细菌的药物敏感试验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗菌药物和药敏试验,第一节,临床常用抗菌药物,抗菌药物,是指具有杀菌或抑菌活性,的抗生素和化学合成药物。,前者,是真菌、放线菌、细菌等的,代谢产物，,后者,是经化学改造的半合,成抗生素和化学合成药物。,一、青霉素类抗生素：,包括青霉素,G,、,耐青霉素酶青霉素、,广谱青霉素,(,氨苄青霉素、,美洛西林、哌拉西林,),等。,二、头孢菌素类抗生素：,第一代,(,头孢唑林、头孢氨苄、头,孢拉定,),、第二代,(,头孢孟多、头孢西汀，头孢呋新，头孢克,罗等,),、第三代,(,头孢哌酮（先锋必）、头孢三嗪（菌必治）、,头孢噻肟钠、头孢他啶、头孢唑肟等,),。,第四代,如头孢地嗪、,头孢噻唑肟、头孢吡肟等。适用于多重耐 药,G-,杆菌严重,感染，对厌氧菌也有很好的抗菌作用,三、其他,内酰胺类抗生素,（一）单环,内酰胺类抗生素,:,主要有氨曲,南和卡芦莫南。,抗菌药物的分类,（二）头霉素类和氧头孢烯类抗生素,:,主要,有头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑。,（三）碳青霉烯类抗生素,:,主要有亚胺培南、,米洛培南、必安培南、帕尼培南。,（四）,内酰胺类抑制剂,:,主要有克拉维酸,舒巴坦和他唑巴坦。,所有,内酰胺类抗生素,都能抑制细胞壁粘肽合成酶，即青霉素结合蛋白,（,penicillin binding proteins,，,PBPs,），,从而阻碍细胞壁粘肽合成，使细菌胞壁缺损,四、氨基糖苷类抗生素,可干扰细菌,蛋白质,合成,主用于对,革兰氏阴性菌,、,绿脓杆菌,等感染 的治疗,按其来源分为,：,由,链霉菌属,发酵滤液提取获得，有链霉素、卡那,霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉,素；,由,小单胞菌属,发酵滤液中提取，有庆大霉素、福,提霉素；,半合成,氨基糖苷类，有阿米卡星、奈替米星、地,贝卡星等。,五、喹诺酮类抗生素,是一种,DNA,旋转酶抑制剂，它作用于细菌,DNA,旋转酶，干扰,DNA,超螺旋结构的解旋，从而阻碍,DNA,的复制。,第一代,为窄谱抗生素，有新恶酸、奈啶酸和恶,喹酸。,第二代,为广谱类抗生素，抗菌强度依次为环丙,沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、,培氟沙星、诺氟沙星。,第三代,为超广谱类抗生素，有司帕沙星、妥舒,沙星、左氟沙星等。,六、大环内酯类抗生素,:,作用于核糖体,50S,亚基，抑制肽酰基转移酶，阻止转肽作用和,mRNA,位移，抑制细菌蛋白质的合成。,常用的有：红霉素、柱晶白霉素、麦迪霉素、,乙酰螺旋霉素。,七、四环素、氯霉素和林可酰胺类抗生素,（一）四环素为广谱抗生素，,能特异性地与细菌核糖体,30S,亚基的,A,位置结合。,抗菌活性的顺序 为米诺环素多西环素美他环素地美环素。,（二）氯霉素类抗生素，包括氯霉素、,甲砜霉素。,（三）林可酰胺类抗生素，主要有盐酸,林可霉素、克林霉素。,八、糖肽类抗生素,常用的有万古霉素,和替卡拉宁,九、磺胺类药物及增效剂,分三类：,用于全身感染的药物，分为短效、,中效、长效三类，有磺胺甲恶唑，,磺胺嘧啶、磺胺甲氧吡嗪；, 肠道起作用的药物有柳氮磺胺啶银、,磺胺二甲氧嘧啶；,局部应用的药物有磺胺米隆、磺胺,醋酰钠。,十、其他合成抗菌药,1.,硝基呋喃类,用于肠道、尿路感染和,外用消毒 ，有呋喃坦啶和呋喃唑酮。,2.,硝基咪唑类,对厌氧菌有抗菌作用，对,需氧菌无效，有甲硝唑和替硝唑。,第二节 抗菌药物敏感性试验,（,AST,）,一、意义,可预测抗菌治疗的效果， “敏感”治疗可能有效； “耐药” 肯定失败；,指导医生选择使用抗生素，,AST,的结果为“耐药”，即应更换药物；,提供所选择药物的依据；,监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染,病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行。,二、试验常规,抗菌药物选择,在临床上将试验药物分成,A,、,B,、,C,、,U,四组,A,组,所列的抗生素,为常规首选药敏试验药物,B,组,为临床使用主要抗生素,尤其在医院感染时,使用的抗生素，可在下列情况下使用：,对,A,组,同类抗生素耐药；,标本来源不同时，如三代头,孢菌素使用于脑脊液中的肠杆菌，磺胺甲恶唑使,用于尿道分离的细菌；,多种微生物感染；,多,部位感染；,感染流行的控制；,对,A,组抗生素,过敏、耐受或无反应。,C,组,药物,用于对,A,组药物耐药的流行菌株或,对,A,组药物过敏的病人和某些不常见的,细菌,（如肠外分离的沙门菌属或耐万,古霉素肠球菌）。,U,组,仅用于尿道中分离的细菌,，不作为尿,道外分离菌的常规药敏试验。,建议非苛氧菌常规药敏试验和报告应考虑的抗菌药物分组,细菌,A,组,B,组,C,组,U,组,肠,杆,菌,科,氨苄西林,头孢唑啉,头孢噻吩,庆大霉素,阿莫西林,/,克拉维酸或氨苄西林,头孢孟多或头孢呋辛,头孢吡污,头孢美唑,头孢哌酮,头孢西丁,头孢噻污,环丙沙星或左氟沙星,亚胺培南,甲氧苄定,氨曲南,头孢他啶,(,可指示产,ESBLs,),氯霉素,卡那霉素,奈替米星,四环素,妥布霉素,羧苄西林,洛美沙星或氧氟沙星,加替沙星,氯碳头孢,磺胺异恶唑,甲氧苄啶,呋喃妥因,建议非苛氧菌常规药敏试验 和报告应考虑的抗菌药物分组,细菌,A,组,B,组,C,组,U,组,葡,萄,球,菌,属,细,菌,苯唑西林,青霉素,阿奇霉素或克拉霉素或红霉素,克林霉素,万古霉素,泰利霉素,利奈唑胺,环丙沙星或左氟沙星,或氧氟沙星,氯霉素,庆大霉素,利福平,四环素,罗美沙星或诺氟沙星,磺胺异恶唑,甲氧苄啶,呋喃妥因,(,一）非苛养菌药敏试验抗生素的选用,A,组,一级试验并常规报告的抗微生物药,如葡萄球菌属用苯唑西林和青霉素。,B,组,一级试验有选择报告的抗微生物药,如肠球菌属用万古霉素 。,C,组,补充试验有选择报告的抗微生物药，,如葡萄球菌属用氯霉素 。,U,组,仅用于泌尿道的补充实验的抗微生物,药，如葡萄球菌属用洛美沙星和诺氟沙星。,(,二）苛养菌药敏试验抗生素的选用,A,组一级试验并常规报告的抗微生物药,如,肺炎链球菌,用,红霉素,和青霉素。,B,组一级试验有选择报告的抗微生物药,如,肺炎链球菌,用,头,孢噻肟,或头,孢,曲,松,。,C,组补充试验有选择报告的抗微生物药，,如,肺炎链球菌,用,头,孢呋,辛,。,稀释法和纸片扩散法,稀释法,是在体外定量检测抗菌药物抑制待测菌生长活性的方法,抗菌药物在液体或固体培养基中稀释,.,（一）液体稀释法,原理,:,以,MH,（水解 蛋白）液体培养基将抗菌药物做不同浓度的稀释，然后接种待测菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死该菌的最低（或最小）抑菌浓度（,minimal inhibitory,concentration,MIC,）。