不规则抗体筛选

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗体筛选检查,1,临床输血技术规范,明确规定部分病人应做“抗体筛选”检测，第四章第17条：“凡遇以下情况,必须,按全国临床检验操作规程有关规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不合的； 2、对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。,2,为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查,1、,目前已知红细胞有26个抗原系统,（确认21个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，检测抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引发的溶血,。,3,2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。,（理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。）,3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。,4,抗体筛选检查,一、什么叫“抗体筛选”检查,1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗N、抗M、jk-抗体。,2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选”阳性。,5,抗体筛选技术要求,尽可能多的检测出有临床意义的抗体。,尽可能少的检测出无临床意义的抗体。,尽可能快的完成抗体检测,6,方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况,盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法会检查出无临床意义的抗体，如,冷凝集素,抗I及抗IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。,低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间少（35分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。,间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰,。缺点：耗时间长，步骤多。,7,试剂,抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#）,试剂红细胞必须含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb,LIM 液、Polybrene及重悬液,抗球蛋白血清,受检者血清,受检者5%红细胞悬液,8,盐水法,原理：,盐水介质中的红细胞膜上的抗原与相应抗体结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集块,。,9,实验步骤,取4支小试管，按表标记及加入相应试剂,。,1# 2# 3# 自 身,受检者血清,2滴 2滴 2滴 2滴,筛选用红细胞悬液,1# 1滴,筛选用红细胞悬液,2# 1滴,筛选用红细胞悬液,3# 1滴,受检者5%红细胞悬,液,1滴,混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前,10,注意事项,标本编号清楚！,试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。,加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加，少加,以免引起前带和后带效应,转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。,11,Polybrene法,原理：,聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性,凝聚,，这种凝聚是可逆的。当红细胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发生,凝集,，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而真正的凝集不消失。(见图),.,12,实验步骤,取4支小试管，按表标记及加入相应试剂,。,1# 2# 3#,自 身,受检者血清,2滴,2滴 2滴 2滴,筛选用红细胞悬液1#,1滴,筛选用红细胞悬液2#,1滴,筛选用红细胞悬液3#,1滴,受检者5%红细胞悬液,1滴,LIM液 （12滴） 0.6ml 0.6ml 0.6ml 0.6ml,混匀后室温静置1分钟。然后各加入Polybrene试剂1滴，混匀后3400rpm 离心 15秒，轻扣观察有无凝集。,向试管中各加入重悬液 1滴，轻摇观察凝集是否散开,。,13,注意事项,标本尽可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝素是大分子的阴离子物质,可以中和凝聚胺的阳离子，,导致假阴性。,在接收标本时，要询问抽血时是否正在输液或者刚输过液，如果有这种情况则要咨询临床医师液体中是否含有止血敏 ，,KCL，VitC,，这些药品会干扰聚凝胺的作用导致假阴性，引起事故。,加血清量不能多加，否则会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏效果。,加聚凝胺，只需加1滴，多加可能导致重悬液无法充分解散非特异性凝集，出现假凝集，导致假阳性。,看结果：阴性结果-红细胞迅速散开，并在1分钟内完全散开。可在镜下观察。,阳性结果-红细胞不完全散开，弱凝集可能在30分钟内明显减弱或消失，因此以立即看的结果为准。,转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。,14,抗球蛋白试验,原理：,抗体分子和补体成分都是球蛋白，用这些球蛋白免疫动物使之产生抗体即抗人球蛋白，抗球蛋白试剂可以和致敏在红细胞上的人球蛋白（抗体分子和补体分子）反应，通过架桥作用使致敏红细胞出现凝集。见图,15,抗球蛋白试验,抗球蛋白,16,实验步骤,1# 2# 3# 自 身,受检者血清,2滴 2滴 2滴 2滴,筛选用红细胞悬液1#,1滴,筛选用红细胞悬液2#,1滴,筛选用红细胞悬液3#,1滴,受检者5%红细胞悬液,1滴,混匀后置37水浴30分钟后，用生理盐水洗涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水，然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以,3400rpm,离心15秒钟，轻摇，观察结果,。,17,结果意义,筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的抗体,+ ,同种抗体,+ +,自身抗体，或自身抗,体和同种抗体同时存,在, +,自身抗体,18,注意事项,必须进行,间接,抗人球蛋白试验。,必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。,观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转速、。,观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起事故。,若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生儿溶血病等疾病),建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法,19,抗体特异性鉴定（了解）,使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞一般由8-16种含有不同抗原的O型红细胞配套组成，根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。,实验方法和抗体筛选实验相同,20,二 实验原理,血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。 见下表,谢谢,21,