食用菌栽培技术

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,食用菌栽培技术,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,食用菌菌种生产,食用菌栽培技术,滁州职业技术学院生化工程系,汤士勇,:,: 570424862,第二章 食用菌菌种生产,菌种生产类型及生产流程,菌种生产的基本设备,培养基的配制,消毒与灭菌,接种与培养,菌种的分离方法,菌种的保藏与复壮,液体菌种生产,本章主要内容,一、菌种的生产类型及生产流程,菌种：,是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝体的联合体。或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯,菌丝体,。,菌种的生产类型：,食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，在生产上通常把菌种分为一级菌种（,母种,）,、二级菌种（,原种,）,和三级菌种（,栽培种,）,。,一、菌种的生产类型及生产流程,菌种,一级菌种,二级菌种,三级菌种,从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。,由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。,由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。,一、菌种的生产类型及生产流程,母种,一、菌种的生产类型及生产流程,原种,一、菌种的生产类型及生产流程,栽培种,一、菌种的生产类型及生产流程,三级菌种之间的关系,菌种类型,制种容器,培养基,菌株来源,用途,要求,一级菌种（ 母种、试管种）,试管,PDA、PSA,种菇（孢子或菌肉组织）,扩制二级种,菌种保藏,纯度高，质量好，绝对无杂菌,二级菌种,（原种）,菌种瓶,固体培养基,一级菌种,扩制三级菌种,纯度高，质量好，无杂菌,三级菌种（栽培种）,罐头瓶、菌种袋,固体培养基,二级菌种,用于栽培,高纯度，高质量，无杂菌,一、菌种的生产类型及生产流程,菌种生产流程：,种菇,一级菌种,二级菌种,三级菌种,栽培,一、菌种的生产类型及生产流程,菌种生产工艺流程：,三,级种培养基制备,高压或,常压灭菌,接种,三级菌种,栽培,培养,斜面,一,级种培养基制备,高压灭菌,接种,培养,筛选,提纯,原始种,中试后确定一级种,保存,孢子或组织分离,一级种转管、扩大,菌种瓶,二,级种培养基制备,高压灭菌,接种,培养,二级菌种,罐头瓶,菌种袋,一、菌种的生产类型及生产流程,菌种制作的四个基本环节,配制培养基,灭菌,接种,培养,二、菌种生产的基本设备,菌种厂的布局,仓库,配料室,灭菌室,接种室,培养室,办公室,栽培棚,门口,晒料场,二、菌种生产的基本设备,接种设备,接种室,缓冲间：23m,2,接种间：56m,2,面积79m,2,高2.22.5m,要求,6个面平滑两门错开、平拉式顶装紫外灯,二、菌种生产的基本设备,接种设备,接种室,清洁,物品放缓冲间,消毒,移物至接种间,喷消毒液,10min 后接种,消毒液清洁,使用,二、菌种生产的基本设备,接种设备,接种室,二、菌种生产的基本设备,接种箱,观察窗,紫外灯,操作孔,二、菌种生产的基本设备,超净工作台（净化工作台）,二、菌种生产的基本设备,超净工作台（净化工作台）,双人,单人,二、菌种生产的基本设备,接种工具,要求：前端为导热性好的金属材料,枪,匙,钩,铲,镊,耙,针,环,接种,二、菌种生产的基本设备,培养设备,培养室：,培养大量菌种的恒温房,要求,光线暗；,密闭好、通风性强；,能升温、降温（空调机）；,有培养架,二、菌种生产的基本设备,培养室：,培养大量菌种的恒温房,二、菌种生产的基本设备,培养箱,培养少量菌种的恒温电器（2040）,二、菌种生产的基本设备,灭菌设备,手提式高压灭菌锅,高压锅,外锅：装水内锅：装物,锅盖,安全阀排气阀压力表,三、培养基的配制,培养基,概念：采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质，以供给食用菌生长繁殖的基质。,要求：含有该菌生长发育所需要的营养物质；水分、pH适宜；必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。