糖类脂肪蛋白质的鉴定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验,：,生物组织中可溶性还原糖、,脂肪、蛋白质的鉴定,（,一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定,1.,实验原理,当质量浓度为,0.1,g/,mL,的氢氧化钠溶液与质量浓度为,0.05,g/,mL,的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的,Cu(OH),2,悬浊液。,Cu(OH),2,与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的,Cu,2,O,沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。,R,CHO,+2Cu(OH),2,R,COOH,+,Cu,2,O,+2H,2,O,2.,实验材料,做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。,因此要选用可溶性,还原糖含量高,、,白色或近于白色,的植物组织，其中以,苹果、梨,最好，也可用白萝卜替代。,3.,试剂配制,甲液（,0.1,g/,mL,的氢氧化钠溶液）,斐林试剂,乙液（,0.05,g/,mL,的硫酸铜溶液）,甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。,4.,实验步骤,（,1,）制备组织样液（教师制备）,（,2,）鉴定样液,先在,试管中加入,2,mL,组织样液,再,加入,2,mL,刚配制的斐林试剂,水浴煮沸,2,分钟,注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！,还原糖检测实验的实验结果,（,二）生物组织中脂肪的鉴定,1.,实验原理,苏丹,是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹,染色后，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗粒。,2.,实验材料,做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。,将花生种子经过,3-4,小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。,3.,试剂配制,苏丹,溶液：将,0.1,g,苏丹,干粉溶于,100,mL,体积分数为,95%,的酒精溶液中，待全部溶解后即成。,4.,实验步骤,（,1,）切片制作,去掉花生种皮,用,左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（,为什么？,）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。,刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（,注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。,）如此连续动作，切下一些薄片。,（,2,）染色,用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央滴苏丹,溶液,2-3,滴于花生子叶薄片上,2-1min,后，吸去染液,滴,50%,的酒精洗去浮色,吸去多余酒精再滴,1-2,滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片。,（,3,）镜检鉴定,在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（,最好只有,1-2,层细胞,），移至视野的中心换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内,橘黄色,的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。,若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来,。,脂肪检测实验的实验结果,若用物理方法如何鉴定脂肪的存在,?,烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪。,（,三）生物组织中蛋白质的鉴定,1,实验原理,在碱性溶液（,NaOH,）,中，双缩脲（,H,2,NOC-NH-CONH,2,）,能与,Cu,2+,作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。,3.,试剂配制,A,液（,0.1,g/,mL,的氢氧化钠溶液）,双缩脲试剂,B,液（,0.01,g/,mL,的硫酸铜溶液）,2.,实验材料,做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆,(,可用豆浆替代）或鸡蛋清。,4.,实验步骤：,（,1,）制备生物组织样液（教师制备）,（,2,）鉴定,先加,2,mL,组织样液,再加,2,mL,双缩脲试剂,A,液,加,3-4,滴双缩脲试剂,B,液,蛋白质检测实验的实验结果,注意：在鉴定蛋白质时要分别滴加两种试剂，并且硫酸铜只能加,3,4,滴，不能过量如过量，,CuSO,4,在碱性溶液中生成大量蓝色,Cu,（,OH,）,2,沉淀，遮盖了紫色。,鉴定蛋清组织中存在蛋白质时，要充分稀释。,如稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后，会粘固在试管内壁上，使反应不易彻底，并且试管中也不易冲洗干净。,5.,如稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后，会粘固在试管内壁上，使反应不易彻底，并且试管中也不易冲洗干净。,6.,若用物理方法如何鉴定脂肪的存在,?,烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪,