DNA琼脂糖凝胶电泳

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,DNA琼脂糖凝胶电泳,1,实验原理,琼脂糖为链状多糖,绳状琼脂糖束,大网孔型,凝胶,分离、鉴定、纯化,DNA,影响,DNA,迁移率的因素：,DNA,分子的大小、构,象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成,缓冲液,pH,DNA Pi,，,DNA,带负电荷，迁移率与,分子量对数成反比,DNA,分子构象影响迁移率：共价闭环,DNA,线,状,DNA,开环,DNA,2,不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围,琼脂糖浓度（%） 分离范围（kb）,0.3 5-60,0.6 1-20,0.7 0.8-10,0.9 0.5-7,1.2 0.4-6,1.5 0.2-4,2.0 0.1-3,3,琼脂糖凝胶中DNA的观察,溴化乙锭（EB）DNA：紫外光下 红色荧光,4,主要实验器材,电泳仪,电泳槽,缓冲液,琼脂糖,凝胶槽,梳子,取液器,溴酚蓝,5,电泳槽结构,6,操作步骤,琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，,EB,凝胶板的制备：加梳子，倒胶,样品的制备：样品,+1/5,体积溴酚蓝,加样：加样端为负极（黑）,电泳：,5V/cm,观察：紫外灯下观察，照相,7,溶 胶,8,准备胶槽,9,凝胶冷却至50,C,，加EB至终浓度0.5,g/ml,10,铺 胶,11,凝胶凝固后取出梳子,12,加缓冲液,13,准备样品,14,点 样,15,电 泳,16,注意观察溴酚蓝染液的迁移,17,紫外灯下观察电泳结果,18,照 相,19,