,三、,药敏试验方法,材料：,抗菌药物,(,配制见表,),培养基：,一般采用,MH,液体培养基,。,接种菌液的准备：,挑取纯培养（平板）的,4-5,个菌落，种于,3-5ml MH,液体培养基中，,35,培养,4-6,小时；校正菌液浓度，使其相当于,0.5,个麦氏单位的浊度（,1.28x10,8,cfu,/ml,）标准，再用,MH,液体培养基进行,1,：,200,的稀释后，在,15 min,内用完。,无菌小试管：,10-15,支,无菌吸管：,35,培养箱,操作步骤：,取,10,支小试管，除第一支外，其余每管加于,MH,培养基,1ml.,吸取抗菌药物原液（,1000,g,/ml,）,5.12ml,加入液体培养基,4.88ml,，混合，吸出,2ml,加入第一和第二管中，每管加,1ml,，第二管混合后取出,1ml,加入第三管，依次类推直至,9,管，吸取,1ml,去掉，各管抗菌药物的实际含量依次分别为,512,、,256,、,128,、,64,、,32,、,16,、,8,、,4,、,2,、,1,g,/ml,；另设培养液对照、待测菌生长对照、和质控菌生长对照。,3.,将一定浓度的待测菌悬液依次加入上述各管中，每管,0.05ml,，混匀。放入,35,培养箱,12-18,小时后观察结果。,4.,结果判断：凡无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该待测菌的,最低抑菌浓度（,MIC,）,;,再以,0.01ml,容量接种环无菌管中取出一环种于血平板作次代培养，经,35,培养过夜后，观察最低药物浓度能杀死,99.9%,原始种于的细菌者，即为该菌的,最低杀菌浓度（,MBC,）,。,影响因素,1.,培养基,pH,、渗透压、电解质对结果均有影响。在,MH,培养基上不生长的细菌除外，一般都用该培养基。,2.,抗菌药物 必须采用标准粉剂。,3.,结果观察时间，应在,12-18,小时之间观察。,质量控制：,每次试验时应根据待测菌的不同而分别选用：金黄色葡萄球菌,ATCC25923,、大肠艾希菌,ATCC25922,、粪肠球菌,ATCC29212,和铜绿假单胞菌,ATCC27853,等标准菌株在同一实验条件下作平行试验。其结果（,MIC,）超过或低于预期值范围一个稀释度以上，不应向临床发出报告。,（二）琼脂稀释法,原 理,琼脂选择法是,将药物混匀于琼脂培养基中,，配制含不同浓度药物平板，使用多头接种器接种细菌，经孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含药物浓度,测得,MIC,。,结果判断,将平板置于暗色、无反光表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的药物稀释度为终点浓度（磺胺可见少许散在细菌生长）。,结果报告,可用,MIC,（,g,/ml,）或用敏感,S,）、,（中介（,I,）,和耐药（,R,）,报告。,纸片琼脂扩散法,（一）试验原理,将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接,种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药,物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围,扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑,菌浓度范围内细菌的生长被抑制，从而形,成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。,抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物,的敏感程度，并与该药对测试菌的,MIC,呈,负相关。,(,二,),材料,1,抗菌药物纸片,选择直径为,6,35mm,，,吸水量为,20l,的专用药敏纸片用逐,片加样或浸泡方法使每片含药量达规,定所示。含药纸片密封贮存,2,8,且不超过,1,周。,2,培养基,水解酪蛋白（,MH,）,培养基是,兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培,养基，,4,保存。,（,三）方法：,1.,用,0,5,麦氏比浊标准的菌液浓度，在琼 脂表面均匀涂片,在,15min,内接种完毕。,2.,将含药纸片紧贴于琼脂表面, 35,孵育,18h,后阅读结果。,（四）结果判断和报告,用精确度为,1mm,的游标卡尺量取抑菌圈直径。根据,NCCLS,标准，,作出“敏感”,“,耐药”和“中介”的判断。,纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准,抗菌药物与细菌,纸片含量 抑菌圈直径,：,mm,相应,MIC,g,/ml,耐药 中介度 敏感 耐药 敏感,丁胺卡那霉素,30g 14 15-16 17 32 16,氨苄青霉素,测肠杆菌,10g 11 12-13 14 32 8,测葡萄球菌,10g 28 29,测嗜血杆菌,10g 19 20 4 0.25,测肠球菌,10g 16 16 2,E,试 验,（一）原理,E,试条是一条,5mm50mm,的无孔试剂载体，一面固定有预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释抗生素，另一面有读数和判别的刻度。将,E,试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的特定浓度,又称抑制浓度（,IC,），,它与,MIC,呈高度相关。,（二）细菌接种和加样,使用厚度为,4mmMH,琼脂平板，用,0.5,麦氏浓度的对数期菌液涂布，待琼脂平板完全干燥，用,E,试验加样器将试条放在已接种细菌的平板表面，试条全长应与琼脂平板紧 密接触，试条,MIC,刻度面朝上浓度最大处靠平板边缘。,（三）结果判断和报告,读取椭圆环与,E,试验试条的交界点,IC,值。,与,NCCLS,的稀释法,MIC,参考值高度相关。,四、药物敏感试验结果解释,“敏感”,即表示测试菌可被测定药物,常规剂量,给药,后,在体内达到的血药浓度,所抑制,“耐药”,即表示测试菌,不能被在体内感染部位,可能达到的抗菌药物浓度所抑制,，临,床治疗无效。,“中介”,者提示该细菌,对常规用药体液或组织,中的药物浓度的反应率低于敏感株,，,使用高于正常给药量有疗效,。,五、自动化仪器检测,Viter,ATB,系统和,Microscan,是半,自动或全自动细菌鉴定和药敏系统，,通过系统中药敏专家系统可报告分离,菌的药敏结果。,第三节,细菌耐药性和产生机制,一、细菌的耐药性,对某种抗菌药物敏感细菌变成对该药物,耐受称细菌耐药性。,它可分为,天然耐药,和,获得性耐药,，前者是通过染色体,DNA,突变而致，后者往往是由质粒、噬菌体及其他遗传物质携带外来,DNA,片段导致产生的耐药性。