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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,动物细胞工程,单克隆抗体,等,动物细胞工程常用的技术,动物细胞培养,动物细胞核移植,动物细胞融合,是其他动物细胞工程技术的基础。,植物组织培养,植物体细胞杂交,回顾：,植物细胞工程常用的技术手段有哪些？,动物细胞工程,(,一,).,动物细胞培养,(,三,).,动物细胞融合,(,四,).,单克隆抗体,(,二,).,细胞核、胚胎移植,动物,胚胎,或,幼龄,动物的组织、器官,胰蛋白酶,剪碎,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬液,培养瓶中培养,部分细胞“癌变”，无限传代,动物细胞培养不能,最终培养成动物体,50,代细胞,原代培养,传代培养,细胞贴壁,剥离、分瓶,细胞株,细胞,细胞系,动物细胞培养过程：,增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养,去掉组织间,蛋白,动物细胞培养过程中几个重要的概念,（,1,）细胞贴壁：,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（,单层,）。要求：,培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。,（,2,）接触抑制：,当贴壁细胞分裂生长到,表面相互接触时,，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,动物细胞培养特点,：,贴壁生长、接触抑制：,原代培养,(primary culture),定义：,指将要培养的动物细胞取出后，先用,胰蛋白酶,等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的,细胞悬液,，再将该悬液放入,培养瓶中,培养。,过程：从动物机体中取出组织,剪碎, 加胰蛋白酶 细胞游离 制成细胞悬液 将细胞,接种到培养瓶内,培养（,1-2,天换一次培养液）,细胞贴壁生长,长成单层细胞,定义：,当原代培养的,细胞生长停止,，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用,胰蛋白酶,等,，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将,细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养,传代培养,(subculture),细胞株：,从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到,40-50,代，其,遗传物质没有发生变化。,细胞系：,传到,40-50,代后有,部分细胞遗传物质发生了变化,，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。,细胞株和细胞系的区别：,细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。,细胞悬浮液,培养瓶中培养,50代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,细胞株,细胞系,知识点小结：各个新名词之间的联系,多数组织细胞固定在表面生长和分裂。,随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖,遗传物质改变,1,、无菌、无毒的环境,（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）,2,、营养,（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等,）,3,、温度和,PH,温度,36.5,+,0.5,度，,pH7.2,7.4,4,、气体环境,O,2,和,CO,2,（,95%,空气和,5%,CO,2,）,动物细胞培养条件,保证细胞顺利的生长增殖,离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力,能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？,动物细胞培养技术的应用,（1）生产蛋白生物制品：,病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体,等。,（,4,）用于,检测有毒物质,（,3,）获得大量自身的,皮肤细胞,，用于植皮。,（,5,）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,（,2,）作为基因工程的受体细胞,获得细胞,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,或细胞分泌蛋白,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,促生长因子,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,6,、植物细胞和动物细胞培养的比较,卵细胞,C,母绵羊子宫,母绵羊,母绵羊,乳腺细胞,细胞质,细胞核,细胞核移植,胚胎移植,早期胚胎,多莉羊,分娩,卵裂,融合后的卵细胞,细胞拆合技术,妊娠,多莉羊的培育过程,细胞核移植,材料,1: 1970,年，有两位科学家做了一个人,鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人,鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？,人,-,鼠,(,想像图,),灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂交细胞,（细胞膜具有一定的流动性）,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用 途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振,荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,细胞融合的原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,2,、诱导动物细胞融合的方法,3,、动物细胞融合的用途,制备单克隆抗体,：仙台病毒,紫外线,丧失感染活性（不感染细胞）,保留融合活性（诱导细胞融合）,物理法,化学法,生物法,思考,：,（,1,）请概括单克隆抗体的概念,（,2,）,根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，思考实验过程与原理？,（,3,）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与,B,淋巴细胞融合？单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两次筛选？,单克隆抗体,提出问题：,长期以来，人们为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。,1.,概括单克隆抗体的概念,单：单个细胞,克隆,:,无性繁殖,抗体,:,化学性质单一、特异性强,单克隆抗体的制备,实验目的,:,制备单克隆抗体,.,实验原理：,实验材料：小白鼠,实验器材：培养皿、针筒等等。,实验过程：？,2.,根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，回答下列问题：,B,淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。,单克隆抗体的制备,抗原,小鼠,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,细胞融合，筛选,细胞培养,筛选，继续培养,体外培养,体内培养,单克隆抗体,3,、,单克隆抗体的应用,（,1,）作为诊断试剂,最广泛应用,准确、高效、简易、快速,（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（,2,）运载药物,生物导弹,=,单克隆抗体,+,药物，,治疗肿瘤）,(“,生物导弹”,单抗导向，药物为弹头,),有梦想，才会有创造！,已成功的动物细胞融合实例有很多，如人,小鼠、人,兔、人,鸡、鼠,兔、鸡,鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌,鸡 、人,胡萝卜 等细胞的融合。,想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。,生物种间杂交,想像图,总结：,植物组织培养是植物细胞工程技术的基础。,动物细胞培养 是各种动物细胞工程技术的基础。,为达到特定的目的，许多细胞工程技术往往需要同时运用。,
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