形态暨影像平台—流式细胞仪介绍概论

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,形态暨影像平台,流式细胞仪,生理,129,室,BD FACSCalibur,全自动双激光四色流式细胞分析系统,FACSCalibur,检测器组,（激光器）,PMT,位置,（荧光光谱峰值范围）,适用染料,颜色,488nm,蓝色激光,FL1 (,波长,515-545nm,）,FITC,绿,FL2,（波长,564-606nm,）,PE, PI,橙红,FL3,（波长,650nm),PerCP,PerCP-Cy5.5, Cy5,红,635nm,红色激光,FL4 (,波长,640-680nm),APC,深红,流式细胞仪的检测范围,细胞结构,细胞大小,细胞颗粒度,细胞表面积,核浆比例,DNA,含量与细胞周期,RNA,含量,蛋白质含量,细胞功能,细胞表面,/,胞浆,/,核的特异性抗原,细胞活性,细胞内,/,外的细胞因子,激素结合位点、细胞受体,蛋白磷酸化,pH,值,钙离子浓度,细胞膜电位、线粒体膜电位,DNA,细胞周期分析,细胞周期,G,2,M,G,0,G,1,s,200,400,600,800,1000,G,0,G,1,s,G,2,M,DNA,含量,细胞数量,2N,4N,细胞周期分析,活体染料,CFSE,测定细胞增殖,Proliferation Wizard Basic Model,File:,Date acquired: 14-Nov-08,Date analyzed: 19-Oct-2012,Parent: 63.73 % at 171.00,Generation 2: 20.44 % at 151.81,Generation 3: 12.01 % at 132.62,Generation 4: 3.82 % at 113.43,Proliferation Index: 1.29,Nonproliferative Fraction: 0.82,Division Error Index: 1.00,Spacing of generations: 19.19,For cells at generation = 3:,Upper Generation P.I.: 4.55,Precursor Frequency: 0.044944,Number of Cells Analyzed: 17445,Reduced Chi-Square: 9.643,CBA,（微球阵列分析技术）,胞内活性氧水平的检测与分析（,ROS,）,细胞膜电位的检测与分析,细胞内钙离子浓度的检测与分析,细胞表面分子的检测与分析,免疫细胞及亚群的检测与功能分析,血液系统细胞表面标志的研究,细胞群体及细胞表面标志变化的监测,细胞表面标志构成性质的分析,其他常用检测与分析,流式细胞仪的主要技术指标,荧光测量灵敏度（衡量仪器检测微弱荧光信号的重要指标）,以能检测到单个微球上最少标有,FITC,或,PE,荧光分子数目来表示，一般可达到,600,个荧光分子。,仪器的分辨率（衡量仪器测量精度的指标）,用变异系数,CV(Coefficient of Variation),值来表示。最佳状态时,CV2,前向角散射光检测灵敏度,能够检测到的最小颗粒大小，一般可检测到左右,分析速度,每秒可分析的细胞数。一般可达,3000,个,/,秒,6000,个,/,秒，,FACSCalibur,的分析速度为,10000,个,/,秒,实验流程,1.,预约,填写预约表,确定实验方案（染色方案，对照设置）,2.,上机实验,样本获取及分析,3.,实验结果输出,4.,登记,生理楼,129,