大鼠心梗模型

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大鼠心梗模型,1,沿左侧胸骨旁斜行切口，,上界,为两前肢后缘连线，,下界,为第,5,肋间，依次切开皮肤、浅筋膜和深筋膜，并用止血钳钝性分离胸大肌和前锯肌交界处，,在靠胸骨缘处用止血钳钝性分离第,3,、,4,肋间进胸，用专用开胸器撑开,3,、,4,肋间暴露心脏，将棉纱放置在肺组织旁边，防止损伤肺组织。,，潮气量约,3ml/100g,，频率为,70,次,/min,2,待大鼠出现吞咽动作时，拔除气管插管。术毕肌肉注射青霉素,10,活体取出心脏，迅速取材，去除左、右心房及右心室，冲洗后,4%,多聚甲醛溶液固定，沿,左室长轴由心尖至心底做厚切片,，将左室分,为,6,片,，石蜡包埋切片,3,用6一OProlene线缝针在距左心耳下缘1mm处，左冠状静脉主干附近的室间沟内，将LAD连同少量心肌组织一起缝扎，进针深度控制在12mm，宽度为23mm,关胸过程中于切口内放置排气管(用小儿头皮针的软管自制)，关胸毕，抽空胸腔积气后拨除。,试停呼吸机，大鼠恢复自主呼吸后，拨出气管插管，充分清除气管内分泌物。,4,根据文献,l”,一,和本实验室条件建立模型,:,健康成年雄性,sD,大鼠，体重,200,一,2509,，术前禁食,12h,，不禁饮。,3%,戊巴比妥钠,30m,叭,g,腹腔注射麻醉大鼠，起效后仰卧位固定于鼠板。用,0,号婴儿喉镜片经口气管插管，插入,16G,静脉留置针，接小动物呼吸机控制呼吸。确定插管位置深度正确后，口角挂线固定导管，根据血气结果，呼吸参数设定为潮气量,4,一,6ml,，频率,60,一,70,次,/,分，吸呼比,1:1,。,备皮，消毒，铺单后，在左侧腋下和剑突连线偏上,Icm,做一斜切口，长度约为,2.scm,，以心脏搏动最强点为中心。依次钝性分离深浅筋膜、胸大肌、前锯肌，显露肋骨，可见心脏暗影。,将皮肤与各层肌肉做一个荷包缝合备用。充分止血后，由第,3,、,4,肋间入胸,(,心搏最强点偏上一肋,),，钝性分离肋间肌，分离肋间肌范围应适当，不能太接近胸骨以免造成大出血。,5,开胸一定要钝性分离,从心跳最明显处开胸,没有什么大血管,，一些小的血管可以把组织先用止血钳夹一下再剪开，那样不会出血。,呼吸机浅麻醉右侧卧位胀肺,引流管缝合肋间对合胸大肌与前锯肌缝合皮肤抽吸胸腔积气、积液拔除引流管碘附消毒术野，对合肌肉及皮下,6,1.,用,套管针气管插管,的话，消毒后剪开皮肤，钝性分离皮下组织及肌肉暴露气管，插套管针，只会留下一个针眼，术后缝合皮肤就行了，不会有什么危险，你的问题可能出在大鼠自主呼吸还不平稳就拔管缝合了，这时候大鼠会窒息死亡。,2.,开胸一定要钝性分离,从心跳最明显处开胸,没有什么大血管,，一些小的血管可以把组织先用止血钳夹一下再剪开，那样不会出血。,3.,心脏挤出后用棉签翻过来就看到很明显的一条血管，是冠状静脉前降支，考下还有一条旋支。前降支起始处就在肺动脉圆锥和左心耳之间，具体结扎的高低还要看你需要的心梗面积是多大，自己要摸索。左心室的壁还是很厚的，差不多有,23,毫米，你可以解剖一只大鼠看看，我用的就是普通持针器，进针深度尽可能深一点吧，,1,毫米。,4.,关胸的时候捏一下胸部排气就行了，也有人说拿针管抽气，但我觉得这种方法力度不好掌握。,5.,没有二次开胸过，请其他高人给你指点吧。祝你早日成功,7,动物的选则：,健康雄性,SD,大鼠，建议使用,250g,左右体重的，耐受力强。而且小一点的胸壁较薄，开胸容易。,麻醉：,我用的是,10%,水合氯醛，感觉效果还不错，,20,分钟左右待大鼠呼吸平稳即可手术，,23,个小时后苏醒。剂量,0.40.45ml/100g,体重，这个也有个体差异，要大家自己摸索一下。这里给大家一些建议：,1.,麻药刚发挥作用的时候大鼠状态不平稳，这时候不要急于作手术，多观察一会儿。,2.,麻醉程度宜浅不易深，如果麻药打浅了，只要大鼠没有过分挣扎，可适当局麻，千万不可反复补麻药，我的经验这样的情况即使手术成功大鼠也活不长。,关于呼吸：,这是关系到手术成功与否的最主要因素。