中药制剂分析总论

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五章 中药制剂分析总论,1,第一节 中药制剂定性分析,目的： 检定制剂的真实性。,中药定性分析的方法,显微鉴别法,理化鉴别法,一般化学反应法,升华法,荧光法,光谱法,色谱法,2,一、中成药的显微鉴别,（,一）制片方法,1散剂、胶囊剂 取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片。,2片剂 用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品,透化装片。,3水丸、锭剂 研成粉末后取少量直接透化装片。,4蜜丸 取蜜丸切碎，加水搅拌，洗涤后，置离心管中离心分离沉,淀。如此反复处理以除去蜂蜜后透化装片。,若观察细胞内含物形状，应选用不同试剂制片。,淀粉粒 水或甘油醋酸试液；,糊粉粒 甘油；,水溶性内含物 乙醇或水合氯醛试液,(,不加热,),。,3,固定标本片制片方法,取中成药粉末置离心管中，加乙醇浸过上面，玻棒搅拌510分钟后离心使粉末沉积，倾去稀醇液，再加无水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次1020分钟；最后加入纯二甲苯，略加搅拌，取处理后的样品微量置载玻片上，滴加中性树胶，加盖玻片封藏，贴标签。,4,（二）观察要点,中成药粉末镜检时，首先要了解处方中的药味组成，明确其,来源的药用植物的部位，才能根据该部位的显微特征来进行检出。,1.根类,木栓组织碎片，表面观多为多角形细胞， 排列紧密。,导管 直径、节的长短、末梢壁的穿孔及增厚壁的纹理类型。,草酸钙结晶晶形、,分泌组织、,淀粉粒的形状、,脐点,层纹,2.,根茎类,与根类药材粉末特征相似。而淀粉粒有时较大，有鳞叶组织，退化的 鳞叶表皮细胞大多狭长，细胞壁平直或波状弯曲。,5,3.茎类,（1）茎类,表皮细胞及垂周壁的形状，气孔的类型，毛茸的类型及形态；,导管的类型、直径、长短。,管胞的形态；,纤维的形状、直径、长短、有无晶纤维等。,草酸钙结晶多为方晶及簇晶，单子叶植物偶见针晶。,薄壁组织碎片、石细胞。,（2）皮类,纤维的直径、长短及形状，是否成束存在，,细胞壁厚薄、木化与否，能否看到胞腔及壁孔等。,石细胞的形状、细胞壁增厚情况。,草酸钙结晶多为方晶及簇晶，砂晶及针晶较少。,皮类药材粉末不应含有木质部组织，如导管、管胞等。,（3）木类 可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。细胞壁,通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。,6,4.,花类,（1）苞片及花萼 构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸。,（2）花冠,上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，,下表皮细胞常不呈乳头状，,细胞壁微波状弯曲。,维管束组织细小。,（3）雄蕊,花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、,环纹状及点状等；,花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。,通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。,（4）雌蕊 柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状。,7,5.,叶类,（1）表皮 上下表皮细胞的形状、大小，角质层的形态，,垂周壁的形状、厚度或增厚情况以及有无气孔、毛茸等。,（2）气孔,气孔的形状、大小、型式，保卫细胞的形状及内含物，,副卫细胞的数目、大小、形状。,（3）毛茸 注意毛茸的种类。,非腺毛：,注意细胞的数目、形状、长短、大小、细胞壁的,厚薄及表面形态等。多为单列性多细胞毛，少为单细胞毛。,形状一般呈长圆锥形或线形；细胞壁一般较薄，外壁表面大,都光滑。,腺毛：,注意头部的形状、大小、细胞的数目、排列情况以,及柄部的长短、细胞数目及行列数目等。,8,6.果实类,（1）果皮细胞的形状、大小。,（2）外果皮上可能有非腺毛及腺毛，注意长短、形状。,（3）中果皮内的分泌组织 油细胞，油室、油管、石细胞等,（4）内果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则,应注意其排列形式。,9,7.,种子类,（1）种皮,表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；,石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。,栅状细胞及油细胞。,（2）外胚乳 细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物。,（3）内胚乳 细胞形状、厚度、内含物。,（4）胚的子叶 有无分泌组织及细胞的内含物。,10,（,三）应用实例,六味地黄丸的显微定性鉴别,显微鉴别 取本品置显微镜下观察，,(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。,(熟地黄),(2)果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多,角形，垂周壁略连珠状增厚。