总糖和还原糖的测定

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三 总糖和还原糖的测定,3,5二硝基水杨酸(,DNS),法,1,一、目 的,掌握还原糖和总糖的测定原理,掌握分光光度计的使用,2,二、原 理,还原糖,：指含有自由醛基或酮基的糖类,单糖,:,不能被水解成更小分子的糖,单糖都是还原糖,葡萄糖,果糖,寡糖,:,最重要的是双糖：,Maltose（,麦芽糖 ）,Sucrose（,蔗糖）,Lactose（,乳糖 ） 但,Sucrose,不是还原糖,多糖,:,能水解成多个单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素,3,酸水解法,使没有还原性的双糖与多糖，彻底水解成具有还原性的单糖，再进行测定，这样就可以求样品中总糖的含量。,4,测定方法比色法,黄色,棕红色,5,首先制作葡萄糖标准曲线，以标准葡萄糖样品进行测定，以葡萄糖含量（,mg）,为横坐标，,OD,540,读数为纵坐标，绘制标准曲线。,待测样品的,OD,540,平均值在标准曲线上查出相应的糖含量。,6,朗伯比尔（,Lambert-Beer,）定律,朗伯比尔定律是比色分析的基本原理，这个定律是有色溶液对单色光的吸收程度与溶液及液层厚度间的定量关系。此定律是由朗伯定律和比尔定律归纳而得。,A,或,D,=I,0,/I,A,或,D,光吸收或光密,度,I,0,入射光强度,I ,透射光强度,7,三、试剂和器材,试剂：,DNS,试剂,葡萄糖标准溶液 ；,6,M HCl；,碘碘化钾溶液；,6,M NaOH；,0.1% 酚酞指示剂。,器材,容量瓶,试管，移液管，量筒，胶头滴管，漏斗,50,水浴，,沸水浴，分光光度计等。,材料,藕粉，玉米淀粉,8,四、操作步骤,1.,葡萄糖标准曲线制作,2.,还原糖的提取,藕粉,改为称1,.0,克,，,50,水浴,20min,浸出，水浴锅中进行,3.,总糖的水解及提取,玉米淀粉,测总糖，沸水浴,20min,酸水解，电磁炉中进行,4.,样品含糖量的,测定,9,五、注意事项,1.,实验安全：强酸，强碱,2.,总糖的水解及提取是,两次,定容，,中和至微红色,3.,先把样品,混匀,后测定,OD,540,值（,封口膜,）,4.,标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色,5.样品测定：每个样平行做三个试管，空白不做，用标准曲线中的0号管。,10,六、分光光度计的使用,1).,电源打开，用波长设置键，设置所需的分析波长，,预热,20,分钟；,2).,比色皿有光面和毛面，手接触毛面；,3).,待测液倒至比色皿,3/4,高度,，切忌太满！,4).,空白对照放在比色皿槽的第一槽位；测定时浓度,由低到高,；,5).,将空白对照推（拉,),入光路中，按,键，此时显示器显示的“,BLA”,直至显示“,100.0”,为止。,6).,将被测样品推（拉）入光路，这时便可从显示器上得到被测样品的透射比或吸光度值。样品,读数三遍,，取平均值。,7).,使用分光光度计时带,测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。,11,移液器的使用手法，两档位,吸液,放液,12,1.,比色时为什么要设计空白管？,2.,比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果，这两种方法各有何优点？,八、思考题,13,值日生,：每间教室第,5,、,6,组同学,职责,：实验台面物品整理归位，水池边的蓝色垃圾桶清理干净，教室里所用仪器电源插销拔掉，关窗，最后把垃圾袋丢到厕所外的垃圾桶里。,14,重要通知,下周实验,维生素,C,的定量测定,为,开放、,设计型实验，撰写小论文,，实验主题由各组自己拟定，可以以温度为主题，也可以以浸泡时间为主题，等等,请各组提前设计实验主题，自己准备特需实验水果、蔬菜（,颜色浅,），实验室提供卷心菜和桔子。,15,