微生物实验室生物安全规范

,1,CONFIDENTIAL,Confidential Internal Use Only,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,3,Confidential Internal Use Only,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,8,Confidential Internal Use Only,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,47,Confidential Internal Use Only,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,10,Confidential Internal Use Only,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,研发部分析组微生物室,2013.,5,.,30,微生物实验室,生物安全,规范,生物安全是全世界关注的话题,实验室生物安全,操作者,操作对象,环境,实验室主要生物危害,微生物气溶胶吸入,刺伤、割伤,皮肤、黏膜污染,食入,感染的实验动物咬伤,还有许多不明原因的实验室相关感染,Pike等对3 921例实验室相关感染统计分析结果发现，已知原因的实验室感染只占全部感染的18，不明原因的实验室感染却高达82。,对不明原因的实验室感染的研究表明，大多数可能是病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散，实验室内工作人员吸入了污染的空气感染发病的。,实验室主要生物危害,实验室微生物气溶胶,气溶胶,（,aerosols,）：,悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001m100m的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。,微生物气溶胶对实验室工作人员具有严重的危害性，其程度取决于,微生物本身的毒力,、,气溶胶的浓度,、,气溶胶粒子大小,、以及当时实验室内的,微小气候条件,。,研究发现，粒径100,m的飞沫沉降很快，而粒径50,m的飞沫在0.4s内就扩散开了；粒径5,m的飞沫核能够被呼吸道的粘膜捕获。,产生微生物气溶胶的其它因素,另外，一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室的空调或通风系统，污染了空调的冷却水，则可以形成更广泛的微生物气溶胶污染。,除了实验室操作可以产生微生物气溶胶外，患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物也可以产生微生物气溶胶。,微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的空气。,实验室感染的传播链,容器中的病原体,泄漏,规程/设备,规程/设备,传播,个人防护装备,感染途径/感染剂量,易感宿主,潜伏期,预防接种,医学监测,实验室的生物安全规范,实验室的运行规范,仪器设备的使用规范,针对感染性材料的操作规范,个人防护用品的使用规范,应意识到，实验室生物安全涉及的绝不仅是实验室工作人员的个人健康，一旦发生事故，极有可能会给人群、动物或植物带来不可预计的危害。,实验室生物安全事件或事故的发生是难以完全避免的。重要的是实验室工作人员应事先了解所从事活动的风险及应在风险已控制在可接受的状态下从事相关的活动。实验室工作人员应认识但不应过分依赖于实验室设施设备的安全保障作用，绝大多数生物安全事故的根本原因是缺乏生物安全意识和疏于管理。,生物安全意识至关重要,目录,微生物实验室的设施和设备要求,1,微生物实验室的生物安全手册,2,3,生物安全实验室良好工作行为指南,4,实验室生物危险物质溢洒处理指南,1.微生物实验室的设施和设备要求,生物安全防护水平（BSL）,BSL,2,实验室,BSL1 实验室,1.1,生物安全防护水平（BSL）,根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平分为一级、二级、三级和四级，一级防护水平最低，四级防护水平最高。