促红细胞生成素课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,基因工程药物,促红细胞生成素（,EPO,）,什么是,EPO,？,EPO,：是促红细胞生成素（,Erythropoietin,）的英文简称。,促红细胞生成素：最初是从肾脏中分离出来能刺激前体红细胞增生、分化的一种细胞因子。,人体血液中的促红细胞生成素：是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。它与其受体,(EPO-R),结合后共同介导缺氧的生理反应,。,EPO,的用途,医疗用途：增加红血球的数目，用于贫血、组织断离、早产儿，用在癌学和血液学方面。,体育用途,(,兴奋剂,),：增加训练耐力和训练负荷，属于国际奥委会规定的违禁药物。在,2008,年北京奥运会中第一例的兴奋剂。,EPO,的 疗效,1,、肾性贫血患者,EPO,水平较低，在进行治疗过程中，往往通过注射,EPO,来提高体内,EPO,水平进行治疗，从而帮助病人增加红细胞数量，此时,EPO,水平有所上升。,2,、其他贫血如缺铁性贫血、巨细胞性贫血患者,EPO,水平不降低，但也可以使用,EPO,治疗，此时浓度也会有所升高。,3,、再生障碍性贫血和骨髓造血功能不全患者,EPO,水平升高。,EPO,的纯化历史,1,、,Miyake,的七步法：纯化步骤太多，对设备及操作要求也较高，不适合工业生产的特点。,2,、,Spivik,利用凝集素亲和层析纯化,EPO,：由于凝集素亲和层析凝胶易被杂蛋白不可逆吸附，使得分离效果降低，成本增高，也不利于大规模生产。,3,、近年来则利用三步层析法三步纯化基本流程,等。,EPO,的工艺流程,三步层析法,1,、 染料配基亲和层析反相疏水层析离子交换层析,;,2,、 染料配基亲和层析反相疏水层析分子筛层析,;,3,、 反相疏水层析离子交换层析分子筛层析。,EPO,的工艺流程,三步纯化基本流程,第一步：反相柱色谱,样品浓缩约,96.7%,透析,第二步：,DEAE-,离子交换色谱,第三步： 分子筛色谱,总回收率,30%,比活,1.5*10,8,U/g,蛋白,第一步：反相色谱,C6,反相柱（,2cm*,2cm,） （创新生物技术公司）,流程：,上样,50ml/min,（柱结合量约,5mg,蛋白,/ml,介质,),去离子水,平衡至检测基线,10%80%,乙醇胍,线性梯度洗脱,检测并收集含,EPO,主峰,ELISA,测定,结果：,60%,乙醇,-1mol/L,盐酸胍,洗出,EPO,透析,透析液：,10,倍体积的,10mmol/L,Tris.HCl,(pH 7.5)-2%,蔗糖缓冲液,透析次数：,2,时间：,56h,第二步：离子交换柱,DEAE,型离子交换柱,流程：,10mmol/L,Tris.HCl,(pH7.5),缓冲液,平,上样,20ml/min,（柱结合量,20mg/ml,）,10mmol/L Tris.HCl(pH7.5),缓冲液平衡,至基线,添加,NaCl,入缓冲液，进行,截状梯度洗脱,（,NaCl,浓度分别为：,50,，,70,，,125mmol/L,）,结果：,ELISA,检测盒表明,75mmol/L,洗脱峰中含,EPO,第三步：分子筛色谱,Sephacryl,S-200,色谱分析,流程：,上样体积,80ml,流速,2ml/min,流动相,20mmol/L,柠檬酸钠,- 100mmol/L,NaCl,缓冲液,结果：,收集的,rHuEPO,保留时间约为,45min,比活性约为,1.5*10,8,U/g,蛋白；纯度,98%,（,SDS-PAGE,检测）,免疫原性检测：,Western blot,EPO,的销售情况,重组促红细胞生成素，也称超级“重磅炸弹”基因药物 。,1985,年科学家应用基因重组技术，在实验室获得重组人,EPO,（,rhEPO,），,1989,年安进（,Amgen,）公司的第一个基因重组药物,Epogen,获得,FDA,的批准，适应症为慢性肾功能衰竭导致的贫血、恶性肿瘤或化疗导致的贫血、失血后贫血等，其市场表现不俗，,1999,年销售值达到,17.6,亿美元，,2000,年,19.6,亿美元，,2002,年,22.6,亿美元，,2003,年,24.4,亿美元，成为名副其实的“重磅炸弹”基因药物。,安进（,Amgen,）开发的用于治疗恶性贫血症的第二代促红细胞生成素新产品,Arnesp2001,年得到,FDA,的批准，,Arnesp2002,年初正式上市。,Arnesp,：是一种“高糖基化”促红素产品。其促进红细胞生成的能力大大优于第一代,EPO,（促红细胞生成素）产品。第一年上市即大获全胜，赢得开们红，,Arnesp2002,年全年销售额为,4.2,亿美元，,2003,年全年销售额为,15.4,亿美元。,估计在今后,3,年内，,Arnesp,将创造,10,亿,15,亿美元的市场销售额并夺取现有,EPO,生产商的部分市场，其市场前景不可估量。,2001,年，,EPO,（包括,Arnesp,）的全球销售额达,21.1,亿美元，,2002,年达,26.8,亿美元，,2003,年全世界,EPO,的年销售额超过,50,亿美元。创下生物工程药品单个品种之最，是当今最成功的基因工程药物。,强生（,Johnson&Johnson,）公司的促红细胞生成素,Procrit/Eprex,更是表现不俗，,2001,年销售额,34.42,亿美元，,2002,年销售额,42.69,亿美元，,2003,年销售收入达到,39.84,亿美元。,目前，国内已有,10,多家单位获准生产红细胞生成素。沈阳三生和上海麒麟鲲鹏（中国）生物药业的产品在国内医院的销售额独领风骚，,2001,年,EPO,的国内医院销售总额约为,47449,万元，,2002,年为,49508,万元，,2003,年上半年为,28606,万元。,估计国内的年市场容量在,20,到,30,亿元左右，但目前年销售额只有区区,5,亿元左右。,综上所述，,EPO,的市场前景非常可观,。,EPO,的市场前景,THANK YOU !,