(山茱,萸),(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直,径2440um，脐点短缝状或人字状。,(山药) 3a草酸钙针晶束3b淀粉粒,(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中,，有时数个排列成行。(牡丹皮),(5)不规则分枝状团块无色，遇水合,氯醛溶化；菌丝无色，直径4-6um。,(茯苓),(6)薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，,集成纹孔群。(泽泻),11,二、中药制剂的一般理化鉴别法,（,一）一般化学反应法,中药制剂一般选择有效成分、特征成分作为鉴别的对象。,一般化学反应鉴别法多在试管中用湿法反应进行，制剂样品要先制成适宜的供试液。一般情形下用50-70乙醇回流提取制备供试液。,一般化学反应法用于中药制剂鉴别应该注意以下几点：,(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。,(2)在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质借此改善鉴别方法的专属性。,(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。,12,实例1 牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应,取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应：,(1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。,（黄芩中有大量黄酮）,(2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。,（大黄中含有羟基蒽醌）,实例2 牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴别反应,(1)取本品约0.1 g，研细，加氯仿5ml，浸泡1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，再滴加硫酸，初显蓝紫色，渐变为蓝绿色。（蟾蜍）,(2)取本品约0.2g，研细，加水湿润后，加氯酸钾的硝酸饱和溶液2ml，振摇，放冷，离心，取上清液，加氯化钡试液0.5ml，摇匀，溶液呈白色浑浊，离心，弃去上层酸液，再加水2ml，振摇，沉淀不溶解。（雄黄）,(3)取本品适量，研细，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失。（朱砂）,13,（,二,）显微化学鉴别法,1.,取药材的切片、粉末或中成药粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片 在显微镜下观察产生的结晶或沉淀，以及特殊的颜色等，作为鉴别的特征。,例：,黄连粉末滴加稀盐酸，放置5分钟，可见小檗碱盐酸盐黄色结晶析出。,穿心莲用水湿润，切成横切片，滴加乙醇后加Kedde试液，叶肉组织显紫红色(穿心莲内酯成分的不饱和内酯环反应)。,丁香切片滴加30氢氧化钠饱和溶液，略放置，可见油室内有针状丁香酚钠结晶析出。,肉桂粉末加氯仿23滴，略浸渍，速加2盐酸苯肼1滴，可见黄色针状或杆状结晶(肉桂酸反应)。,14,2.,取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。,例如：,槟榔粉末0.5g，加水34ml及稀盐酸1滴，微热数分钟，过滤，取滤液1滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1滴，即发生混浊，放置后可见石榴红球形或方形结晶(槟榔碱)。,曼陀罗叶少许，加氯仿提取，提取液蒸干，加发烟硝酸1滴，显黄色，加氢氧化钾1粒，显紫堇色(莨菪烷类成分Vitali反应)。,15,3.,取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。,例如：,钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡(碳酸盐分解,产生CO,2,)。,番木鳖胚乳薄片，加1钒酸铵-硫酸试液1滴，胚乳速显紫色,(番木鳖碱)，另取切片加发烟硝酸1滴，即显橙红色(马钱子,碱 )。,大黄粉末少许，置白磁板上，加氢氧化钠液l滴，显深红色(,蒽醌钠盐)。,16,（,三）升华法,操作方法：取金属片安放在有圆孔(直径约2cm)的石棉板上，在金属片上放一小金属圈(内径约1.5cm，高约0.8cm)，对准石棉板上的圆孔，圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层，圈上覆盖载玻片，在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去火待冷，载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。,实例 牛黄解毒丸微量升华鉴别,取本品进行微量升华，先得白色升华物后（冰片），继得黄色升华物（大黄中蒽醌）。将升华物分别置显微镜下观察：白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的1香草醛硫酸溶液，渐显紫红色，黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。,17,（,四）荧光法,有些中药材中含有能产生荧光的化学成分，在可见光、紫外光照射下能发出荧光，或经试剂处理后发出荧光。含有这类药材的中药制剂可用荧光法进行鉴别。通常的操作方法是取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下(365nm)观察，有时则是加一定的试剂后再进行观察。,实例l 元胡止痛片的荧光鉴别,取本品适量，去糖衣，研细，取粉末1g，加0.25molL硫酸液10ml振摇片刻，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上，阴干后置紫外光灯(365nm)下观察，显亮黄色荧光。,18,1.,可见紫外分光光度法,不同的药材所含的成分不同，在一定条件下吸收光谱的特征,可用于鉴别药材。利用这一特点，可见-紫外分光光度法也,可用于中药制剂的鉴别。,2.红外光谱法,（,五）光谱法,19,（,六）色谱法,中药制剂可用色谱法鉴定，包括薄层色谱法、纸色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。,1.薄层色谱法,使用本法鉴定中药制剂，通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物 采用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对照物所得的色谱图进行对比，作出鉴定。,（1）样品应作适当的预处理 对样品进行初步的分离精制。,常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。,（2）展开剂的选择 选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果鉴别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。,如无现有展开剂，可先以无水乙醇-苯（14）展开，如主要物质的Rf在0.8以上，改用苯-氯仿（13），如主要物质的Rf在0.3以下，改用丙酮-甲醇（11）。,20,（,3）对照品的选择 中国药典(一部)作薄层鉴别用的对照物有对照品和对照药材两种。,TLC用作中药制剂鉴别的另一类对照物是阴阳对照溶液。,（4）薄层色谱的扫描定性鉴别 TLC展开后，斑点的检识方法，有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或用碘蒸气、稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强。另一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试液，茚三酮试液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。,还可用薄层扫描仪将薄层板上的斑点转换绘制成峰形色谱图，这种色谱图以斑点展开后移动的距离为横坐标，斑点对光辐射的吸收强度或发射荧光的强度为纵坐标的峰形曲线图谱。,21,应用实例,1.大黄及含大黄的成药,(1)供试液制备 取各样品适量，加甲醇20ml浸渍1h，过滤，取滤液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加HCl 1ml，水浴加热30min，立即冷却，乙醚提取两次，20ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成1ml。,(2)对照液制备 取大黄对照药材0.1g按供试液制备作为对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大,黄酚对照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。,(3)薄层板 硅胶H加0.3CMC-Na溶液的自制板；厚度：300um,(4)点样 分别点样4uL。,(5)展开剂 石油醚(3060)-甲酸乙酯-甲酸(1551)放置后的上层溶液。,22,(6)展开方式 上行展开；展距：7cm。,(7)显色 置紫外光灯(365nm)下检视。,(8)色谱识别 紫外光灯(365nm)下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点,(9)备注 在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分。,23,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17,样品： 1芦荟大黄素； 2大黄酸； 3大黄素； 4大黄素甲醚； 5大黄酚；,6大黄(掌叶大黄)对照药材； 7大黄(唐古特大黄)对照药材； 8大黄流浸膏；,9小儿化毒散； 10槟榔四消丸； 11木香槟榔丸； 12枳实导滞丸；,13牛黄上清丸； 14清宁丸； 15一捻金； 16牛黄解毒片；,17牛黄解毒丸,24,2.,黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药,(1)供试液制备 取各品种药粉适量，加甲醇5ml，置水浴回流15min，过滤滤液浓缩至1ml。,(2)对照液制备 取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非,洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每0.5mg/ml的溶液，作为 对照品溶液。