,突变可由细菌自发产生或在,X,线等物理因,素或化学物质诱导产生，一般只对一种或两,种相似药物耐药，在细菌耐药性上不占主要,地位。,获得性耐药,可通过接合、转化。转导、转换形式产生耐药 。,二、细菌耐药性的生物化学机制,1.,产生,内酰胺酶,，水解药物,内酰,胺环而失去抗菌活性。,2.,产生,钝化酶,使抗生素失活，钝化酶有三类：,氨基糖苷类钝化酶 ；, 氯霉素乙酸转移酶；, 红霉素酶和其他灭活酶。,3.,青霉素结合蛋白,改变，导致对抗生素的,亲和力下降 。,4.,药物作用靶位的改变,使抗生素不易结,合产生耐药性。,5.,抗菌药物渗透障碍,，如外膜蛋白减少,和药物外排作用等。,6.,代谢途径的改变,。,第四节,细菌耐药性检测,一、,特殊菌,耐药性表型检测,（一）,耐药筛选试验：,琼脂筛选试验,以单一药物单一浓度检测某种细菌的耐药性。,在含一定浓度测试药物的特殊培养上，点种,0.5,麦氏比浊度直接菌落配制细菌悬液，,35,孵育,24h,后观察平板上是否有菌落生长识要有,1,个菌落生长，均视为耐药。,临床上常用于对,耐甲氧西林葡萄球菌,、,耐,万古霉素肠球菌，对庆大霉素或链霉素高水平,耐药的肠球菌的检测,。,（二）折点敏感试验,仅用特定抗生素浓度（敏感、中介或耐药,折点,MIC,）,而不使用测定,MIC,时所用系列对,倍抗生素浓度测试细菌对药物的敏感性称,折点敏感试验。当选择区分中介和耐药折,点值药物浓度时，若两种抗药物浓度培养,基均生长可判断为耐药；如在两种药物浓,度均不生长则为敏感；仅在较低药物浓度,培养基中生长提示为中介。,（三）双相纸片试验,挑取血平板上菌落，稀释成,0.5,麦氏浓,度菌液。均匀涂布于,MH,平板。中央贴上阿莫,西林,/,克拉维酸纸片，在距该纸片,25mm,处分,别贴头孢噻肟或头孢曲松、头孢他啶和氨曲,南等药敏纸片作为指示剂，,35,孵育,18h,观察,结果。,若指示剂在朝向阿莫西林,/,克拉维酸方向,有抑菌圈扩大的现象（协同现象），则说明,待检菌产生超广谱,内酰胺酶。,（四）自动化仪器,自动化仪器,Microscan,有测定抗菌药物抑,菌的,MIC,值功能。,原理,是先测定细菌对抗生素的,MIC,值，,当头孢他啶与头孢他啶十克拉维酸的,MIC,比,值或头孢噻肟与头孢噻肟十克拉维酸的,MIC,比值大于或等于,8,（即,3,个对倍稀释度）即判,定为此细菌产生,ESBL,。,二、,内酰胺酶,检测,1.,头孢哨噻吩滤纸片法,用接种环挑取受试菌于商品化头孢哨噻,吩滤纸片上，于,10,分钟内由黄色转变为,红色即阳性结果，示产色头孢菌素的,内酰胺环被酶打开。,2 .,碘淀粉测定法,用接种环挑取受试菌混于青霉素溶液中，,室温下振摇,30,分钟。加入淀粉液后，再加,入碘液，溶液变蓝，继续振摇。若检测菌,产生酶，则可水解青霉素,内酰胺环变,为青霉素噻唑酸，后者与碘结合，使碘淀,粉复合物转变为无色，,10,分钟之内蓝色消,失者为产酶株。,四、特殊耐药菌检测,（一）耐甲氧西林葡萄球菌检测,1,定义,对,1g,苯唑西林纸片的抑菌圈直径,10mm,，,或其,MIC,4g,ml,的,金黄色葡萄球菌,；,对,1g,苯唑西林抑菌圈直径,17mm,，或,MIC,0,5g,ml,的,凝固酶阴性葡萄球菌,；,都称耐甲西林葡萄球菌（,MRS,）。,2,临床意义,MRS,不论其体外药敏试验结果，所有,的,内酰胺类药物,和,内酰胺,内酰胺酶抑制剂,均无临床疗效,；,绝大多数的,MRS,常示多重耐药,，包括,氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类。