,三、培养基的配制,培养基种类,类型,天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：,原料来源,状态,液体：营养液,固体,固体：天然固体原料固化：加,1.5%2%,琼脂,表面形状,斜面培养基,平板培养基,三、培养基的配制,培养基成分：,水分,碳源：单糖、双糖、多糖,氮源：有机氮（氨基酸、蛋白质、尿素）、铵态氮（硫酸铵）,无机盐：磷、钾、钙、镁、硫等。磷酸氢二钾对pH变化具有缓冲作用,生长素：B族维生素,凝固剂：琼脂,三、培养基的配制,粉状,条状,属天然植物多糖融点96以上凝点40 以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用,琼脂,三、培养基的配制,三、培养基的配制,母种培养基,PDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。,PDA 培养基,PSA 培养基,马铃薯（去皮）,200g,马铃薯（去皮）,200g,葡萄糖,20g,蔗糖,20g,琼脂,1820g,琼脂,1820g,水,1000ml,水,1000ml,三、培养基的配制,母种培养基配制过程,煮沸20min，取定量滤液,制马铃薯滤液,滤液沸时加入，融后加余料,融化琼脂,调节pH值,勿污管口，控制装量,分装试管,准备灭菌,包扎成捆,1%NaOH或HCl,三、培养基的配制,母种培养基配制过程,三、培养基的配制,原种、栽培种培养基,棉籽壳培养基,主料,棉籽壳87，麦麸10,辅料,白糖1，石灰1，过磷酸钙1,棉壳、麦麸干混余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量,配制,三、培养基的配制,原种、栽培种培养基,谷粒培养基,主料,麦粒、玉米粒等98.5%,辅料,石膏粉1%,碳酸钙0.5%,调pH与分装,pH：一般为8.0左右,原种培养基,装大口瓶,栽培种培养基,装菌种袋,外紧内松，上紧下松,颗粒洗净，1%石灰水泡胀文火煮沸1520min晾至无明水后拌入余料,配制,四、消毒与灭菌,基本概念,杀死一切微生物，包括芽孢。,灭菌,分为,杀菌：菌体尚存溶菌：菌体消失,消毒,：,只杀死病原菌，未伤及芽孢,防腐,：,暂时抑制微生物生长,除菌,：,用冲洗、过滤等法，除去微生物,四、消毒与灭菌,物理消毒灭菌法,热力灭菌,（一）原理,高温,使菌体蛋白质、核酸、酶等凝固或变性失活。,四、消毒与灭菌,物理消毒灭菌法,热力灭菌,（二）方法,湿热灭菌,干热灭菌,四、消毒与灭菌,干热灭菌,热源,火焰及热空气,特点,简便、快速、范围有限,方法,小的金属、玻璃器皿,酒精灯烧,烘箱烤,大的玻璃、金属器皿,四、消毒与灭菌,四、消毒与灭菌,器皿包装1601702h,干燥箱,使用,注意,70以下开箱取物勿超180随用随开包,四、消毒与灭菌,湿热灭菌,热源,热蒸气或热水,特点,范围广、温度低、效果好、时间短,方法,高压蒸汽灭菌,常压蒸汽灭菌,巴氏消毒,四、消毒与灭菌,蛋白质凝固点与其含水量的关系,蛋白质含水量(%),凝固温度(),50,25,18,6,0,56,74,80,80,90,145,160,170,热蒸气穿透力大,蛋白质凝固点随其含水量的增加而降低,四、消毒与灭菌,干热灭菌与湿热灭菌穿透力的比较,加热方式,传导介质,温度(),加热时间（h）,透过布层温度（）,结果,20层,40层,100层,干热,空气,130,140,4,86,72,70以下,灭菌不完全,湿热,饱和蒸汽,105.3,3,101,10l,10l,灭菌完全,四、消毒与灭菌,高压蒸气灭菌,概念,利用高压产生的高蒸汽温度杀灭微生物的方法,原理,水沸点随热蒸汽压力的增加而升高,密闭锅,蒸气多,压力高,沸点高,四、消毒与灭菌,步骤：,装锅加热排气升压保压灭菌降压出锅,关键：,排净冷空气,注意,灭菌时间和压力因物而异升降压力要稳灭菌时间从保压时算起压力降至“0”才能开盖,使用,四、消毒与灭菌,四、消毒与灭菌,排气,四、消毒与灭菌,纯蒸气压力与温度的关系,1kg/cm,2,=0.098Mpa(兆帕）=98Kpa（千帕）,四、消毒与灭菌,常压蒸气灭菌,概念,利用常压产生的100,蒸汽温度进行灭菌的方法,特点,设备简，成本低，灭温低，时间长,用法,一次性灭菌（100 ，10余h),尽快达到100 达到100 时开始计时灭菌中勿降温，勿干锅,四、消毒与灭菌,常压蒸气灭菌,四、消毒与灭菌,3.