,(3)薄层板 硅胶G自制板；厚度：500um,(4)点样 分别点样1-2ul,(5)展开剂 苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液,(631.51.50.5)另槽中加入与展开剂等体积浓氨试液,25,(6)展开方式 展开箱预平衡15分钟；上行展开；展距：8cm,(7)显色 置紫外光灯(365nm)下检视。,(8)色谱识别 中国药典黄连项下收载有味连，雅连，云连三,种，总体分析黄连可见45个主要的黄色荧光斑点，自下,而上，分别为l.非洲防己碱+药根碱(量少)；2.巴马汀；3.,小檗碱；4.表小檗碱(云连不含，雅连含量低)；5.黄连碱(,味连含量高)。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区,别。,26,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18,样品： 1.黄连(味连)；2.黄连；3.黄连(雅连)；4.黄连(云连)；5.黄连(野连)；,6.黄连(日本黄连)；7.小儿化毒散；8.万应锭；9.大补阴丸；10.木香槟榔丸；,11.香连丸；12.黄柏；13.非洲防己碱；14.药根碱；15.巴马汀；16.小檗碱；,17.表小檗碱；18.黄连碱。,27,2.纸色谱法,3.气相色谱法,气相色谱法的分离效能高，检测器种类多而且灵敏度高，,是混合物鉴别的有效方法。该法目前主要是用于含挥发,油和挥发性成分的制剂分析。,4.高效液相色谱法,主要是利用化合物在特定的色谱柱上，在一定条件下的,保留值，将某一样品与其对照品在同一条件下，进行保,留时间的直接比较作为鉴别依据。对于复杂未知成分，,也可以加入对照品，观察被测峰是否增高，以初步作定,性结论。对于复杂组分尚可采用联机技术，如本法与质,谱联用，先分离后再作定性鉴别。,28,第二节 中药制剂杂质检查,中制药制剂检查包括的主要内容：,制剂通则检查,一般杂质检查,特殊杂质检查,微生物限度检查,29,一、杂质的来源：,中药制剂中存在的杂质，来源于三个方面：,由中药材原料中带入；,在生产制备过程中引入；,贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂,的理化性质改变而产生。,30,一般杂质：,指在自然界中分布较广泛，在多种药材的采集、收购、加工以及制剂的生产或贮存过程中容易引入的杂质。,特殊杂质：,指在该制剂的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。,杂质的分类：,31,二、杂质的限量检查,杂质限量：,药物中所含杂质的最大允许量，通常用百分之几或百万分之几来表示。,限量检查：,规定一定限度，要求所检样品中某组分含量不超过此限度。,32,三、杂质限量计算方法,33,例：重金属限量计算：,取供试品1.0g与标准铅溶液2.0ml制成的对照液比较，计算重金属限量。,34,第三节 一般杂质检查方法,一、重金属检查法：,（一）基本原理,1、在弱酸性条件下：,CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S,Pb2+ +H2SPbS+2H+,2、在碱性条件下：,Pb2+S2-PbS,35,（二）检查方法,中国药典2005版规定重金属检查方法有四种。,第一法,适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查,取两支纳氏比色管,甲管,乙管,标准铅溶液+醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml+水或各药品项下规定的溶剂稀释成25ml,供试品溶液25ml,硫代乙酰胺试液各2ml 摇匀 放置2min 同置白纸上,自上向下透视,乙管中显出的颜色不得比甲管更深,36,第二法,适于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显色的重金属限检查。,取炽灼残渣项,下遗留的残渣,移置纳氏,比色管中,蒸干至氧化,氮蒸汽除尽,加硝酸,0.5ml,放冷,加水15ml,置水浴上蒸干,滴加氨试液至对,酚酞指示液显中性,加醋酸盐缓冲液,（pH3.5）2ml,加盐酸2ml,微热溶解,加水稀释,成25ml,另取配制供试,品溶液的试剂,置瓷皿中蒸干,加醋酸盐缓冲液,（pH3.5）2ml,加水15ml,移置纳氏,比色管中,微热溶解,加标准铅,溶液一定量,用水稀释,成25ml,以上两管溶液，,照上述第一法检查,37,第三法,适用于检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的药品中的重金属检查。,置纳氏比色管中硫化钠试液5滴，摇匀,甲管,乙管,标准铅溶液适量氢氧化钠试液5ml水20ml硫化钠试液5滴，摇匀,供试品适量氢氧化钠试液5ml水20ml溶解,乙管中显出的颜色不得比甲管更深,38,第四法,适用于有色溶液或重金属限量低的品种。,用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物深沉富集成色斑后与一定量标准铅溶液获得的色斑进行比较检查,39,二、砷盐检查法,砷盐检查法系指用于药品中微量砷（以As计算）限量检查的方法。,（一）古蔡法,1. 基本原理：,AsO,3,3,+3Zn+9H,+,AsH,3,+3Zn,2+,+3H,2,O,40,产生的砷化氢与溴化汞试纸作用:,AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黄色),AsH3+3 HgBr23HBr 3+As(HgBr)3 (棕色),五价,砷在酸性溶液中也能被金属锌,还原,为砷化氢，但生成砷化氢,比三价砷慢,。