麻醉药会使大鼠呼吸道产生分泌物，我一般都是,在麻醉大鼠后腹腔注射阿托品,0.1mg/,只,，但据我观察我们学校动物中心的大鼠分泌物不多，不用药也行，曾经买过河南一批大鼠，分泌物极多，必须用药。气管插管我用的是临床上的静脉输液套管针，创伤小，目前术后没发生过呼吸道感染情况。,关于呼吸机：,我也用过江西特力公司的小动物呼吸机，但发现不太适用于大鼠这样的小动物，潮气量的调节非常粗略，不好控制。现在我用的是我们学校自己生产的呼吸机，其实就是一个简易的空气泵，我自己又改装了一下，现在是医用氧和空气的混合气，,呼吸频率,60/,分钟，潮气量,3ml/100g,。,这里由于条件限制，所以潮气量是比较粗略的，而且氧气含量也无法测量，但是据我的经验，给纯氧对大鼠的损伤比不上呼吸机还大，只要有呼吸肌支持，适当给些氧气辅助一下，大鼠成活不成问题。,关于手术切口：,我是在胸壁正中剪开皮肤，然后在胸骨左侧,1CM,左右钝性分离皮下组织和肌肉，最后用血管钳撑开胸腔，助手用自制小拉钩拉开胸壁。这样的好处是每一层的开口不在一个位置，关胸后胸腔自然就闭合，不会漏气。我是在心脏搏动最明显处打开胸腔，一般就是从剑突向上两个肋间。,关于心包膜：,有的时候不破心包膜心脏也能挤出来，但大部分时候还是要破的，打开胸腔后会看到在心脏下方有脂肪样东西随着心脏跳动而活动，用眼科弯镊夹起这层膜一拽心包膜就开了，这时候,助手从胸部的左右压迫胸壁，术者从腹部轻轻一压心脏就出来了。,关于结扎：,针和线都是以前的师兄传给我的，总之是很细的那种，型号我就说不太清楚了，结扎方法也和坛子里其他人写的一样，找到冠,状静脉前降支,，针穿过心肌一起结扎住，这里就不再罗嗦了。,关于感染的问题：,大鼠抗感染能力还是很强的，所以术前术中的消毒问题一般注意就行，术后抗生素在天气不热的情况下不给也行，但是还是给些抗生素好，可以减少炎症造成的胸腔粘连。以上是我想到的一些体会，如果有不明白的地方，愿意和大家交流。,8,用,0,号婴儿喉镜片,经口气管插管，插入,16G,静脉留置针,，接小动物呼吸机控制呼吸。,10,11,Pfu/ml,Ad,一,hPPARYl,自制,Pfu/ml,：,plaque forming unit/ml,，噬斑形成单位，指每毫升试样中所含有的具有侵染性的噬菌体数 当噬菌体裂解平板培养基上细菌后，就形成一个空斑，计为一个,plaque,9,TTC,染色法,并行,TTC,染色进行心肌梗死范围的测定。,TTC,染色法：,在体动物模型灌注结束后，结扎冠状动脉，左心室注入,2-3,Evans,蓝,2-3ml,确定未缺血心肌（呈蓝色）和缺血心肌（无蓝色）。分离缺血区和非缺血区并以滤纸吸干，置于天平上称重，将缺血区心室肌以平行于房室沟的方向切成,7-8,片，每片厚,1-2mm,，置入,1,氯化三苯基四氮唑（,TTC,）磷酸盐缓冲液（,PH 7.4,）中,37,水浴,10-15min,。缺血危险区因脱氢酶还原,TTC,而呈红色，梗死区因脱氢酶流失而呈白色，将梗死区和非梗死区分离并分别称重，梗死范围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。,10,11,给药,实验兔称重,硫责妥钠,;30mg/kg,静脉麻醉,免仰卧位固定于手术台上,Maclab/8s,多功能生理仪行心电监护。常规备皮、消毒,无菌条件下行胸正中切口,沿胸骨正中将胸骨切开,暴露心脏,保持两侧胸膜完整无破损,小心提起心包并剪开,可见与左冠状动脉前降支,(LAD),相伴行的心大静脉,LAD,走行于心大静脉深方,表面覆盖薄层心肌,肉眼不易见 。,以心大静脉为标志,取其中下,1/3,交界处以一根,5/0,外科缝合丝线结扎,(Sham,组冠脉只穿线不结扎,),结扎前于心脏上滴少量利多卡因。观察心尖部及部分左室前壁心肌变苍白,并出现室壁运动减弱, Maclab/8s,多功能生理仪记录冠脉结扎前后心电图变化。,Ad-Blank,组于苍白区心肌组织周围分别取对称,4,个点,各点间距,5mm,用无菌微量注射器注,8ul,不含,HIF-1a,腺病毒空载体,平均每个点注射,2ul,。,Ad-HIF-1a,组注人含,HIF-1a,腺病毒载体,8ul,Rz-HIF-1a,组注入,HIF-1a,核酶基因,8ul,方法均同,Ad-Blank,组,12,