,以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4（bio-safety level，BSL）表示仅从事体外操作的实验室的相应生物安全防护水平。,依据国家相关规定：生物安全防护水平为一级的实验室适用于操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物,。代表病原体：麻疹病毒、腮腺炎病毒、枯草芽孢杆菌,1.2,BSL1 实验室,实验室的门应有可视窗并可锁闭，门锁及门的开启方向应不妨碍室内人员逃生。,应设洗手池，宜设置在靠近实验室的出口处。,在实验室门口处应设存衣或挂衣装置，可将个人服装与实验室工作服分开放置。,实验室的墙壁、天花板和地面应易清洁、不渗水、耐化学品和消毒灭菌剂的腐蚀。地面应平整、防滑，不应铺设地毯。,实验室台柜和座椅等应稳固，边角应圆滑。,实验室台柜等和其摆放应便于清洁，实验台面应防水、耐腐蚀、耐热和坚固。,1.2,BSL1 实验室,实验室应有足够的空间和台柜等摆放实验室设备和物品。,应根据工作性质和流程合理摆放实验室设备、台柜、物品等，避免相互干扰、交叉污染，并应不妨碍逃生和急救。,实验室可以利用自然通风。如果采用机械通风，应避免交叉污染。,如果有可开启的窗户，应安装可防蚊虫的纱窗。,实验室内应避免不必要的反光和强光。,若操作刺激或腐蚀性物质，应在30m 内设洗眼装置，必要时应设紧急喷淋装置。,1.2,BSL1 实验室,若操作有毒、刺激性、放射性挥发物质，应在风险评估的基础上，配备适当的负压排风柜。,若使用高毒性、放射性等物质，应配备相应的安全设施、设备和个体防护装备，应符合国家、地方的相关规定和要求。,若使用高压气体和可燃气体，应有安全措施，应符合国家、地方的相关规定和要求。,应设应急照明装置。,应有足够的电力供应。,应有足够的固定电源插座，避免多台设备使用共同的电源插座。应有可靠的接地系统，应在关键节点安装漏电保护装置或监测报警装置。,1.2,BSL1 实验室,供,水和排水管道系统应不渗漏，下水应有防回流设计。,应配备适用的应急器材，如消防器材、意外事故处理器材、急救器材等。,应配备适用的通讯设备。,必要时，应配备适当的消毒灭菌设备。,BSL1 实验室,对高压灭菌器、离心机安全罩没有要求；,生物安全柜要求型生物安全柜,1.2,BSL1 实验室,生物安全防护水平为二级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物,。,代表病原体：流感病毒,、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌,1.3,BSL2实验室,使,用时，应符合,BSL1 实验室,的要求。,实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门应可自动关闭；实验室主入口的门应有进入控制措施。,实验室工作区域外应有存放备用物品的条件。,应在实验室工作区配备洗眼装置。,应根据实验室的实验活动内容，确定是否需要安装洗眼器。如果需要洗眼器，则应安装在BSL2实验室内靠近出口的地方。,应在实验室或其所在的建筑内配备高压蒸汽灭菌器或其他适当的消毒灭菌设备，所配备的消毒灭菌设备应以风险评估为依据。,高压灭菌器应选择立式或台式不排气（产生的蒸汽被回收）的，放置在BSL2实验室内，或门外。,1.3,BSL2实验室,应在操作病原微生物样本的实验间内配备生物安全柜。,应按产品的设计要求安装和使用生物安全柜。如果生物安全柜的排风在室内循环，室内应具备通风换气的条件；如果使用需要管道排风的生物安全柜，应通过独立于建筑物其他公共通风系统的管道排出。,各实验室根据实际情况选用合适的级A1型或B1型生物安全柜。生物安全柜应安装在BSL2实验室内气流流动小，人员走动少，离门和中央空调送风口较远的地方。生物安全柜的周围应有一定的空间，与墙壁至少保持30cm的距离，便于清洁环境卫生。,应有可靠的电力供应。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应配置备用电源。,1.3,BSL2实验室,生物安全防护水平为三级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物,。