分解纤维素

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,课题3 分解纤维素的微生物的分离,一、基础知识,1.,纤维素,纤维素是一种由,葡萄糖,首尾相连而成的,高分子,化合物，是含量最丰富的,多糖,类物质。,土壤中某些微生物能够产生,纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用,。,2.,纤维素酶,纤维素酶是一种,复合酶,，一般认为它,至少包括三种组分,，即,C,1,酶,(,外切酶,),、,C,X,酶,(,内切酶,),和葡萄糖苷酶,，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,纤维二糖,C,1,酶、,Cx,酶,葡萄糖苷酶,葡萄糖,纤维素,一、基础知识,在2支20mL的试管中，分别放入,16cm,的滤纸条，再分别加入pH为,4.8,、物质的量浓度为,0.1mol/L,的,醋酸-醋酸钠缓冲液,10mL、11mL,。在加入,10mL,缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（7080U/mL）。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。,1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25，其他反应条件，如pH等，均为最适的情况下，在1min内转化1mmol的底物所需的酶量。,底物：酶所作用和催化的化合物。,在,一支试管中添加,纤维素酶，,另,一支试管不添加,纤维素酶；,思考1,实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？,滤纸崩溃法,（,2,）纤维素分解菌的筛选,1,、筛选纤维素分解菌的方法,_,。该方法可以通过,_,反应直接筛选。,刚果红染色法,颜色,2,、其原理是：刚果红可以与纤维素形成,_,，当纤维素被,_,分解后，,红色复合物无法形成，出现以,_,为中心的,_,，可以通过,_,来筛选纤维素分解菌。,红色复合物,纤维素酶,纤维素分解菌,透明圈,是否产生透明圈,可根据是否产生,透明圈,来筛选纤维素分解菌,练一练：,1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是,A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种,B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖,C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁,D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是,A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物,B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物,C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物,D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌,(三)、实验设计,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到,鉴别培养基,挑选菌落,什么样的环境取样?,培养的目的?,选择培养基的特点?,挑选什么样的菌落?,鉴别培养基的特点?,如何鉴别?,根据,：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找；,目的：,增加纤维素分解菌的浓度，,以确保能够从样品中分离到所需要的微生物；,刚果红染色法,1,、纤维素分解菌选择培养基属于,_,（固体、液体）培养基，原因,是,_,【资料二】选择培养,阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题：,液体,没有添加琼脂,2,、该培养基对微生,物,_,（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是,_,具有,以,纤维素粉为唯一,碳源，能分解纤维素的微生物可以大量,繁殖；,若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将_改为_。,3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？,葡萄糖,纤维素粉,【资料三】刚果红染色法,方法一：,先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应,方法二：,在倒平板时就加入刚果红,培养基组成,提供的主要营养物质,CMC-Na 510g,碳源,酵母膏 1g,碳源、氮源、生长因子,KH,2,PO,4,0.25g,无机盐,土豆汁 100mL,碳源、生长因子,琼脂 15g,凝固剂,上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL,氢元素、氧元素,鉴别,纤维素分解菌的培养基,(水溶性羧甲基纤维素钠),染色法,优点,缺点,方法一,方法二,颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用,操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便，不存在菌落混杂问题,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,思考：这两种方法各有哪些优点与不足,挑选产生透明圈的菌落,挑取产生,明显的透明圈的菌落，,一般即为分解纤维素的菌落。,接种到,纤维素分解菌的,选择,培养基上，在30,0,C 37,0,C培养，可获得纯培养。,四、结果分析与评价,1.,培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落,对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。,如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。,分解,纤维素的微生物的分离,纤维素酶,种类、作用、催化,刚果红染色,筛选原理,实验设计,土壤取样,选择培养,涂布培养,纯化培养,前置染色法,后置染色法,富含纤维素土壤,增大分解菌含量,染色鉴别,分离出分解菌,课堂总结,