实验五、GUS染色检测基因瞬时表达课件

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2012-10-20,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,#,单击此处编辑母版标题样式,实验五,GUS,染色检测基因瞬时表达,王欢欢,二零一二,.,九,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,报告基因,gus,基因（,-,葡萄糖苷酸酶基因）是目前转基因植物中应用最为广泛的报告,基因,。,-,葡萄糖苷酸酶,是一个水解酶，以,-,葡萄糖苷酸,酯类物质为底物，其反应产物可以用多种方法检测出来。,绝大多数植物没有葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此,gus,作为报告基因广泛应用在植物基因工程中。,标记基因为,gus,的常用商业载体：,pBI121,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,组织化学法检测,以,5-,溴,-4-,氯,-3-,吲哚,-,葡萄糖苷酸（,X-Gluc,）作为反应底物，将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞,被转入了,g,us,基因，并表达出,Gus,，,适宜的条件下，该酶就可将,X-Gluc,水解生成蓝色产物。这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料，它使具,Gus,活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出,Gus,活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。,gus,基因,转拟南芥的,GUS,检测结果,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,Gus,染色,将,拟南芥的幼苗或成年植株的组织浸泡于染色缓冲液中，置于真空罐,中,0.5Mbar,抽真空,10 min,，使染液充分渗入到组织的内部，然后置于,37,浸泡,过夜。移去染液，用,0.1 mol/L,的磷酸缓冲液,(pH7.0),冲洗,2-3,次。再用,70%,的乙醇脱色，更换乙醇,2-3,次，记录并拍照,。,侵染后的烟草叶片和注射烟草叶片也用同样的方法处理,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,瞬时表达与稳定表达,W38,侵染叶片,NB,侵染叶片,NB,侵染下胚轴,NB,注射叶片,拟南芥,1,拟南芥,2,拟南芥,3,拟南芥,4,拟南芥,5,瞬时表达,稳定,表达,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,实验报告,实验目的,实验原理（简略写）,实验方法,实验结果及分析（最重要）,思考题（最后一次课给）,切勿相互抄袭，支持原创，如有雷同后果自负！,实验五、GUS染色检测基因瞬时表达,