实验DNA的粗提取课件(苏教版)课件

金太阳新课标资源网,*,实验DNA的粗提取课件(苏教版),*,实验,DNA,的粗提取,实验DNA的粗提取课件(苏教版),1,实验原理,(1)DNA,提取的原理：,DNA,在,NaCl,溶液中的溶解度，随着,NaCl,浓度的变化而改变。,DNA,在物质的量浓度为,0.14mol/L,的,NaCl,溶液中溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在,NaCl,溶液中的,DNA,析出。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),【,实验链接,】,鸡血细胞中的,DNA,主要位于鸡血细胞核中，通常先向鸡血细胞液中加入蒸馏水，并搅拌，使细胞膜和核膜涨破，将,DNA,释放出来，然后用较高浓度的,NaCl,溶液溶解，再加入蒸馏水降低,NaCl,溶液的浓度，使,DNA,析出。,(2)DNA,纯化的原理：,DNA,不溶于酒精，而细胞中某些物质可溶于酒精，从而可提取出含杂质较少的,DNA,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(2)DNA,纯化的原理：,DNA,不溶于酒精，而细胞中某些物质可溶于酒精，从而可提取出含杂质较少的,DNA,。,【,实验链接,】,实验中选用预冷的,95%,的酒精效果更好，除上述提取方法以外，还可以用苯酚，使蛋白质变性，抑制核酸酶的活性，通过离心分层后，,DNA,溶于上层水中，蛋白质变性存在于苯酚层中，使二者分开。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),2,用品分析,(1),材料：鸡血,实验中用鸡血作为实验材料有三个原因：一是鸡血中血细胞含量高，,DNA,含量丰富；二是材料易得；三是鸡血细胞极易吸水涨破。,(2),器具,本实验过程中最好使用塑料烧杯和试管。因为玻璃表面带电荷，,DNA,中的磷酸基也带电荷，因而易被吸附于玻璃表面，故实验中用塑料烧杯和试管可减少,DNA,的损失。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(3),试剂,在,DNA,鉴定中所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),3,实验步骤,实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),4,归纳提升,(1),加入抗凝剂的目的,制备鸡血细胞液时要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，防止血液凝固。,(2),实验中几次重复操作的目的,实验中有两次使用蒸馏水,a,第一次在第,2,步，目的是使血细胞吸水涨破；,b,第二次在第,4,步，目的是为了稀释,NaCl,溶液，析出,DNA,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验中有三次过滤,过滤时使用纱布层数与取其滤液或丝状物有关。第,1,、,3,次要其滤液，使用纱布为,1,2,层，第,2,次是要滤出丝状物，使用纱布为多层。目的都是为了获取较多的实验材料。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验中有三次加,NaCl,溶液,a,在步骤,3,中加入,NaCl,溶液，必须充分搅拌，加速染色质中的,DNA,与蛋白质分离，使,DNA,充分游离并溶解在,NaCl,溶液中。,b,在步骤,6,中加入,NaCl,溶液的目的也是为了,DNA,的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。,c,在步骤,9,中，加入,NaCl,溶液的浓度比前两次低得多，但还是为了溶解,DNA,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验中有,6,次搅拌,除第一次搅拌外，后面,5,次搅拌均要朝向一个方向，并且在析出,DNA,、,DNA,再溶解和提取中，搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插入烧杯底部，防止,DNA,分子断裂。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),【,例题展示,】,关于,“,DNA,的粗提取,”,实验，部分步骤如图所示。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(1),实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中含有较高含量的,_,。