巴氏消毒,概念,利用低于100的温度杀灭有害微生物的方法,培养料堆积发酵,料温6070杀死有害微生物,方法,四、消毒与灭菌,物理消毒灭菌法,紫外线灭菌,概念,利用电子射过水银气体 产生的紫外线而杀菌的方法,杀菌机理,直接：使蛋白质、酶等变性失活间接：空气中产生臭氧或过氧化氢,使用,有效距离：1.52.0m,理想波长：265nm,30w,紫外灯,照30min避光30min,四、消毒与灭菌,物理消毒灭菌法,紫外线灭菌,便携式,四、消毒与灭菌,物理消毒灭菌法,紫外线灭菌,透力很弱定期更换灯管只起辅助作用伤眼睛和皮肤,特点,四、消毒与灭菌,化学消毒灭菌法,利用化学药剂杀灭或抑制微生物的方法,概念,抑菌剂,消毒剂,灭菌剂,浓度,液态：喷雾、浸泡、洗刷等气态：加热、焚烧、氧化等,状态,划分,四、消毒与灭菌,气雾消毒灭菌法,（一）要求,密闭条件下保持一定时间,（二）种类,甲醛,气雾盒,四、消毒与灭菌,气雾消毒灭菌法,机理：结合蛋白质氨基， 使其变性 。,喷：5%熏：10ml/m,3,+1/2KMnO,4,用法,甲醛,有刺激性和腐蚀性,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,固体或液体药品,水,药液（多现配现用）,概念,种类,氧化剂,熟石灰,表面活性剂,乙醇酚类新洁尔灭,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,（一）氧化剂,氧化菌体蛋白质的活性基团，使其变性。,机理,种类,高锰酸钾过氧化氢漂白粉过氧乙酸,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,高锰酸钾,紫色针状结晶 0.1%0.2%浸泡手、器具等。,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,过氧化氢,无色液体，属环保型消毒剂3%皮肤、伤口消毒 6浸泡器皿30min,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,漂白粉,2%5%浓度洗刷、喷雾、浸泡湿处可干撒 作用约30min,使用,注意,原品密封随配随用对衣物有退色和腐蚀性,四、消毒与灭菌,过氧乙酸无色至微黄色液体，有刺激性、腐蚀性、挥发性。,1.5%熏蒸7ml/m,3,0.2%,洗手,0.5%,浸泡,0.5%喷雾,使用,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,（二）表面活性剂,脱水剂脂溶剂蛋白质变性剂,乙醇,7075效果最好 皮肤、器皿擦拭或浸泡,浓度,高浓度效果差,无水的无杀菌作用,四、消毒与灭菌,3.新洁尔灭,0.25%消毒皮肤、浸泡器具0.5%喷雾,勿与肥皂混用,酚类,石炭酸：3%5%浸泡或喷雾,来苏尔,刺激性小效力比苯酚强4倍3%5%喷雾、擦洗2%消毒手,四、消毒与灭菌,液体消毒灭菌法,（三）重金属盐类,1、氯化汞（升汞）：常用浓度0.1%0.2%，主要用于食用菌菌种分离,2、硝酸银：0.1%1.0%,3、硫酸铜：常配制波尔多液,五、接种与培养,母种的接种与培养,接种（转管）：,过程,接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部,注意,种块勿太大,原老种块勿再接入,传代次数勿太多,五、接种与培养,培养：接种后的试管放入温箱内，于25左右的温度条件下培养。3d后检查菌丝生长情况及有无杂菌，培养715d母种菌丝即可长好。,五、接种与培养,原种的接种与培养,接种：,过程,用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上,五、接种与培养,培养：前3-5d内直立放置，当菌丝吃料后倒卧叠放，并适时转动，这样可以保证水分分布均匀，使菌丝生长一致。定期检查有无杂菌污染。原种应在3个月内使用。,五、接种与培养,栽培种的接种与培养,接种：,过程,用接种匙（镊、铲）取枣大原种,放于袋的两端或瓶中料面上,注意,表面老菌丝及老种块勿接入,五、接种与培养,培养：30-40d后栽培菌种即可长满菌丝，供栽培使用。,五、接种与培养,菌种质量鉴定,母种质量鉴定：,1、形态（外观）：,菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等,外观,好,差,丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等,五、接种与培养,退化母种,好母种,五、接种与培养,2、长势：将菌种接入合适的培养基，在适宜的温度条件下培养，若菌丝生长快而整齐，浓而健壮，则为优良品种。