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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,一、菌种的衰退与复壮的概念,1.衰退（degeneration）,：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。,衰退的原因：,基因突变，分离现象。,常见的衰退现象：,菌落和细胞形态的改变；,生长速度缓慢，产孢子越来越少；,抵抗力、抗不良环境能力减弱等。,代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；,第四节 菌种的衰退、复壮及保藏,1,2、 菌种的复壮,（rejuvenation,）,：使衰退的菌种恢复原来优良性状。,狭义的复壮,是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；,广义的复壮,是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种,菌种的复壮措施：,纯种分离：,（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等,）。 通过寄主体内生长进行复壮,（,如,Bacillus thuringiensis,的复壮）,；,淘汰已衰退的个体,（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。,采用有效的菌种保藏方法。,2,3、防止菌种衰退的方法：,控制传代次数,（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5x10,-4,，自发突变的频率为10,-8,10,-9,，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的数）,；,选择合适的培养条件； 采用不同类型的细胞进行传代,（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）,； 采用有效的菌种保藏方法。,3,二、菌种保藏：,1. 目的,：存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种,2. 原理：,选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）,4,菌,连续在培养基上（内）移种,种,生活态 传代培养保藏法,连续在活宿主上（内）移种,保,固体斜面,藏,湿法 半固体琼脂柱,方,休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）,法,干法 藏在玻璃管内,吸附在合适的载体上,3.菌种保藏的方法,5,3、方法：,低温保藏法,方法：菌种管置4冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。,石蜡油低温保藏,法：,橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。,干燥保藏法,将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。,6,真空冷冻干燥法,加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。,适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。,液氮超低温保藏法,将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196）。,适用于各种微生物的较理想的保藏方法。,7,菌种保藏机构的任务,：,广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。,菌种保藏机构,：,中国微生物菌种保藏委员会(,CCCCM),美国的典型菌种保藏中心(,ATCC),英国国家典型菌种保藏所（,NCTC）,法国里昂巴斯德研究所（,IPL）,国内外菌种保藏机构：,8,干法保藏菌种的方法,滴入小试管（在放入大试管干燥器中）,藏在玻璃管内 封入安培瓶,菌液直接真空干燥法（,L-干燥,法,）,冷冻真空干燥法,细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒）,球块状载体（硅胶、瓷球）,合适的载体 有机基质（曲料、麦粒）,滤纸片,薄片状载体 明胶小片,（滴在蜡纸板上干燥而成）,血清蛋白小片（乙烯薄膜 ）,9,几种常用菌种保藏方法的比较,方法名称,主要措施,适宜菌种,保藏期,评价,冰箱保藏法（斜面）,冰箱保藏法（半固体）,石蜡油封藏法*,沙土保藏法,冷冻干燥法,低温,低温,低温、缺氧,干燥、无营养,干燥、无氧、低温、有保护剂,各大类,细菌、酵母菌,各大类*,产孢子微生物,各大类,36月,612月,12年,110年,515年以上,简便,简便,简便,简便有效,简便有效,10,
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