,41,2. 检查方法：,A为100ml标准磨口锥形瓶,B为中空的标准磨口塞,C为导气管,全长约180mm,D为具孔的有机玻璃旋塞,E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖,古蔡法装置,顶端平面上放一片溴化汞试纸,盖上旋塞E并旋紧,样品溶液,中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为6080mm）,42,(2)标准砷斑的制备,精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水2ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。,43,(3)检查法,取按各药品项下规定方法制成的供试品溶液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。,44,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）,1. 基本原理：,二乙基二硫代氨基甲酸银 二乙基二硫代氨基甲酸,（简称Ag-DDC） （简称HDDC）,45,2. 检查方法：,（1）仪器装置,A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，C上连导气管;D为平底玻璃管,测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60-80mm）；并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。,（2）标准砷对照液的制备 精密量取标准砷溶液5ml,（3）检查法 将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。,46,3. 注意事项：,（1）有机碱液的选择 该法需要加入一定量的有机碱以中和反应中的二乙基二硫代氨基甲酸。,（2）反应的温度和时间 本法在2540水浴中反应45分钟为宜。在此温度下，有部分氯仿挥发损失，故在比色前应添加氯仿至5.00ml，摇匀后再进行比色测定。,47,三、干燥失重测定法,1、药品的干燥失重：,系指药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，主要是指水分、结晶水，但也包括其他挥发性的物质如乙醇等。,2、水分分为,必要的水分：即结晶水或组成水分；,不必要的水分:即附着水分或吸留的水分。,48,3、检查方法,方法,适用范围,检查方法,常压恒温干燥法,适用于受热较稳定的中药制剂的测定,将供试品置于烘箱中，在规定温度下进行干燥，干燥温度一般为105，干燥时间一般在达到指定温度2干燥24小时，再称至恒重为止。,干燥剂干燥法,硅胶干燥法,P,2,O,5,干燥法,硫酸干燥法,适用于受热易分解或挥发性供试品检查,将供试品置于干燥器内，利用干燥器内贮放的干燥剂，吸收供试品中的水分，干燥至恒重,减压干燥法,适用于熔点低，受热不稳定及较难赶除水分的供试品检查,将供试品置于减压干燥器中进行干燥，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。,常用干燥失重测定法,49,4、注意事项,（1）供试品的颗粒大小 一般将颗粒控制在2mm以,下，若供试品为较大结晶，为了避免在研磨过程,中水分等损失，应先迅速捣碎成2mm以下的小粒。,（2）供试品用量 除另有规定外，一般取供试品约1g。,（3）铺设的厚度 应将供试品平铺在扁形称量瓶中，,厚度不可超过5mm，如为疏松物质，厚度不可超,过10 mm。,（4）瓶盖的放置 将称量瓶放入烘箱或干燥器中,时，应将瓶盖取下，置称量瓶旁或将瓶盖半开进,行干燥。取出时须将瓶盖盖好。在每次干燥后应,先置干燥器内放冷至室温，然后称定重量。,50,（5）如供试品未达到规定的干燥温度即融化,时，应先将供试品置较低的温度下干燥,至大部分水分除去后，再按规定条件干,燥。,（6）减压时需注意压力变化，如真空度较高,时，干燥器易爆炸！初次使用新干燥器,时，宜用较厚的布包在外部，以防玻璃,飞溅而引起伤害。,（7）恒重系指供试品连续2次干燥后的重量,差异在0.3mg以下，干燥至恒重的第2次,及以后各次的称重均应在规定条件下继,续干燥1h后进行。,51,四、水分测定法,水分测定法是指采用规定的方法对不同性质的中药材及其制剂进行水分含量测定。,干燥失重测定法除测定水分外尚含有挥发成分，而水分测定仅仅是测定供试品中的水分。,因此，它们之间测定方法、测定条件和要求并不尽相同。,52,（一）测定方法,烘干法,本法适用于不含或含少量挥发性成分的药品,测定方法：取供试品,2,5g,平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过,5mm,，疏松样品不超过,10mm,，精密称定，打开瓶盖在,100,105,干燥,5,小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却,30,分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥,1,小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过,5mg,为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（,%,）。