,代表病原体：炭疽芽孢杆菌、鼠疫杆菌、结核分枝杆菌、狂犬病毒,生物安全防护水平为四级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。,代表病原体：埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒,1.4,BSL,3,实验室,和,BSL,4,实验室,2 微生物实验室的生物安全手册,微生物实验室生物安全手册,风险评估,实验室设计,实验室管理,实验室生物安全通用要求GB 19489-2004,生物安全手册WHO第三版，2004,一、,总则,二、实验室生物安全管理体系,三、生物因子生物危害评估,四、实验室人员准入制度,五、人员培训考核制度,六、人员健康监护制度,七、生物安全检查制度,八、实验室人员生物安全行为规范及内务管理制度,九、实验室菌种安全保管制度,十、生物安全实验室资料档案管理制度,十一、实验室废弃物管理制度,十二、实验室消毒隔离制度,十三、实验室生物危险标识使用规定,十四、事件、伤害、事故和职业性疾病报告制度,十五、实验室应急处置预案,2 微生物实验室的生物安全手册,十六、生物安全标准操作规程,（一）生物洁净安全柜标准操作规程,（二）恒温培养箱操作规程,（三）生化培养箱操作规程,（四）,超净,工作台操作规程,（五）立式压力蒸汽灭菌器操作规程,（六）离心机操作规程,（七）微生物实验室操作人员洗手、消毒操作规程,十七、其他必要的管理性和技术性文件,（一）设施/设备监测，检测和维护制度,（二）防火安全制度,（三）实验室用电安全制度,（四）微生物实验室安全保卫制度,2 微生物实验室的生物安全手册,3,生物安全实验室良好工作行为指南,生物安全实验室良好工作行为指南,生物安全实验室标准的良好工作行为,生物安全实验室特殊的良好工作行为,生物安全实验室的清洁,3.1,生物安全实验室标准的良好工作行为,建立并执行准入制度。所有进入人员要知道实验室的潜在危险，符合实验室的进入规定。,确保实验室人员在工作地点可随时得到生物安全手册。,建立良好的内务规程。对个人日常清洁和消毒进行要求，如洗手、淋浴（适用时）等。,规范个人行为。在实验室工作区不要饮食、抽烟、处理隐形眼镜、使用化妆品、存放食品等；工作前，掌握生物安全实验室标准的良好操作规程。,正确使用适当的个体防护装备，如手套、护目镜、防护服、口罩、帽子、鞋等。个体防护装备在工作中发生污染时，要更换后才能继续工作。,戴手套工作。每当污染、破损或戴一定时间后，更换手套；每当操作危险性材料的工作结束时，除去手套并洗手；离开实验间前，除去手套并洗手。严格遵守洗手的规程。不要清洗或重复使用一次性手套。,如果有可能发生微生物或其他有害物质溅出，要佩戴防护眼镜。,存在空气传播的风险时需要进行呼吸防护，用于呼吸防护的口罩在使用前要进行适配性试验。,工作时穿防护服。在处理生物危险材料时，穿着适用的指定防护服。离开实验室前按程序脱下防护服。用完的防护服要消毒灭菌后再洗涤。工作用鞋要防水、防滑、耐扎、舒适，可有效保护脚部。,安全使用移液管，要使用机械移液装置。,3.1,生物安全实验室标准的良好工作行为,配备降低锐器损伤风险的装置和建立操作规程。在使用锐器时要注意：,a)不要试图弯曲、截断、破坏针头等锐器，不要试图从一次性注射器上取下针头或套上针头护套。必要时，使用专用的工具操作；,b)使用过的锐器要置于专用的耐扎容器中，不要超过规定的盛放容量；,c)重复利用的锐器要置于专用的耐扎容器中，采用适当的方式消毒灭菌和清洁处理；,d) 不要试图直接用手处理打破的玻璃器具等，尽量避免使用易碎的器具。,3.1,生物安全实验室标准的良好工作行为,按规程小心操作，避免发生溢洒或产生气溶胶，如不正确的离心操作、移液操作等。,在生物安全柜或相当的安全隔离装置中进行所有可能产生感染性气溶胶或飞溅物的操作。,工作结束或发生危险材料溢洒后，要及时使用适当的消毒灭菌剂对工作表面和被污染处进行处理（参见附录B）。,定期清洁实验室设备。必要时使用消毒灭菌剂清洁实验室设备。,不要在实验室内存放或养与工作无关的动植物。,所有生物危险废物在处置前要可靠消毒灭菌。需要运出实验室进行消毒灭菌的材料，要置于专用的防漏容器中运送，运出实验室前要对容器进行表面消毒灭菌处理。,3.1,生物安全实验室标准的良好工作行为,从实验室内运走的危险材料，要按照国家和地方或主管部门的有关要求进行包装。,在实验室入口处设置生物危险标识。,采取有效的防昆虫和啮齿类动物的措施，如防虫纱网、挡鼠板等。