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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,紫外,可见分光光度法,目 录,紫外可见光谱学原理和应用,仪 器,样品处理及测定,方 法,二极管分光光度计的特性,1.,基本原理,电磁波谱：无线电波、红外线、宇宙射线、,x,射线、紫外线、可见光,波长范围：,200-800nm,波长和频率：,E=h =c / ,越短，,E,越高,短波长的紫外光能量高，这种成份导致了皮肤晒黑。,紫外,可见光谱的,来源,：,辐射作用于物质，发生反射、散射、吸收、荧光、磷光、光化学反应。通常测量紫外,可见光谱时我们希望只发生吸收。,分子内电子跃迁,导致谱带变宽,，产生吸收光谱,适用含量范围,: 10,-5,%,50%,2.,定性分析,：,鉴定谱图和结构,同一性的认证,颜 色,其他定性信息,蛋白质的熔点测定,酶活性,3.,定量分析,：,朗伯,比尔定律：,A = ,b,c (,为摩尔吸光系数,),多组分的分析,叠加性原理,：一种混合物在任何波长下的吸光率 等与混合物中各组分在该波长下的,A,之和。,浓溶液的不适用性,化学偏离与仪器偏离,几乎所有金属元素的定量分析,0.01 mol/L,时,粒子相互影响,电荷分别改变,. ,也改变,.,浓电解质中有类似效应,.,化学,:,缔合,离解,溶剂化,PH,变化等,仪器,:,单色光不纯,.,峰值处测量可改善,该方法能分析复杂的混合物和图谱相似的简单混合物。,用最小二乘法计算的偏差表明了标准光谱和样品光谱的拟合程度，同时也说明了分析结果的准确性。,简单联立方程式,最小二乘法,偏最小二乘法（,PLS,）,关键组分的回归法（,PCR,）,多重最小二乘法（,MLS,）,多组分分析方法,4.,间接测量：,化学衍生法,分光广度滴定,酶动力学分析,1.,仪器设计,分光光度计的组成,产生一定光谱宽度的电磁辐射光源,色散装置：从光源发射宽的电磁波中选择特定的波长,样品区域,检测器,:,测量辐射强度,传统的分光光度计适用于测量光谱中单点吸光度,二极管阵列分光光度计比较：样品和色散元件的相对位置次序相反，称为反向光路,按构型分,单光束设计,：提供高的光通量，灵敏度高；但光源漂移产生较大误差,双光束设计,：矫正漂移。斩光器以一定速度旋转，使空白和样品的交替测量每秒进行数次。缺点，降低了光的能量和灵敏度,分光束设计,：分裂器将光分成两束，同时穿过参比和空白，到达两个分开但一样的检测器，可同时测定样品和空白,双波长设计,：同时测定两个波长，如样品中两个同时发生的反应,2.,主要仪器参数（可能影响吸光度测量值,准确度及精确度,的一些仪器参数）,光谱分辨率,波长准确度及精确度,线性动态范围,漂移,SBW/NBW0.1,影响测光准确度和精确度的因素：杂散光和噪声,杂散光：检测到选定波长带宽以外的任何波长,光。,T =( I + I,s,) / ( I,0,+ I,s,),噪声,光子噪声：在测量低浓度低吸光率样品时，影响精确测量两束高强度的光之间的微小差别。,电子噪声：是固有的，与测定的光强度无关。在高吸光度样品的信号很小时影响大,液体样品,固体样品,弱吸收,强吸收,干扰,光化学问题,动力学光谱法,固相光谱法,多元校正,多组分测定,导数光谱法,Beer,定律：,A=,abc,一阶导数：,如果控制,I,0,不变，则,而,结论：,A,信号也正比于,c,，,在原拐点处灵敏度最大,高阶导数光谱同样适用,导数光谱的特点,：,随着导数阶数的增加，峰越来越尖锐，灵敏度提高,信噪比随导数的,阶数增加而降低,原谱,一阶导数,二阶导数,二极管阵列分光光度计的特点,二极管阵列光谱学的优点,二极管阵列光谱学的缺点,快速采集，多波长同时测定，灵敏度高，有统计学意义，很高的稳定性和可靠性，敞开式的样品室,分辨率较低，散射光严重，样品会分解,参考文献：,Tony,owen,著,现代紫外,可见光谱学基础，,1997,，,12-5965-5123E,张剑荣，戚苓,方惠群编，仪器分析试验，科学出版社，,1999,曾永昌，向立人，周在德编，仪器分析，四川大学出版社，,1992G.W.,尤因著，华东化工学院分析化学教研组译，化学分析的仪器方法，,1986,罗国安，邱家学，王义明编，可见紫外定量分析及微机应用，上海科学技术文献出版社，,1988,谢谢大家,
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