微生物实验室培养基质量控制

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物实验室,培养基质量控制,宁夏疾病预防控制中心,刘 翔,培养基控制的目的,培养基定义、组成与分类,培养基的质量控制,培养基使用中常见问题,养基质量控制应该形成的记录,培养基质量控制的目的,为获得准确、可靠的数据，只有对培养基进行有效的监控，才能从根本上保证检测结果的可信和有效。,培养基定义、组成与分类,定义：,按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质，由人工配置的营养基质，专供微生物培养及分离鉴别、研究和保存专用。,组成：,碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子和水六大类营养物质。,分类：,物理状态、功能和制备工艺,物理状态：,液体培养基、固体培养基和半固体培养基。,功能：,基础培养基、选择性培养基和鉴别培养基。,制备工艺：,自行配置、干燥培养基和即用型培养基。,培养基分类,培养基质量控制依据,ISO/TS 11133.1-2000,食品和动物饲料的微生物学 培养基制备和生产导则 第,1,部分 实验室培养基制备的质量保证一般导则,ISO/TS 11133.2-2003,食品和动物饲料的微生物学 培养基制备和生产指南 第,2,部分：培养基性能试验实用导则,SN/T1538.1-2005,：实验室培养基制备质量保证通则,SN/T1538.2-2007,：培养基性能测试实用指南,WS/T232-2002,：商业性微生物培养基质量检验规程,干粉培养基的质量控制,干粉培养基的质量控制,培养基制备过程控制,称量、溶解、分装、灭菌,理化学指标的质量控制,色泽、水分含量、澄清度、,PH,值及凝胶强度,微生物学指标的质量控制指标,生长率（定量方法和定性方法）,选择性（半定量方法和定性方法）,特异性（定性方法）,微生物学指标的质量控制方法,各类培养基指控指标：,基础培养基（生长率）,选择性增菌液（生长率、选择性）,选择性分离培养基（定性方法）,生化鉴定培养基,计数类培养基（生长率、选择性和特异性）,适用于基础培养基：,此类培养基含有适合大多数微生物生长需要的营养物质。,例：脑心浸液肉汤培养基（,BHI,）,质控菌株,营养苛求菌,乙型溶血性链球菌,短小芽孢杆菌,测定方法,制备,10,8,菌悬液，,10,倍梯度稀释至,10,-8,。,选取适宜的,3-4,个连续稀释度接种于,9mL,待检测培养基中，每个稀释度,3,管，,35-37 ,培养,3d,。,接种管,2/3,生长的最高稀释度即为该培养基的灵敏度,灵敏度测定法,（可以用定性方法代替）,混合增菌法（定量）,适用于选择性增菌培养基：,此类培养基,含有目标菌生长需要的特殊营养物质，及抑制非目标菌生长的抑制剂。,例：亚硒酸盐胱氨酸增菌剂（,SC,肉汤）,质控菌株,鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌,测定方法,将沙门氏菌和大肠埃希氏菌的新鲜肉汤培养物按照,1,：,99,进行混合，接种于,SC,肉汤中，,36,培养,18-24h,将培养物适当稀释，去稀释液,0.1mL,涂布,MAC,平板,结果：平板上应,90%,以上为沙门氏菌、大肠埃希氏菌应,10%,。,适用于选择分离培养基：,此类培养基含有目标菌生长需要的特殊营养物质，及抑制非目标菌生长的抑制剂。,从菌落数量上判断分离培养基对目标菌的选择效果，以及对非目标菌的抑制性。,目标菌的回收率要求在,70%,以上，并具有典型菌落特征。,非目标菌全部被抑制或部分抑制。