,53,甲苯法,适用于含挥发性成分的药品,测定方法：取供试品适量精密称定，置,A,瓶中，加甲苯约,200ml,，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满,B,管的狭细部分。将,A,瓶置电热套中或用其它适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出,2,滴。馏出液甲苯和水分进入水分测定管中，水的相对密度大于甲苯，沉于底部，甲苯流回,A,瓶中。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适当方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏,5,分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水粘附在,B,管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加显色剂）。检读水量，并计算供试品中含水量（,%,）。,甲苯法水分测定装置,54,（二）注意事项,1. 测定用的供试品，一般先破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片（破碎时不得使用高速粉碎机）。直径和长度在3mm以下者可不破碎。如使用减压干燥法需先经二号筛。,2. 甲苯法中，为减少因甲苯与微量水混溶引起水分测定结果偏低，在测定前，甲苯需先加少量水，充分振摇使达饱和后放置，将水层分离弃去，经蒸馏后方可使用。,3. 进行减压干燥时，减压操作宜逐渐进行，不可骤然大幅度减压。,4. 采用气相色谱法时需注意无水乙醇含水量约3%，标准溶液与供试品溶液的配制需用同一批号试剂。无水乙醇中的含水量需要扣除。含水量的计算采用外标法。,55,五、炽灼残渣检查法,炽灼残渣（英国药典称为硫酸灰分）：,中药多由有机化合物组成，有机物经炽灼炭化，再加硫酸湿润,加热使硫酸蒸气除尽后，于高温（700800）炽灼至完全灰化，使有机质破坏分解变为挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）成为硫酸盐。,56,（一）检查方法,取供试品1.02.0或各药品项下规定的重量，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.51ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700800炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700800炽灼至恒重，即可。如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500600。,57,（二）注意事项,1. 取样量可根据炽灼残渣限量来决定，取样量过多，炭化及灰化时间长，取样量少，炽灼残渣量少，称量误差大。,2. 加热时，必须小心地先用小火加热，以免供试品溅出坩埚外，切不可直接大火加热坩埚底部，否则供试品全部受热引起暴沸或燃烧。,3. 生药的灰化可以加一定量已恒重的纯砂或混以乙醇、甘油，以分散增大其与氧接触的面积，使灰化完全。,4. 如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500600。,5. 具有挥发性的无机成分中药受热挥发或分解，残留非挥发性杂质，也可用炽灼残渣法检查。,58,六、灰分测定法,1、总灰分 中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“生理灰分”即总灰分。,2、酸不溶性灰分 中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分，称为酸不溶性灰分。,59,（一）检查方法,1. 总灰分测定法 称取供试品23g（如需测定酸不溶性灰分，可取供试品35g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01 g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500600，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。,60,2. 酸不溶性灰分测定法 供试品先按总灰分测定,的方法测定其总灰分，然后取所得的灰分，在,坩埚中注意加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖,坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水,5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤,过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至,洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至,同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重,量，计算供试品中含酸不溶性灰分的含量（%）。,61,（二）注意事项,1. 测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能通过2号筛，将粉末混合均匀后再取样。,2. 如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铵溶液2ml；使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得到的残渣再按上面所说的方法炽灼至坩埚内容物完全灰化。