Hep-2细胞的传代培养

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细胞培养技术（实验篇）,2007,年,12,月,3,日 合肥,1,实验四,Hep-2,细胞的传代培养,2,一、原理,体外培养的细胞形成单层汇合以后，由于细胞密度过大,生存空间不足而引起营养枯竭，将影响细胞的继续生长，此时需将培养的细胞分散，从容器中取出，以,1:2,或,l:3,以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。,传代培养可获得大量的同种细胞，并维持细胞种的延续,同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。,3,细胞“一代”,指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞倍增,3,6,次。,4,二、材料和试剂,1,、细胞：,Hep-2,细胞,2,、试剂：,PBS,、,VTP,、,DMEM,营养液（含,10,小牛血清）,3,、仪器和器材：倒置显微镜、,CO,2,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等,5,三、操作方法,将长成单层的,Hep-2,细胞弃去原来的培养液，,PBS,洗,2,次。,在瓶中加入少许消化液,(,以液面盖住细胞为宜,),，静置,3,5,分钟。,6,肉眼观察当见到瓶底出现细针孔空隙时终止消化。倒置显微镜下,观察,消化细胞，若胞质回缩，细胞相互之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。这时应立即将消化液倒掉，加入适量新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。,以,1,：,2,或,1,：,3,进行分装，标记，置,37,培养。,7,四、结果,置于,37,培养的细胞，次日开始需逐日进行观察，主要观察：,（,1,）培养物是否被污染,（,2,）细胞生长状况,（,3,）如细胞已生长，则要观察细胞的形态特征,8,Hep-2,细胞,100,9,五、注意事项,严格的无菌操作,适度消化,每天观察细胞形态，生长致密时即可传代。,如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施。,10,谢 谢！,11,