,回收率测定法,质控菌株的选择,生化性状典型的强阳性质控菌株,生长相对较弱的阳性质控菌株,不具备目标菌典型反应特性的质控菌株,生长被抑制的阴性质控菌株,回收率测定法,例,1,：,XLD,培养基,回收率测定法（定量和定性）,例,2,：沙门氏菌显色培养基,沙门氏菌：,紫红色菌落,大肠埃希氏菌：,蓝色菌落,奇异变形杆菌：无色菌落,弗氏志贺氏菌：无色菌落,金黄色葡萄球菌：抑制,回收率测定法,例,3,：李斯特菌显色培养基,李斯特氏菌属：,蓝色菌落,单增和绵羊李斯特氏菌：蓝色菌落,周围有白色不透明晕圈,大肠埃希氏菌：抑制,回收率测定法,生化鉴定方法,适用于生化鉴别培养基：,此类培养基用于检测细菌生理、生化特性，借助于某些微生物所特有的某种酶，对培养基中某一特有成分进行分解，致使培养基中,PH,值发生改变，再通过指示剂颜色的变化鉴定微生物的生化特性，从而判别微生物属于哪一类型，如,KIA,、,TSI,、,MIU,等。,A,：未接种培养基,B,：斜面变碱,/,底部变酸,/,少量,H,2,S/,气体,-,（伤寒沙门菌）,C,：斜面变碱,/,大量,H,2,S/,气体,+,（鼠伤寒沙门氏菌）,D,：斜面变碱,/,底部变酸,/ H,2,S-/,气体,-,（福氏志贺菌）,E,：斜面变酸,/,底部变酸,/ H,2,S-/,大量气体（大肠埃希菌）,F,：非发酵,/ H,2,S-/,气体,-,（铜绿假单胞菌）,用于鉴别革兰氏阴性肠杆菌，该培养基含有三种可发酵的碳源即葡萄糖,0.1%,、蔗糖,1%,和乳糖,1%,，被菌体利用产酸，可使酚红指示剂变色。另外某些菌能还原,Na,2,S,2,O,3,产生,H,2,S,，与硫酸亚铁铵中的亚铁离子反应生成黑色,的,FeS,，而使培养基变黑。,例,1,：,KIA,（,TSI,）,在同一试管里验证细菌动力、尿素和吲哚产生情况。,孵育,18-24h,，先观察动力、，然后加入,Kovacs,试剂检测吲哚的产生,注意：一次垂直穿刺接种，离底部,1cm,处停止，不可多次穿刺，或接种针有弯曲或扭曲。,例,2,：,MIU,琼脂,A,：动力,-/,尿素,+/,吲哚,+,（产酸,/,肺炎克雷伯属）,B,：动力,+/,尿素,+/,吲哚,-,（奇异变形杆菌）,C,：动力,+/,尿素,-/,吲哚,-,（沙门氏菌属）,C,A,B,例,3,：西蒙氏枸橼酸盐培养基,未接种管,绿色,（,A,）,鼠伤寒沙门氏菌,阳性：培养基变为,蓝色,（,B,）,大肠埃希氏菌,阴性：培养基为,绿色,（,C,）,产气肠杆菌,阳性：培养基变为,蓝色,（,D,）,A,D,C,B,培养基使用中的注意事项,容器密闭不适应带来的影响,肠道菌增菌肉汤：灭菌时应使用透气性较好的试管塞，如用硅胶塞，则不宜盖得太紧。,LST,：如果试管塞过紧，影响排气，可能导致灭菌后小倒管中仍有气泡。,三糖铁琼脂：培养时不宜将试管塞塞得过紧。,MIU,琼脂：接种完毕要换成橡胶塞。,培养基使用中的注意事项,培养基保存的注意事项,培养基的保存条件：避光保存于阴凉干燥处，使用后，拧紧瓶盖，避免吸潮、氧化或污染。,保质期：一般未开封的培养基可保质年，已开封的可保质半年，在瓶体注明开封日期。,个别品种如保存不当，极易变质，如,SC,增菌液，建议冷藏保存，可延长保质期。,制备好的平板：冰箱可以保存最多,3,个月，含有添加剂或抗生素的培养基即配即用。,培养基质控记录,入库登记记录,配置记录,高压灭菌记录,技术验收记录及评估报告,菌种使用记录,培养箱使用记录,技术验收记录,入库登记记录,配置记录,灭菌记录,培养箱使用记录,菌种使用记录,培养基质控记录,培养基入库登记表,培养基配置记录,高压物品消毒记录,培养基使用登记表,培养基质控记录,菌种鉴定记录,菌毒株入库登记表,菌毒株使用记录,食品检测记录,有误之处请大家多指正,谢 谢！,