实验一 鸡胚接种

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验一 鸡胚接种,一、实验目的,了解鸡胚接种的优缺点。,掌握鸡胚接种病毒,操作方法。,鸡胚用于病毒培养的优缺点,（一）优点,1,、组织分化程度低,2,、可选择不同的日龄和接种途径,3,、病毒易于增殖,4,、感染病毒的组织和液体中含大量病毒,5,、容易采集和处理,6,、来源充足,7,、设备和操作简便易行,（二）缺点,1,、胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒,2,、母源抗体,3,、许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针,二、鸡胚的结构与功能,1,、,卵壳,上有细孔，进行气体交换,2,、,壳膜,使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。,3,、,气室,呼吸和调节压力,4,、,绒毛尿囊膜,起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。,5,、,尿囊腔,胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第,12-13,天后，尿囊液开始变得混浊。,6,、,羊膜与羊膜腔,其中盛有羊水，胎体浸泡于其中,7,、,卵黄,在胚胎发育早期供给鸡胚营养。,8,、,卵白,在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。,接种途径,1,、绒毛尿囊膜接种,2,、尿囊腔接种,3,、卵黄囊接种,4,、静脉接种 蓝舌病毒,5,、羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒,6,、脑内接种 狂犬病毒,7,、眼球接种,1,、鸡胚,9-11,日龄,2,、病毒 新城疫病毒,3,、,照蛋灯,4,、打孔器,5,、石蜡,6,、注射器,7,、蛋座,8,、酒精棉球、碘酊棉球,三、实验材料,四、,鸡胚接种方法,实验前准备,1,、用检卵灯检查鸡胚活力。,2,、用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。,3,、对鸡胚进行消毒。,（一）卵黄囊接种法,主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。,方法一：,1,）,取,6-8,日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上,(,大头向上,)2,）,用碘酊和酒精消毒气室端,3,）,用钢锥在气室中央锥一小孔,4,）,用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入,3cm,，注入,0.1-0.5ml,病毒液。,5,）,用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，每天翻卵,1-2,次，,24h,内死亡者废弃。,方法二：,1,）,2,）同一,3,）将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。在卵长径的,1/2,处用碘酊和酒精消毒。,4,）,用钢锥打一小孔，将针头刺入约,1.5cm,，注入病毒液,0.1-0.5ml,。,5,）,用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，,24h,内死亡者废弃。,（二）绒毛尿囊膜接种,主要用于痘,V,和疱疹,V,的分离和增殖。,方法一：,1,）,取,10-12,日龄鸡胚，画出气室部，消毒,2,）,在气室端的卵壳上开一,1.5,1.5cm,的口,3,）,用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜。,4,）,滴入接种物。,5,）,用胶布或透明胶纸封闭切口。,方法二：（要做人工气室）,1,、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约,3-4mm,的烤焦圈。,2,、用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳，造成卵窗。,3,、在气室端中央钻一个小孔。,4,、,用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。,5,、,用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入。,6,、用,1ml,注射器滴,2-3,滴接种物于绒毛尿囊膜上。,7,、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用石蜡密封。,8,、,胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上。,（三）,尿囊腔接种,主要用于正粘,V,和副粘,V,，,如流感,V,、,新城疫,V,的分离和增殖。,1,、,选用,10-11,日龄的鸡胚，画出气室和胚位,2,、,在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒,3,、,用钢锥穿一小孔,4,、,将注射器沿小孔插入,0.5-1.0cm,，,注入,0.1-0.2ml,接种物,5,、,用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，,24h,内死亡者废弃。,五、新城疫病毒接种鸡胚后病变,1,、鸡胚停止生长。,2,、全身出血（头颈部，背部等）。,3,、尿囊液增量。,4,、病毒经尿囊腔接种后,36h,，最高滴度可达,10,7,个鸡胚致死量。,5,、鸡胚死亡（病毒接种量大）。,六、收毒,收毒前将鸡胚直立放置于,4,冰箱半小时以上，冻死胚胎，防止出血。 根据接种途径的不同，收获相应的材料,1,、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜,2,、尿囊腔接种 收获尿囊液（,58ml,）,3,、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体,4,、羊膜腔接种 收获羊水（,0.51ml,）,七、实验报告,（一）、实验目的,（二）、主要实验步骤,（三）、实验结果,（四）、讨论与分析,