨髓移植后监测其造血功能,放/化疗时骨髓功能监测,网织红细胞其它参数,Reticulocyte maturity index,（RMI）,RMI =（HFR+MFR）,/,LFR,100,增高,：溶贫、ITP、CLL、AL、PV、AA、MM,降低,：骨髓衰竭、无效造血，如巨幼贫,Reticulocyte production index,（RPI）,被测Hct,正常人Hct,表示网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍,Ret成熟天数,1,RPI = Ret%,LFR和HFR,作为鉴别诊断的初筛指标,溶贫：,Ret、LFR和HFR升高,肾性贫血：,HFR升高、LFR降低、Ret正常,IRF,（Immature reticulocyte fraction）,未成熟网织红细胞比率,IRF = MFR + HFR,估计骨髓移植后造血恢复的早期指标,点彩红细胞计数,（Basiphilic stippling count）,红细胞在发育过程中受到损害，胞质中残存的嗜碱性物质RNA变性沉淀，瑞氏染色时呈现粗细不等的蓝黑色颗粒。,参考值：,0.01%,临床意义：,重金属及硝基苯、苯胺中毒、贫血,点彩红细胞（%）=,50个视野内点彩红细胞数,5个视野内红细胞总数10,红细胞沉降率,（Erythrocyte sedimentation rate，ESR）,定义,单位时间内红细胞在一定条件下沉降的速度， 以,mm/h,表示,红细胞与血浆的密度差,离体抗凝血逐渐形成缗钱状红细胞，自然下沉，堆积于试管的底部,原 理,1期：,缗钱状红细胞形成期，数分钟10min,2期：,快速沉降期，约40 min,3期：,红细胞堆积期,血沉过程一般分为三期：,方法选择与评价,手工法,魏氏法,（Westergren）,：,简便实用，为血沉测定的标准法,温氏法,（Wintrobe）、,潘氏法,血沉仪法,动态记录整个血沉过程的变化，描绘出红细胞沉降的曲线,血沉动态曲线,魏 氏 法,0.4 ml,抗凝剂 +,1.6 ml,静脉血,将混匀全血吸入血沉管至“0”刻度，拭去管外余血，将血沉管直立于血沉架上,1 h后读取ESR,Reference value,魏氏法,成年男性：0 15 mm/h,成年女性：0 20 mm/h,潘氏法,成年男性：0 10 mm/h,成年女性：0 12 mm/h,影响ESR 的因素,血浆,血浆逆阻力,红细胞沉降力,血浆蛋白成分,红细胞,表面电荷、形状、数量、聚集程度,血沉管与血沉架,每倾斜3,。,，血沉加快30%,白蛋白、卵磷脂,ESR,纤维蛋白原、球蛋白、急性反应蛋白,ESR,血标本,脂肪血,ESR；抗凝剂浓度,ESR；,抽血在30 s内完成，血液凝固,ESR,温度,18 25，温度,ESR,及时测定,室温标本2 h；4标本6 h,其它,注射器、试管、血沉管干燥洁净，以避免溶血,临床意义,血沉增快,生理性：,儿童，妊娠，老年人,病理性：,感染或炎症,组织损伤及坏死,恶性肿瘤,贫血,慢性肾炎、肝硬化,高球蛋白血症、高胆固醇血症,血沉减慢,新生儿,真性红细胞增多症,镰状红细胞贫血等,高粘滞性综合征,肝病、肿瘤等严重疾病,血沉的测定缺乏特异性，可用于疾病的动态观察以及疗效判断,总 结,