,（二）耐青霉素肺炎链球菌检测,1.,定义 当对,1 g,ml,苯唑西林纸片抑菌,圈,20mm,或,MIC,0,06 g,ml,互应视,为耐青霉素肺炎链球菌（,PRSP,）。,2.,临床意义,PRSP,对氨苄西林、氨苄西林,舒巴坦、头孢克肟、头孢唑肟，临床治,疗的疗效很低。但应检测对头孢曲松、,头孢噻肟和美咯培南的,MIC,以判断是否对,这些抗生素敏感。,（三）耐万古霉素肠球菌检测,1,定义 对,30g,万古霉素纸片抑菌圈直,径 ,14mm,或其,MIC,32g,ml,应视,为耐万古霉素肠球菌（,VRE,）。,2,临床意义 对青霉素敏感的,VRE,可用青霉,素和庆大霉素联合治疗，若对青霉素耐,药而不是高水平耐氨基糖苷类可用壁霉,素庆大霉素。,（,四,）,超广谱,内酰胺酶,肠杆菌科细菌检测,1,定义,超广谱,-,内酰胺酶,就,是能水解青霉素,、,头孢菌素,及,单胺类的酶,，主要由,克雷伯菌,和,大肠埃,希菌,、,肠杆菌,等细菌产生。,初筛试验,使用,1,种以上药物，其抑菌环直径满足以下条件：,对,头孢泊肟、头孢他啶（,10ug,片）抑菌圈,22mm,或,氨曲南、头孢噻肟（,30,ug,片） ,27mm,为初筛试验阳性即为产,ESBL,菌株。,确证试验,经,头孢他啶（,30ug,片）、头孢他啶克拉维酸（,30,10ug,）；,头孢噻肟,30ug,、头孢噻肟克拉维酸（,30,10ug,）,两组中任何一组药物加克拉维酸与不加克拉维酸相比，其抑菌环增大,5mm,者，判断为产,ESBL,菌株。,2.,试验方法,同,K-B,法,单纸片扩散法（初筛试验）,将,0.5,麦氏单位的待检菌液涂抹于,MH,琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上贴头孢他啶,(,Ceftazidime,CAZ,),、头孢噻肟,(,Cefotaxime,CTX,),、头孢曲松,(,Ceftriaxone,CRO,),、氨曲南,(,Aztreonam,ATM,),、头孢泊肟,(,Cefprozil,CPD,),纸片，置,35,过夜培养，若抑菌环直径,CAZ22mm,、,CTX27mm,、,CRO25mm,、,ATM27mm,、,CPD22mm,时可疑为产,ESBLs,菌株。,双纸片增效法（确认试验）将,0.5,麦氏单位的待检菌液涂抹于,MH,琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上分别贴,头孢他啶,/,克拉维酸,、,头孢噻肟,/,克拉维酸、,头孢曲松,/,克拉维酸、,氨曲南,/,克拉维酸、,头孢泊肟,/,克拉维酸纸片,，置,35,过夜培养后量取抑菌环直径，与单纸片平皿对照，若加克拉维酸纸片较未加克拉维酸纸片抑菌环直径,5mm,，即为,ESBL,阳性。,3,临床意义,产,ESBL,克雷伯菌和大肠埃希,菌不论其体外药物敏感试验结果如何，,对青霉素、头孢菌素和氨曲南治疗无,效。,第五节 抗分枝杆菌药物敏感性试验,一、抗分枝杆菌药物,第一线药物为异烟肼、利福平、吡酸胺、,乙胺丁醇和链霉素；,第二线药物包括对氨基水杨酸、乙硫异,烟胺、环丝氨酸、卷曲霉素、卡那,霉素、丁胺卡那霉素和利福布丁。,二、结核分枝杆菌和缓慢生长分枝杆菌体外抑菌试验,（一）结核分枝杆菌体外药敏试验指征,首次分离的分枝杆菌需做药敏试验，有助于合理用药和监测药物敏感性。,另外经过三个月正规治疗，标本分离培养仍为阳性患者，或感染的严重疾患（如播散性结核病和结核性脑膜炎）以及来自高耐药流行区的患者，均须做体外药敏试验。