中药化学实验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,中药化学实验,实验一 薄层板的制备、活度测定及薄层层析、纸层析的应用,1,1.,掌握薄层层析（,TLC,）、纸层析（,PC,）的原理,2.,掌握薄层层析板的制备及薄层层析、纸层析操作的基本方法；,一、实验目的要求,2,薄层色谱（,TLC,）,薄层色谱,(Thin Layer Chromatography),又称薄层层析，属于,固液吸附色谱,。,3,薄层色谱（,TLC,）基本原理,吸附剂对不同物质吸附能力不同；展开剂对不同物质溶解度不同，通过展开达到分离的目的。即混合液点在薄层板上时，吸附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开时，因薄层上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶解后随着不断上升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又被吸附，接着又溶解、解吸，使斑点不断上移。而在上升过程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，从而达到“差速迁移”，当展开至一定距离后，就可达到分离混合物的目的。斑点上升的高度用,Rf,表示：,Rf=,原点至斑点中心的距离,/,原点至溶剂前沿的距离, Rf1,展开剂极性越大，溶质,Rf,值越大（即爬的越高），但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相容，要使用多元溶剂体系。,4,薄层色谱（,TLC,）的优点,是近年来发展起来的一种,微量、快速而简单,的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。,分离：,一方面适用于少量样品（几到几十微克，甚至,0.01g,）的分离；,精制：,另一方面若在制作薄层板时，,把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达,500mg,的样品,。因此又可用来精制样品。,跟踪化学反应：,在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。,此法 特别适用于 挥发性较小 或在 较高温度 易发生变化 而不能用 气相色谱分析的物质。,5,薄层色谱是在被洗涤干净的,玻板,（,103cm,左右）上均匀的涂一层,吸附剂,或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管或微量注射器滴加于离薄层板一端约,1cm,处的起始线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的,展开槽,内，浸入深度为,0.5cm,。待展开剂前沿离顶端约,1cm,附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂或在紫外灯下显色。,6,层析条件三要素,被分离物质的极性,展开剂的极性（固定相和流动相）,吸附剂的活度 （载体或担体如：氧化铝，硅藻土，纤维素等）,7,二、薄层层析、纸层析概述,1.,薄层层析,（,Thin Layer Chromatography,TLC,）,使用材料：,薄层板与吸附剂（氧化铝、硅胶、聚酰胺等）,涂布器、点样器材、展开箱、显色与检测仪器,分离原理：,吸附色谱、分配色谱,2.,纸层析,（,Paper Chromatography,PC,）,载体：,滤纸纤维；,固定相：,水；,流动相：,有机溶剂,8,1.,混合单糖纸层析鉴别,1,）滤纸载体的制备：,取圆形滤纸一张，用剪刀在其圆心处挖一小洞，另取一滤纸捻插入其中。,2,）样品：,5%,葡萄糖水溶液、,5%,鼠李糖水溶液、二者混合水溶液,3,）展开剂：,正丁醇,-,冰醋酸,-,水（,4:1:1,）,4,）显色剂：,邻苯二甲酸,-,苯胺试剂，喷雾后于,105 ,加热,10,分钟,三、实验操作步骤及注意事项,9,2.,氧化铝薄层涂布,(,软板）,取表面光滑，直径均匀的玻璃棒一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在,玻璃棒,两端套上厚度为,0.3-1mm,的塑料圈或金属环，将氧化铝粉末,向前推,，使其均匀铺在选定的载板上。,2,4,1,3,10,3.,硅胶,G,薄层涂布（硬板）,硅胶：水（,1,：,3,）于研钵中研磨均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上，均匀涂布成,0.25-0.5,mm,厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，水平放置，室温晾干，于烘箱中,110,烘干活化,1-2,小时，冷后,贮于干燥器内,备用。,11,4.,氧化铝活度测定,1,）染料样品：,偶氮苯、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红,薄 层 板：,已铺制好的,氧化铝软板,展 开 剂：,四氯化碳,(,用量浸没起始线,0.5cm,),点 样 量：,0.02ml(,直径不大于,2-3mm),（点样毛细管）,2,）测 定：,四种染料的,Rf,值，与氧化铝活度表比较，确定此氧化铝活度级别,12,样点直径,不大于,3mm,斑点随着溶剂上行展开是要,扩散,的。初始斑点过大,展开后会与其他斑点,重合,影响实验准确性。,对于多成分物质,斑点会重叠的很严重,还会产生,拖尾,影响实验精度,。,13,氧化铝活度测定结果表,14,