,(2),如图,A,所示实验步骤中加蒸馏水的目的是,_,；通过图,B,所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入,2 mol/L NaCl,溶液的目的是,_,；图,C,所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是,_,。,(3),为鉴定实验所得丝状物的主要成分是,DNA,，可滴加,_,溶液，,_,加热后，丝状物被染成,_,色。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),【,解析,】,实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，是因为,DNA,存在于细胞中，而在血浆中含有较多的蛋白质等物质，不利于,DNA,的提取。在,DNA,的提取过程中，两次加入蒸馏水，其作用不同。第一次加水是为了使血细胞吸水涨破，第二次加水是为了稀释,NaCl,溶液，因为将蛋白质和,DNA,分离后，在较高浓度的,NaCl,溶,实验DNA的粗提取课件(苏教版),液中，染色质或染色体中的蛋白质容易解聚，这样,DNA,就游离出来，向含有,DNA,的浓度较高的,NaCl,溶液中加入大量蒸馏水，稀释,NaCl,溶液，,DNA,的溶解度会下降，当,NaCl,溶液浓度为,0.14 mol/L,时溶解度最低，从而析出,DNA,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),【,答案,】,(1)DNA,(2),使血细胞吸水涨破溶解,DNA,使,NaCl,的物质的量的浓度降到,0.14 mol/L,，从而使,DNA,析出,(3),二苯胺沸水浴蓝,实验DNA的粗提取课件(苏教版),【,实验演练,】,1,(2011,年高考江苏卷,),在利用鸡血进行,“,DNA,的粗提取与鉴定,”,的实验中，相关叙述正确的是,(,),A,用蒸馏水将,NaCl,溶液浓度调至,0.14 mol/L,，滤去析出物,B,调节,NaCl,溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质,C,将丝状物溶解在,2 mol/L NaCl,溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色,D,用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同,实验DNA的粗提取课件(苏教版),解析：,选,B,。用蒸馏水将,NaCl,溶液浓度调至,0.14 mol/L,，过滤后获取析出物，,A,项错误；实验时可用不同浓度的,NaCl,溶液去除杂质,(DNA,在不同浓度的,NaCl,溶液中溶解度不同,),，或用木瓜蛋白酶溶解蛋白质，从而去除部分杂质，,B,项正确；,DNA,加入二苯胺试剂需水浴加热后才能出现蓝色变化，,C,项错误；用菜花替代鸡血作为材料，需研磨后提取滤液备用，其实验操作步骤与鸡血有些不同，,D,项错误。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),2,做,“,DNA,的粗提取,”,实验时，选用鸡血而不用猪血的原因是,(,),A,鸡血的价格比猪血的价格低,B,猪的成熟红细胞没有细胞核，不易提取到,DNA,C,鸡血不凝固，猪血会凝固,D,用鸡血比用猪血提取操作简便,实验DNA的粗提取课件(苏教版),解析：,选,B,。,DNA,主要存在于细胞核中，而哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，因此用猪血做实验不能提取到,DNA,。实验中一般用鸡血，这是因为鸡属于鸟类，血液中的红细胞数量多，并且红细胞中有细胞核，可以提取到较多的,DNA,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),3,在,DNA,的粗提取实验过程中，有两次,DNA,沉淀析出，其依据的原理是,(,),DNA,在物质的量浓度为,0.14 mol/L,的,NaCl,溶液中溶解度最低,DNA,在冷却的体积分数为,95%,的酒精中有沉淀析出,A,两次都是,B,两次都是,C,第一次是,，第二次是,D,第一次是,，第二次是,实验DNA的粗提取课件(苏教版),解析：,选,C,。第一次析出,DNA,是利用,DNA,在,0.14 mol/L,的,NaCl,溶液中溶解度最低，第二次是为了获得较纯净的,DNA,，利用的是,DNA,在冷却的体积分数为,95%,的酒精中能沉淀析出。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),解析：,选,C,。