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单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,大家好,第五章,蛋白质的合成，转运和加工,第一节 氨基酰-tRNA的形成及核糖体的作用,位点,一. 氨基酰tRNA分子的形成,氨基酸的活化,活化：,aa + ATP + E*,氨基酰-AMP-E + PPi,转移：,氨基酰-AMP-E +,tRNA,aa -,tRNA+,AMP +E,二氨酰tRNA 合成酶的鉴别功能,动力学校对,（Kinetic profreading,）,化学校对,（Chemical proofreading）,三 核糖体的作用位点,A位点,（或称 acceptor site）可以进入,氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA)。,P,位点,(或称供位，donor site) 是被肽基,酰-tRNA(peptidyl-tRNA)所占据。,(3)E位点(Exit site) 脱酰tRNA(deacylated-,tRNA)短暂地占据。,第二节 肽链的合成,一.在细菌中翻译的起始,IF-3是30S亚基与mRNA起始位点的特,异结合所必须的。,IF-2是特异地和起始tRNA结合并把它,带到起始复合体中。,IF-1仅作为完整的起始复合物的一部分,与30S亚基结合。它结合在A位能阻止氨酰tRNA的进入。它的定位还阻止30S和50S的结合。,2. 起始复合物的形成,(1) IF-3和核糖体30S rRNA结合,使16S RNA,和mRNA的S-D顺序结合,a.使30S 保持游离,b.形成,起始复合体,I,(2) IF-2 + GTP +,氨酰甲硫氨酸 中间复合体。,(3) 50S+30S 复合体III，释放IF-1,IF-2。,原核生物翻译起始因子,二. 起始tRNA的特点,翻译时的第一个密码子是怎样被识别的呢？,(一)小亚基上16SrRNA3端的六核苷酸(3-UCCUCC-5） 和Shine-Dalgarno顺序（5-AAACAGGAGG-3）互补，相互结合，使下游的AUG起始密码子定位在P位上。,(二) 核糖体结合位点也含有一个信号,起始密码子,（initiation codon）,AUG,。,起始和延伸Met-tRNAs的区别,两种tRNA本身有差别；,氨基酸的状态不同。,fMet-tRNA与Met-tRNA有什么不同？, Met-tRNA,m,Met,在受体臂末端的一对碱基是GC，在fMet-tRNA,f,Met,是CA，C可以和起始因子IF-2结合。,tRNA,f,Met,在反密码子环的茎上有3对G-C,若发生突变将会阻止其进入P位点。,tRNA,f,Met,的反密码子环上的是A，tRNA,m,Met,是烷基化腺嘌呤。,tRNA,f,Met,TC环端是A，tRNAm,Met,的相应位置是G，作用不清。,三真核生物蛋白质合成的起始,四. 起始时mRNA和rRNA的碱基配对,(一) 原核30S小亚基和S-D顺序的结合,在细菌中被核糖体保护的DNA区域长35-40碱基长。有2个共同的特点:,含有起始密码子AUG；,有一个顺序和16SrRNA近3,端的顺序互补。,(二) 真核合成起始时小亚基和 起始位点的结合,真核细胞质中的核糖体并不在编码区开始处直接和起始位点相结合。,首先识别5,端甲基化的帽子结构。,内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site, IERS),A,最适合的邻接顺序是,GCC CC,AUG,G,G,称为,Kozak,顺序,第二节 肽链合成的延伸和终止,一,肽链合成的延伸,肽链的延伸可分为三个阶段：,进位反应,：主要是密码子-反密码子的,识别；,转位反应,：涉及肽链的形成；,移位反应,：tRNA和mRNA相对核糖体的移动。,(一 ),进位反应,1. 延伸因子（elongation factor）,(1) 当GTP存在时，EF-Tu呈活性状态。,(2) 当GTP水解成GDP时，EF-Tu便失活。,(3) GDP被GTP取代后，它又恢复活性。,翻译的延伸,表15-4原核生物蛋白质合成的延伸因子,因子 基因 功能 抑制剂,EF-Tu,tufA,tufB,与氨基酰tRNA 黄色霉素,及GTP结合,EF-Ts,tsr,结合EF-Tu，,取代GDP,EF-G 结合核糖体 梭链孢酸,和GTP,真核生物翻译的延伸,二肽链合成的终止,终止密码,UAA,UGA,UAG,；,在,E.coli,中,释放因子,（release factors（RF）;,RF1识别UAA；RF2识别UGA和UAG。,这两种因子作用于A位点,且需要P位点的,肽酰-tRNA存在。,终止反应是释放因子识别终止位点并与之结合，激活,肽基转移酶,，水解了P位点上多肽与tRNA之间 的键，然后释放了多肽和tRNA。,在真核系统中只有一种释放因子eEF可识别3种终止密码子。,
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