实验9细胞凝集反应及细胞吞噬课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,*,实验,9,细胞凝集反应及细胞吞噬,一、实验目的,1,掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。,2,观察凝集的现象。,3,了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理。,4,熟悉细胞吞噬作用的基本过程。,2024/9/16,1,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,二、实验原理,动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。凝集素是一类含糖的,(,少数例外,),并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。,凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。,2024/9/16,2,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,二、实验原理,吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能。当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。,通过观察细胞对鸡红细胞的吞噬，计算吞噬百分数和吞噬指数，可以分析判断动物个体的免疫水平。,2024/9/16,3,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,三、实验用品,1,器材：显微镜、解剖,器械,、,小烧杯、,载玻片、盖玻片、,滴管,、吸水纸,2,材料：,凝集,-,土豆块茎、鸡红细胞,吞噬,-,小白鼠、鸡红细胞,3,试剂：,鸡红细胞悬液，凝集素粗提液，,PBS,缓冲液，,Alsever,血液保存液，,2%,的可溶性淀粉溶液，,0.85%,生理盐水，瑞氏染液,(,美蓝,-,伊红,Y),2024/9/16,4,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,四、实验,步骤,2%,鸡红细胞悬液制备,（已完成）,凝集素粗提液制备：将去皮的土豆块茎,2 g,在,10 mL PBS,缓冲液中浸泡,2 hr,后，,PBS,液中含有可溶性土豆凝集素。,细胞凝集反应现象的观察：用滴管吸取土豆凝集素粗提液和,2%,鸡红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置,20 min,后于低倍显微镜下观察。,1,、细胞凝集,实验组,凝集素,1,滴,红细胞悬液,1,滴,对照组,PBS,溶液,1,滴,红细胞悬液,1,滴,2024/9/16,5,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,四、实验,步骤,实验前,3,天，每天向小鼠腹腔注射,2%,的可溶性淀粉,1mL,。实验前,1,小时，向腹腔内注射,1%,鸡红细胞,1mL,，轻揉腹部，使鸡红细胞分散,（已完成）,2,、细胞吞噬,2024/9/16,6,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,四、实验,步骤,颈椎脱臼法处死小鼠，暴露小鼠腹腔，将内脏推向一侧，用滴管吸取腹腔液。,滴,1,滴腹腔液在干净的载玻片上，静置,5-10,分钟，使腹水细胞贴壁。,待其稍干后，进行瑞氏染色。加上盖玻片，,显微镜下观察,。,2,、细胞吞噬,2024/9/16,7,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,五,、实验,结果,PBS+2%,血细胞液,凝集素,+2%,血细胞液,对照组,实验组,1,、细胞凝集,2024/9/16,8,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,五,、实验,结果,1,、细胞凝集,2024/9/16,9,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,五,、实验,结果,未染色的：,鸡红细胞是淡黄色、椭圆形有核的细胞；较大的圆形或不规则的细胞，表面具有许多似刺毛状的小突起的是巨噬细胞。,2,、细胞吞噬,2024/9/16,10,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,五,、实验,结果,鸡红细胞被消化程度（染色后）,未消化：,鸡红细胞核清晰，着色正常，胞质浅红色，细胞核蓝或紫红色,轻度消化：,鸡红细胞胞质深黄绿色，核固缩，紫红色,重度消化：,鸡红细胞核模糊，核肿胀，染色淡，胞质浅染，核呈浅灰黄色,完全消化：,鸡红细胞核溶解，染色极淡，巨噬细胞内只见形状类似鸡红细胞大小的空泡，边缘整齐，核隐约可见。,2,、细胞吞噬,2024/9/16,11,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,五,、实验,结果,2,、细胞吞噬,2024/9/16,12,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,六、讨论与思考题,绘图表示镜检时你所能看到的各种细胞类型及其形态。,细胞凝集实验中，为什么对照组使用,PBS,溶液作对照？,描述小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，并分析吞噬作用的生理意义。,2024/9/16,13,实验9细胞凝集反应及细胞吞噬,