3-方法的选择和建立资料

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,50,|,Analysis of Biopharmaceuticals,Cha-3,方法的选择、建立和认证,3.1 分析质量控制,3.1.1 标准物质和标准分析方法,(1)标准分类,1988年中华人民共和国标准化法 ,国家标准,行业标准,地方标准,企业标准,（2）标准物质,是一种或多种经确定了高稳定性的物理、化学和计量学特性，并经正式批准可作为标准使用，以便用来校准测量仪器、评价方法或给材料赋值的物质或材料。,标准物质的作用,校准仪器 分析标准,验证方法 分析质量控制,标准物质分类,基准标准物质 ultimate standard,标准参考物质standard reference materail,(3)标准方法,权威机构审批和发布,我国的国标法,分析质量控制,把分析误差控制在允许范围内，保证分析结果的准确性和精确性,实验室内部质量控制,（1）空白实验:纯水代替试液，其他步骤一样。,（2）标准曲线:计算标准曲线的直线回归方程和相关系数,（3）质量控制图,精密度控制图,上、下警告限,上、下控制限,准确度控制图 ：利用回收率及其标准偏差进行计算,x,2S,x,3S,3.2 计量认证（略）,为社会提供公正数据的产品检验机构，必须经省级以上人民政府计量行政部门对其计量检定、测试能力和可靠性考核合格。,3.3 药物分析方法的选择和建立,了解被测组分的性质，,查阅文献、参考书,现有的科研条件,选择适当的方法,试验方案的确定和试验准备,试验的开展和试验方案的修正,试验数据的整理,论文的形成,方法,分析方法,免疫学方法,液质联用,气相色谱,高效液相色谱,气质联用,3.4 药物分析方法的验证和质量控制,确定药物或其代谢产物的方法必,须具备以下特点,:,灵敏度,精确性,特异性,准确性,灵敏度,检测方法能够定量的最小药物浓度必须大于药物在体内最大浓度的10%,.,最小定量值,(LOQ): 1/10,最大浓度,(Cmax),特异性,检测方法必须能将检测物和同时服用的其他混合物区分开,3.4.1,药物分析方法的验证与质量控制,特异性,检出限,(LOD),定量限,(LOQ),线性相关,检测范围,精确性,准确性,稳定性,1,、验证,-,特异性,特异性研究应该在化验分析阶段展开,必须清楚的阐述特异性过程,特异性必须用结构近似的对照物加以验证,结果的选择是基于科学的判断,验证,-,特异性,2,、验证,-,检出限,(LOD),（三）检测限（limit of detection， LOD）,检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。,是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。,2,、验证,-,检出限,(LOD),各种可能的方法,感官评价,被测物可被可靠检测出的最低限度,信噪比,3:1,可以接受,斜率和回应值标准偏差,LOD = 3.3,/ S,=,回应值标准偏差,S =,标定曲线斜率,3,、验证,-,最小定量值,(LOQ),根据信噪比,可信的定量信噪比为,10:1,根据回应值和斜率,LOQ = 10,/ S,=,回应值标准偏差,S =,标定曲线斜率,验证,-LOD/LOQ,推荐数据,:,LOD , LOQ,和确定,LOQ,的方法都应该被说明,各种限值的确定必须建立是在适当的受试样本数量的基础上得出,验证,-LOD,LOQ, LOD,和,SNR,定量限,(LOQ),检出限 (LOD),信噪比 (SNR),干扰线值,峰,ALOD,峰,BLOQ,基线,验证,4,、验证,-,线性,应该在研究阶段,通过所期望的浓度范围来评价,至少应该在浓度范围内选择,5,组浓度进行试验,相关系数, y-,回归斜率和偏差平方和必须准确得出,分析回归线偏差得到线性相关,验证,-,线性,5,、验证,-,范围,指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。,在线性研究中得到特异性范围,此范围应该含盖某些研究中可能出现的特殊数值,范围应该在科学准确的信息指导下进行划分,范围的确定可因测定项目不同而有不同要求：,含量测定范围为80%-120%；含量均匀度范围为70%-130%；杂质测定应为被测杂质限度的50%-120%；溶出度应为测定范围的20%。,6,、验证,-,精确性,（precision）,精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。,用偏差（,d,）、标准偏差(,SD,)、相对标准偏差(,RSD,)（变异系数，,CV,）表示。,通过定量受试物样品峰值来评价试验的精确度,精确性必须在至少,3,组试验浓度下进行验证,(,高,/,中,/,低,),根据试验样品数量和可信区间,精确度应该以回收百分率的形式报出,偏差（,d,）：测量值与平均值之差,允许差：容量分析（中和法、非水滴定法、银量法、络合滴定法、重氮化法、氧化还原法）0.3%；重量法 0.5%；氧瓶燃烧法 0.5%；仪器分析 3%、凯氏定氮法 1%,（A-平均值）/平均值 100%,相对偏差,标准（偏）差（SD或S）,相对标准（偏）差（RSD），也称变异系数（,CV,）,验证,-,精确性,LQC,MQC,HQC,7,、验证,-,准确性,可重复性,浓度含盖了特异性范围,试验中各参与要素的准确性,如日期,受试物,设备,可重现性,判断其分析是否发生在特定的时期,数据提供,标准,偏差系数和可信区间等数据都应该和准确度附在一起,准确度（accuracy）,准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。,测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。,回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M,加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M,数据要求,规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。,原料药,可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。,制剂,可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。,如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。,中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在95105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90110%范围内。RSD一般在2%以内。,验证,-,精确性,/,准确性,精确性,/,准确性,:,验证,-,精确性,/,准确性,1,天内,:,天,:,验证,-,精确性,/,准确性,精确性,/,准确性 校准因素,:,验证,-,精确性,/,准确性,FDA,精确性,同一试验,不同试验间,正常,: 15%,最低定量限: 20%,准确性,同一试验,不同试验间,正常,: 15%,最低定量限: 99.5)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于,0.2,；进行回收率试验。,回收率一般在99.7100.3之间,。,2.,UV法,：,用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于,1,。制剂的测定，回收率一般应在,98102,之间。,线性：吸光度A一般在0.20.7，浓度点n5。用浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应达到0.9999(n5)，方程的截距应近于零。,3. HPLC法：要求,RSD2，,回收率,98102,之间。,线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点n应为57，用浓度c对峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，r应大于0.999，截距应趋于零。,3.4.3,生物药物分析方法验证报告,必须以文字报告形式描述详细的生物学分析方法,所有用于产生结果的试验都必须在报告中阐述,GLP,符合,/,检查,/,审查,报告,以,下数据必须在报告中提供,:,1),作者及作者间关系,2),研究过程实施所在地,3),报告发表日期,4),报告识别码,报告打印纸最好使用申请者或分析实施单位专用纸张,报告,* 受试样品为混合物,(,有效成分,有效代谢产物和,/,或数量较大的代谢产物,) *,样品的预处理和预提取,*,分析方法使用,*,分析方法的来源,-,相关文献,-,分析方法改进,*,分析方法验证,检出限,稳定性,重现性,-,线性,准确性,精确性,选择性,灵敏性,-,当天差异性,每个单独的测量均需在报告中写出,报告,受试样品单独出具报告,*,验证报告参考文献,*,样品处理,*,分析过程建立,*,验证结果研究,*,再分析,*,色谱图,/,层析图,*,结果鉴定,每个单独的测量均需在报告中写出,!,