,62,第三节 特殊杂质检查方法,一、特殊杂质的概念,药品中的特殊杂质是指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。,二、特殊杂质检查的目的意义,中药制剂在生产和贮存过程中，由于各种药品的来源不同、制备方法不同、剂型不同，即使同一个品种也可以采取不同的工艺路线，而且药品在贮存过程中也可能有不同分解变化的产物。因而应对各种药品进行其特有的检查，即特殊杂质的检查，以保证用药安全。,63,三、特殊杂质检查方法,利用药品和杂质的理化性质及生理作用的差异，采用物理、化学、药理、微生物等方法进行检查。,64,第四节 农药残留量的检查,一、对中药材及中药制剂进行农药残留量检查的,必要性,中药材有相当数量为人工栽培，为提高药材产,量， 减少昆虫、真菌和霉菌的危害，在生产过程,中常喷洒农药。此外，土壤中残留的农药也可能引,入药材中，致使中药材农药残留问题较为严重，而,农药对人体危害极大，所以需对中药材及中药制剂,进行农药残留量检查。,65,二、常见农药的种类,按化学结构分类：,有机氯类：,DDT,、六六六等；,有机磷类：敌敌畏、乐果等；,苯氧羧酸类除草剂：,2,，,4D,；,2,，,4,，,5T,等；,氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）等；,二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、福美锌等；,无机农药：磷化铝、砷酸钙等；,植物性农药：烟叶和尼古丁等；,其他：溴螨酯、氯化苦等。,其中有机氯和有机磷类农药是长期残留的，故应测定其含量。,66,三、农药残留量的测定,1、残留农药的提取,提取溶剂：,有机氯类农药：常用正已烷（或石油醚）、乙腈、丙,酮、苯等，混合溶剂常用正已烷（或石油醚）,丙酮、,乙腈,水等。,有机磷类农药：根据其极性采用相应极性的溶剂进行,提取。,提取方法：,索氏提取法,振荡提取法,67,2、样品纯化：,液,液分配（,LLP,柱层析分离,3,、检测方法：,以色谱分离方法为主，常用薄层色谱法、气相色谱法。（,1,）薄层色谱法：,层析系统：,有机氯农药,吸附剂：硅胶,G,、氧化铝、,GF254,等；,展开剂：已烷、庚烷等。,68,有机磷农药,吸附剂：硅胶,G,、氧化铝、硅藻土、 纤维素和聚酰胺等。,展开剂：丙酮、氯仿、乙腈、环已烷等。,显色剂：有机氯农药：硝酸银；,有机磷农药：刚果红、,4-,（对硝基苄基）吡啶,（,NBP,）等。,69,(二)气相色谱法：,层析柱：常用玻璃柱（柱长以1-2m为宜）或弹性毛细管柱。,检测器：常用电子捕获检测器。,固定液及其配比,有机氯农药：常用DC-200、OV-17、QF-1、SE-30、OV-210等，配比一般为1.5%-10%.,有机磷农药：常用10%DC-200、10%-200+15%QF-1、2%DEGS等。,担体：chromosorb WAW DMCS，目数一般用80100目。,柱温：有机氯农药：一般使用180-220，视农药而异，其中以200最常用；测定对象不同，柱温变化较大,载气：常以高纯氮（含氮99.99%）为载气，流速50-150ml/min,。,70,第五节 黄曲霉素的检查,一、对中药材及中药制剂中黄曲霉素含量进行控制的必要性,中药材采集后干燥或贮存不当，或在制备和加工过程中处理不善，可能污染在自然界普遍存在的黄曲霉而产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性，故需对中药材及中药制剂中黄曲霉毒素含量进行控制。,黄曲霉的基本结构：,71,黄曲霉毒素是一类结构相似的化合物，其基本结构都有二呋喃和香豆素。黄曲霉毒素在紫外线照射下，都能了出荧光，根据荧光颜色、Rf值及结构等不同，分别命名为B,1,、B,2,、G,1,、G,2,、M,1,、M,2,、P,1,、Q等,。,72,二、黄曲霉素的理化性质,水中溶解度低；,易溶于油及一些有机溶剂，如氯仿、丙酮、甲醇等；,不溶于乙醚、石油醚和已烷中；,耐热，一般在制药加工的温度下很少破坏，在,280,时,发生裂解。,73,三、黄曲霉的检测方法1、微柱色谱法： 将样品提取液通过氧化铝-硅镁型吸附剂填充的微柱，样品的杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素则被硅镁型吸附剂吸附，在紫外光下观察荧光环，与标准柱比较进行定量。,74,2、薄层色谱法：,（1）单向展开法：样品中的黄曲霉毒素B,1,经提取、浓缩和用单向展开法在薄层上分离后，在365nm紫外线照射下产生蓝紫色荧光。根据其在薄层上显示荧光的最低检出量定量。,（2）又向展开法：样品中的黄曲霉毒素B,1,被提取、浓缩后在薄层板上点样。先用无水乙醚对薄层做横向展开，将干扰的杂质推到样品点的一侧而黄曲霉毒素B,1,留在点样处。然后再用丙酮氯仿混合液做纵向展开，黄曲霉毒素B,1,所在位置的杂质底色大大减少，因而有利于观察。,75,3、荧光分析法,根据黄曲霉毒素B,1,有荧光的性质，利用微柱色谱法将样品分离后，用荧光法测定；或者利用碱将黄曲霉毒素分离后用荧光法测品。,4、HPLC法,样品中的黄曲霉毒素B,1,用三氯甲烷提取，提取液经弗罗里硅土柱净化，浓缩，定容。溶液用柱后衍-液相色谱荧光检测法测定，外标法定量。,76,5、免疫化学法,样品中的黄曲霉毒素B,1,经提取、脱指、浓缩后与定量特异性抗体反应，多余的游离抗体则与酶标板内的包被抗原结合，加入酶标记物和底物后显色，与标准物产生的颜色比较测定含量。,77,