若菌丝生长过快或过慢，菌丝不整齐且凌乱，则为劣质品种。,五、接种与培养,3、出菇试验：,栽培,出菇快产量高品质好抗逆性强,五、接种与培养,2、温度适应性：,仍正常生长,适温培养7天 3035 锻炼4h 再适温培养,五、接种与培养,2、干湿性鉴定：,仍正常生长,湿：15g琼脂/1000ml培养基 适宜：16.5g琼脂/1000ml培养基,干：18g琼脂/1000ml培养基,五、接种与培养,原种与栽培种质量鉴定：,具有,菌丝白（符合该菌种的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快,菌种种类,品种名称,菌种级别,代 时,生产厂家,接种日期,合格菌种,用于生产,没有,无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象,五、接种与培养,原种与栽培种质量鉴定：,产生原基,五、接种与培养,原种与栽培种质量鉴定：,黄水,污染,六、菌种分离方法,孢子分离法：,孢子分离法,概念,特点,操作过程,利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法,属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种,分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌,孢子的采集孢子的分离孢子的萌发,六、菌种分离方法,孢子分离法：,孢子分离法,多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法,多孢分离,单孢分离,单个孢子萌发获得纯菌种的方法,整菇插种法钩悬法孢子印法,平板稀释法连续稀释法毛细血管法,六、菌种分离方法,组织分离法：,组织分离法,将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法,简单易行,保持原菌种性状,适用于大型肉质子实体,重复多易退化,种菇选择种菇消毒,切取组织块,移接组织块至斜面中央,培养,特点,概念,操作过程,（以伞菌为例）,六、菌种分离方法,基内菌丝分离法：,基内菌丝分离法,概念,特点,适用范围,从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法,易感染杂菌,子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种,子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难,混合菌丝培养类型，如银耳，多采用此法,七、菌种的保藏与复壮,菌种的保藏,使菌种不死亡不生长不污染，不降低或不丧失其优良性，以尽量延长使用时间。,保藏目的,保藏原理,创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。,七、菌种的保藏与复壮,菌种的保藏,七、菌种的保藏与复壮,菌种的保藏,特点,简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类,1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中（36个月）,七、菌种的保藏与复壮,七、菌种的保藏与复壮,1.液体石蜡保藏,无菌检验,？,注入种管,淹没斜面约1cm,矿油处理,灭菌：152kpa、30min去水：4050烘至无色透明,口堵胶塞,用时转管再转管,七、菌种的保藏与复壮,菌种的保藏,七、菌种的保藏与复壮,1.自然基质保藏,基质的处理,麦粒浸透、煮熟麸皮拌湿,装管,防衰老保藏时间长转接后生长旺易污染，灭菌要彻底,特点,灭菌,接种,培养,干燥器去水,七、菌种的保藏与复壮,菌种的复壮,概念,确保或恢复菌种优良性能的措施,（一）菌种的衰退,形态改变、生长慢、抗逆性差、产量及质量下降,表现,根源,内因,菌种的遗传物质发生了负变,外因,传代过多，条件不适宜,七、菌种的保藏与复壮,菌种的复壮,1.定期分离菌种,组织分离,母种,孢子分离,再生母种,栽培,子实体,七、菌种的保藏与复壮,菌种的复壮,2. 经常改变培养条件 3.转管时只取尖端菌丝,