,对实验室人员进行上岗培训并评估与确认其能力。需要时，实验室人员要接受再培训，如长期未工作、操作规程或有关政策发生变化等。,制定有关职业禁忌症、易感人群和监督个人健康状态的政策。必要时，为实验室人员提供免疫计划、医学咨询或指导。,3.1,生物安全实验室标准的良好工作行为,3.2,生物安全实验室特殊的良好工作行为,经过有控制措施的安全门才能进入实验室，记录所有人员进出实验室的日期和时间并保留记录。,定期采集和保存实验室人员的血清样本。,只要可行，为实验室人员提供免疫计划、医学咨询或指导,正式上岗前实验室人员需要熟练掌握标准的和特殊的良好工作行为及微生物操作技术和操作规程。,正确使用专用的个体防护装备，工作前先做培训、个体适配性测试和检查，如对面具、呼气防护装置、正压服等的适配性测试和检查。,不要穿个人衣物和佩戴饰物进入实验室防护区，离开实验室前淋浴。用过的实验防护服按污染物处理，先消毒灭菌再洗涤。,III级生物安全柜的手套和正压服的手套有破损的风险，为了防止意外感染事件，需要另戴手套。,定期消毒灭菌实验室设备。仪器设备在修理、维护或从实验室内移出以前，要进行消毒灭菌处理。消毒人员要接受专业的消毒灭菌培训，使用专用个体防护装备和消毒灭菌设备。,如果发生可能引起人员暴露感染性物质的事件，要立即报告和进行风险评估，并按照实验室安全管理体系的规定采取适当的措施，包括医学评估、监护和治疗。,在实验室内消毒灭菌所有的生物危险废物。,如果需要从实验室内运出具有活性的生物危险材料，要按照国家和地方或主管部门的有关要求进行包装，并对包装进行可靠的消毒灭菌，如采用浸泡、熏蒸等方式消毒灭菌,3.2,生物安全实验室特殊的良好工作行为,包装好的具有活性的生物危险物除非采用经确认有效的方法灭活后，不要在没有防护的条件下打开包装。如果发现包装有破损，立即报告，由专业人员处理。,定期检查防护设施、防护设备、个体防护装备，特别是带生命支持系统的正压服。,建立实验室人员就医或请假的报告和记录制度，评估是否与实验室工作相关。,建立对怀疑或确认发生实验室获得性感染的人员进行隔离和医学处理的方案并保证必要的条件（如隔离室等）。,3.2,生物安全实验室特殊的良好工作行为,只将必需的仪器装备运入实验室内。所有运入实验室的仪器装备，在修理、维护或从实验室内移出以前要彻底消毒灭菌，比如生物安全柜的内外表面以及所有被污染的风道、风扇及过滤器等均要采用经确认有效的方式进行消毒灭菌，并监测和评价消毒灭菌效果。,利用双扉高压锅、传递窗、渡槽等传递物品。,制定应急程序，包括可能的紧急事件和急救计划，并对所有相关人员培训和进行演习。,3.2,生物安全实验室特殊的良好工作行为,3.3,生物安全实验室的清洁,由受过培训的专业人员按照专门的规程清洁实验室。外雇的保洁人员可以在实验室消毒灭菌后负责清洁地面和窗户（高级别生物安全实验室不适用）。,保持工作表面的整洁。每天工作完后都要对工作表面进行清洁并消毒灭菌。宜使用可移动或悬挂式的台下柜，以便于对工作台下方进行清洁和消毒灭菌。,定期清洁墙面，如果墙面有可见污物时，及时进行清洁和消毒灭菌。不宜无目的或强力清洗，避免破坏墙面。,定期清洁易积尘的部位，不常用的物品最好存放在抽屉或箱柜内。,清洁地面的时间视工作安排而定，不在日常工作时间做常规清洁工作。清洗地板最常用的工具是浸有清洁剂的湿拖把；家用型吸尘器不适用于生物安全实验室使用；不要使用扫帚等扫地。,可以用普通废物袋收集塑料或纸制品等非危险性废物。,用专用的耐扎容器收集带针头的注射器、碎玻璃、刀片等锐利性废弃物。,用专用的耐高压蒸汽消毒灭菌的塑料袋收集任何具有生物危险性或有潜在生物危险性的废物。,根据废弃物的特点选用可靠的消毒灭菌方式，比如是否包含基因改造生物、是否混有放射性等其他危险物、是否易形成胶状物堵塞灭菌器的排水孔等， 要监测和评价消毒灭菌效果。,3.3,生物安全实验室的清洁,4 实验室生物危险物质溢洒处理指南,评估与报告,生物安全柜内,溢洒的处理,离心机内溢洒,的处理,溢洒区域的处理,溢洒处理工具包,撤离房间,.,实验室,生物危险物质,溢洒处理,指南,4.1,溢洒处理工具包,基础的溢洒处理工具包通常包括：,a)对感染性物质有效的消毒灭菌液，消毒灭菌液需要按使用要求定期配制；,b)消毒灭菌液盛放容器；,c)镊子或钳子、一次性刷子、可高压的扫帚和簸箕，或其他处理锐器的装置；,d)足够的布巾、纸巾或其他适宜的吸收材料；,e)用于盛放感染性溢洒物以及清理物品的专用收集袋或容器；,f)橡胶手套；,g)面部防护装备，如面罩、护目镜、一次性口罩等；,h)溢洒处理警示标识，如,“,禁止进入,”,、,“,生物危险,”,等；,i)其他专用的工具。