肠道致病菌的微生物学检查

实验五肠道致病菌的微生物学检查结核分枝杆菌的培养及形态观察,医学微生物学实验,实验内容：,1.肠道致病菌的微生物学检查,2.结核分枝杆菌的培养及形态观察,（抗酸染色）,1.,肠道致病菌的微生物学检查,（,1,）实验目的,Aaaaaaaaaaaaaaaa,示教：常见肠道细菌,（,2,）,常用培养基介绍,主要包括：麦康克培养基、,伊红美蓝培养基、中国蓝琼脂平板、,SS,琼脂平板、双糖铁培养基,示教：伊红美蓝培养基,双糖铁培养基,SS,平板分离肠道病原菌的强选择培养基,成分和作用,：,基础培养基,：提供氮源和碳源,胆盐、枸橼酸钠、煌绿,：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。,乳糖，中性红,（,pH6.8-8.0,，红橙黄） ：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色,病原菌,:,小,无色,非致病菌,:,大,红色,病原菌,:,透明,无色，小菌落,非致病菌,:,紫黑色,EMB,（,Eosin Methyl Blue),平板,分离肠道病原菌的弱选择培养基,克氏双糖培养基,接种方法,如何观察,上层含乳糖部分,乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色,H,2,S,然后观察下层,发酵葡萄糖（产酸产气）,动力,乳糖,硫酸亚铁,固体,葡萄糖,半固体,指示剂,:,酚红,（,3,）,肠道致病菌的分离鉴定,标本收集,分离培养,初步鉴定,血清学鉴定,生化反应,标本,选择鉴别培养基,SS,平板,生化反应,血清学鉴定,双糖管等,已知,Ab,检测未知,Ag,(,玻片凝集试验,),37,24h,？和球菌的不同,粪便标本肠道致病菌,分离鉴别流程,乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢,大肠杆菌,黄色,+ -,痢疾杆菌,红色,+ - -,伤寒杆菌,红色,+ + +/-,鉴别肠道致病菌的生化反应,糖发酵试验,甲基红试验,VP,实验,枸橼酸盐利用试验,硫化物（硫化氢）生成试验,吲哚生成试验,尿素水解试验,示教：生化反应举例,糖发酵试验,(fermentaton test),示教：单糖发酵管,甲基红试验,（,methyl red test,）,- +,- +,VP,（,Voges-Proskauer,）试验,+,+,-,Urease Test,尿素酶试验,：,H2S Production,硫化氢试验,- +,IMViC,试验,(,I,ndole Test,;,M,ethyl Red (MR) Test,;,V,oges-Proskauer (VP) Test,;,C,itrate Utilization Test),大肠埃希菌 ,产气杆菌 ,2.结核分枝杆菌的培养及形态观察,发病趋势和临床意义：,aaaaaaaaa,结核分枝杆菌,形态：,细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。,染色性：,不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。,培养特性：,专性需氧，最适,37,，,营养要求高，生长缓慢，18,h,分裂一代。,罗氏(,Lowenstein-Jensen),培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿，26周可见菌落生长，菜花、颗粒或结节状菌落，乳白色或黄色，不透明。在液体培养基，生长于表面，有皱褶。,结核分枝杆菌的培养方法,1痰标本培养前处理,（1）酸处理法：痰标本加入4硫酸稀释24倍，置室温下30min，期间振荡23次，使痰液化后即可接种。,（2）碱处理法：痰标本加入2氢氧化钠溶液稀释24倍，置37温箱内30min，期间振荡23次，痰液化后即可接种。,2接种培养法,取上述处理过的痰液0.1ml均匀接种于改良罗氏培养基斜面，37孵育34周后观察菌落特点。,菌落为乳白色或米黄色，表面粗糙呈颗粒状或菜花状,抗酸染色,结核杆菌对苯胺染料一般不易着色，但经加温或延长染色时间后能抵抗3盐酸乙醇的脱色作用。经此法染色后，结核杆菌及其他分枝杆菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色。,示教：结核分枝杆菌抗酸染色,实验步骤：,1用竹签挑取开放性肺结核病人晨痰标本中干酪样小粒或脓性部分，或,用取菌环,挑取经酸、碱处理后的痰标本，置载玻片中央，均匀涂布成1.52.0cm卵圆形痰膜，干燥，固定。,2滴加石炭酸复红液于涂片上，玻片置于酒精灯火焰缓缓加热，至有蒸汽冒出，约维持5min（,切勿沸腾或使染液干涸于玻片上,）。如有染液干涸趋势，应补加染液。然后自然,冷却,，用流水漂去多于染液。,3滴加3盐酸乙醇脱色，至涂片较厚处无颜色脱出为止，约30s，水洗。,4滴加碱性亚甲蓝液复染1min，水洗。,5滤纸吸干后镜检。,实验材料,痰液1管/小组，抗酸染色染液1套/小组，玻片1个/人,实验报告内容,抗酸染色法,实验原理、实验步骤、实验结果绘图和结果分析。,