鸡血细胞中的,DNA,主要存在细胞核中，加入蒸馏水，血细胞及其细胞核可渗透吸水最终涨破，释放出,DNA,；柠檬酸钠是较好的血液抗凝剂；向滤液中加,2 mol/L,的,NaCl,溶液目的是使,DNA,溶解；用玻璃棒轻轻搅拌，可防止析出的,DNA,细丝断裂。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),实验DNA的粗提取课件(苏教版),解析：,选,C,。加蒸馏水后降低,NaCl,的溶液浓度，同时逐渐降低,DNA,的溶解度，使其逐渐变为丝状黏稠物而析出。当,NaCl,溶液浓度降低时，蛋白质的溶解度增高，即蛋白质的盐溶现象，因而,DNA,析出时，蛋白质不能析出。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),6,以下是以花椰菜为实验材料进行的,DNA,的粗提取与鉴定实验。,(1),原理：,在制备,DNA,时要加入,DNA,酶的抑制剂柠檬酸钠以除去,Mg,2,，防止,DNA,酶的激活。,DNA,在,NaCl,溶液中的溶解情况如图。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),用苯酚处理可使蛋白质变性且留在苯酚层内，在,DNA,溶液中加入,2.5,倍体积浓度为,95%,的酒精可将,DNA,分离出来，此时,DNA,十分黏稠，可用玻璃棒搅成团取出。,DNA,在强酸环境下，水解产生脱氧核糖等小分子物质，它与二苯胺反应生成蓝色化合物。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(2),材料与器具：柠檬酸钠、石英砂、,0.015 mol/L,的,NaCl,溶液、,0.14mol/L,的,NaCl,溶液、,2 mol/L,的,NaCl,溶液、蒸馏水、苯酚、,95%,酒精、二苯胺、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(3),实验步骤：研磨得匀浆,过滤得滤液,滤液稀释,6,倍,离心处理得沉淀物,沉淀物再溶解,加苯酚静置后去上清液,提取出,DNADNA,鉴定。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),根据以上材料回答下列问题：,(1),研磨时，取,10 g,花椰菜，加适量的石英砂和,_,、,_,。,(2),将滤液稀释,6,倍，其目的是,_,。,(3),取沉淀物，置于,2 mL 2 mol/L NaCl,溶液中，使,DNA,溶解，再加,2 mL,的苯酚充分振荡后静置，待其分层后弃其上层苯酚。该步骤的目的是除去,_,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(4),如何将剩余溶液中的,DNA,提取出来？,_,。,(5),如何证明提取物确实是,DNA,？,_,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),解析：,本题考查了,DNA,的粗提取与鉴定方法及过程。在解答本题时，需要掌握,DNA,的提取原理，即,DNA,在不同浓度的,NaCl,溶液中溶解度不同，并熟知其过程。,(1),在研磨时加入少许石英砂是为了增大摩擦力，加快研磨的速度。加入,2 mol/L NaCl,溶液是为了保护,DNA,，而加入柠檬酸钠溶液是为了保护,DNA,不受破坏。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(2),在,0.14 mol/L NaCl,溶液中，,DNA,核蛋白的溶解度最低，所以我们要把,2 mol/L NaCl,溶液稀释。,(3),前一步提取的是,DNA,核蛋白，而我们要的是,DNA,，因此需要对,DNA,核蛋白进一步提纯。用苯酚处理，可使蛋白质变性，且留在苯酚层内，用这样的方法可以除去蛋白质。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),(4),根据题中所给信息，在,DNA,溶液中加入,2.5,倍体积浓度为,95%,的酒精，此时,DNA,黏稠，可用玻璃棒搅成团取出。,(5)DNA,与二苯胺在沸水浴条件下反应，能生成蓝色化合物。用此种方法可以鉴定所提取的物质是否为,DNA,。,实验DNA的粗提取课件(苏教版),答案：,(1)2 mol/L NaCl,溶液柠檬酸钠,(2),使,DNA,的溶解度逐渐降低,(3),蛋白质,(4),向下层,DNA,溶液中加,2.5,倍体积浓度为,95%,的酒精，用玻璃棒搅动，在玻璃棒上的成团物即是,DNA,(5),将提取物溶解于物质的量浓度为,0.015 mol/L,的,NaCl,溶液中，再滴加二苯胺数滴，沸水浴加热几分钟，再冷却。如有蓝色物质出现，即可证明提取物是,DNA,实验DNA的粗提取课件(苏教版),