,1,培养基,Middlebrook7H10,琼脂添加油,酸、白蛋白、葡聚精触酶是慢生菌比例,法的推荐培养基；,2,药敏试验药物 抗菌药物直接来自厂商，,不能用治疗的抗结核药物作为试验用,药。药物原液浓度至少为,1000g/ml,，,20,贮存期,6,个月。,3,细菌接种,直接,比例,法药敏试验采用涂片阳性患者,标本；接种物是充分消化、无杂菌污染,的标本,接种菌液的稀释方法如下：,抗酸染色（,1000 ,）未见细菌，荧光染,色（,450,）,25,，菌液不稀释。抗酸染,色（,1000,）,l,10,，,荧光染色（,450,）,25,250,，菌液稀释或,10,1,，,10,2,。,观察含药琼脂格细菌生长情况用以,4,表示：（：,50,100,个菌落；,2,：,100,200,个菌落；,3,：,200,500,个菌落；,4, ：,500,个以上菌落）。若测试菌生长,数大于对照格菌落数,1,，即判读为耐药菌。,6,质量控制,结核分枝杆菌,H37RV ATCC 27294,为一线、,二线药的敏感质控菌株；,H37RV ATCC35820,为链霉素耐药质控菌株；,H37RV ATCC35822,为异烟耐药质控菌株；,H37RV ATCC35826,为环丝氨酸耐药质控菌株；,H37RV ATCC35827,为卡那霉素耐药质控菌株；,三、快速生长分枝杆菌体外药敏试验,快速生长分枝杆菌是在合适的固体培养,基上孵育,5,7,天内能肉眼可见细菌菌落生长。,人类感染密切相关的有,3,种：偶发分枝杆菌、,龟分枝杆菌、龟分枝亚种和脓肿亚种。,药物敏感试验,操作方法基本同需氧和兼,性厌氧菌。,第六节 厌氧菌体外抑菌试验,由于厌氧菌感染系内源性感染，厌氧,菌药物敏感性稳定，一般不做体外药,敏试验。,下述情况应考虑药敏试验：,明确厌,氧菌引起的严重感染；,已确证的厌,氧菌感染，经验性的选药治疗未能奏,效；需长期用药的厌氧菌感染。,厌氧菌体外药敏试验的基本原理和方,法与需氧菌相同，只是在培养基、操,作环境和培养条件等应根据厌氧菌的,特定需要变动。,培养基为布氏血琼脂,再加人补充剂,5g/ml,氯化血红素,5,脱纤维羊,1g/ml,Vit,K,。,厌氧,孵育条件 ，质控菌株为脆弱类杆菌,ATCC25285,。,第七节 抗真菌药物敏感性试验,一、抗真菌药物,分成三类：,多烯类抗生素,如两性霉素,B,、,制,霉菌素、曲古霉素等；,毗咯类,包括酮康唑、伊曲康唑、,氟康唑、克霉唑、益康唑等；,其他类,如氟胞嘧啶。,二、抗真菌药物敏感性试验,操作同抗菌药物敏感性试验，原则为：,提供两种以上有相当活性的抗,真菌药物的可信测量方法；,和体内的活性具有相关性，可,预测治疗的效果；,可用来监控敏感群体菌株耐药,性发生；,可预期研究新药的潜在治疗效能。,抗酵母菌的药物敏感性试验,1,培养基 含谷氨酸胺和,PH,指示剂、,不含碳酸氢钠，,RPMI 1640,为试,验用的培养基。,2.,药物原液配制 来自药厂，不能,使用临床应用的药物，原液,10,倍,于最高试验浓度，,60,贮存。,3,接种菌液制备 沙氏琼脂培养基,35,孵育,24h,传代两次，保证纯种，以,RPMll640,稀释成,210,3,CFU,ml,。,药,液对倍稀释为试验时用量。,4.,试验时应有生长对照和阴性对照。,5.,结果判断 观察各管（孔）生长情,况。二性霉素,B,的,MIC,为抑制测试菌,肉眼可见生长的最低药物浓度。,5FC,和吡咯类通常采用,80,MIC,判断标准。,6.,质量控制 采用标准菌株作为每次测,定质控菌株，其,MIC,应在预期值范围,内（,g/ml,）。,