,明确标示出溢洒处理工具包的存放地点。,4.2,撤离房间,发生生物危险物质溢洒时，立即通知房间内的无关人员迅速离开，在撤离房间的过程中注意防护气溶胶。关门并张贴,“,禁止进入,”,、,“,溢洒处理,”,的警告标识，至少30 min后方可进入现场处理溢洒物。,撤离人员按照离开实验室的程序脱去个体防护装备，用适当的消毒灭菌剂和水清洗所暴露皮肤。,如果同时发生了针刺或扎伤，可以用消毒灭菌剂和水清洗受伤区域，挤压伤处周围以促使血往伤口外流；如果发生了黏膜暴露，至少用水冲洗暴露区域15 min。立即向主管人员报告。,立即通知实验室主管人员。必要时，由实验室主管人员安排专人清除溢洒物。,4.3,溢洒区域的处理,准备清理工具和物品，在穿着适当的个体防护装备（如：鞋、防护服、口罩、双层手套、护目镜、呼吸保护装置等）后进入实验室。需要两人共同处理溢洒物，必要时，还需配备一名现场指导人员。,判断污染程度，用消毒灭菌剂浸湿的纸巾（或其他吸收材料）覆盖溢洒物，小心从外围向中心倾倒适当量的消毒灭菌剂，使其与溢洒物混合并作用一定的时间。应注意按消毒灭菌剂的说明确定使用浓度和作用时间。,到作用时间后，小心将吸收了溢洒物的纸巾（或其他吸收材料）连同溢洒物收集到专用的收集袋或容器中，并反复用新的纸巾（或其他吸收材料）将剩余物质吸净。破碎的玻璃或其他锐器要用镊子或钳子处理。用清洁剂或消毒灭菌剂清洁被污染的表面。所处理的溢洒物以及处理工具（包括收集锐器的镊子等）全部置于专用的收集袋或容器中并封好。,用消毒灭菌剂擦拭可能被污染的区域。,按程序脱去个体防护装备，将暴露部位向内折，置于专用的收集袋或容器中并封好。,按程序洗手。,按程序处理清除溢洒物过程中形成的所有废物。,4.3,溢洒区域的处理,4.4,生物安全柜内溢洒的处理,处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接面对前操作口，而应处于前视面板的后方。选择消毒灭菌剂时需要考虑其对生物安全柜的腐蚀性。,如果溢洒的量不足1 ml时，可直接用消毒灭菌剂浸湿的纸巾（或其他材料）擦拭。,如果溢洒物流入生物安全柜内部，需要评估后采取适用的措施。,如溢洒量大或容器破碎，建议按如下操作：,a)使生物安全柜保持开启状态；,b)在溢洒物上覆盖浸有消毒灭菌剂的吸收材料，作用一定时间以发挥消毒灭菌作用。必要时，用消毒灭菌剂浸泡工作表面以及排水沟和接液槽；,c)在安全柜内对所戴手套消毒灭菌后，脱下手套。如果防护服已被污染，脱掉所污染的防护服后，用适当的消毒灭菌剂清洗暴露部位；,d)穿好适当的个体防护装备，如双层手套、防护服、护目镜和呼吸保护装置等；,e)小心将吸收了溢洒物的纸巾（或其他吸收材料）连同溢洒物收集到专用的收集袋或容器中，并反复用新的纸巾（或其他吸收材料）将剩余物质吸净；破碎的玻璃或其他锐器要用镊子或钳子处理；,f)用消毒灭菌剂擦拭或喷洒安全柜内壁、工作表面以及前视窗的内侧；作用一定时间后，用洁净水擦干净消毒灭菌剂；,g)如果需要浸泡接液槽，在清理接液槽前要先报告主管人员；可能需要用其他方式消毒灭菌后再进行清理。,4.4,生物安全柜内溢洒的处理,4.5,离心机内溢洒的处理,在离心感染性物质时，要使用密封管以及密封的转子或安全桶。每次使用前，检查并确认所有密封圈都在位并状态良好。,离心结束后，至少再等候5min打开离心机盖。,如果打开盖子后发现离心机已经被污染，立即小心关上。如果离心期间发生离心管破碎，立即关机，不要打开盖子。切断离心机的电源，至少30min后开始清理工作。,穿着适当的个体防护装备，准备好清理工具。必要时，清理人员需要佩戴呼吸保护装置。,消毒灭菌后小心将转子转移到生物安全柜内，浸泡在适当的非腐蚀性消毒灭菌液内，建议浸泡60min以上。,小心将离心管转移到专用的收集容器中。一定要用镊子夹取破碎物，可以用镊子夹着棉花收集细小的破碎物。,通过用适当的消毒灭菌剂擦拭和喷雾的方式消毒灭菌离心转子仓室和其他可能被污染的部位，空气晾干。,如果溢洒物流入离心机的内部，需要评估后采取适用的措施。,4.5,离心机内溢洒的处理,4.6,评估与报告,对溢洒处理过程和效果进行评估，必要时对实验室进行彻底的消毒灭菌处理和对暴露人员进行医学评估。,按程序记录相关过程和报告。,谢 谢！,