紫外分光光度计课件

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,双光束紫外分光光度计的使用,双光束紫外分光光度计的使用,1,小组组长：,小组成员：,实训时间：第17周-第19周,小组组长：,2,目录,仪器介绍,仪器的基本原理,仪器的基本组成部件,仪器的主要特点,仪器的操作步骤以及注意事项,利用紫外分光光度法测定水中苯酚的含量,数据的处理,目录仪器介绍,3,仪器的介绍,紫外可见分光光度计是一种历史悠久，覆盖面广，使用很多的分析仪器。在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。,我们现在介绍的这一部仪器是由北京普析通用仪器有限责任公司，它具有出色的技术指标和稳定可靠的工作特征，友好直观的显示界面，流畅的人机对话操作，成功实现了超高精度和可靠性测量的严格要求，能极大地满足最专业用户分析工作需要。,仪器的介绍紫外可见分光光度计是一种历史悠久，覆盖面广，使用很,4,双光束分光光度计的基本原理,从光源中发出的光经过单色器后被一个旋转的反射镜（即切光器）分为强度相同的两束光，分别通过参比溶液和样品溶液。利用另一个与前一个切光器同步的切光器，使两束光在不同时间交替的照在同一个检测器上，通过一个同步信号发生器对来自两个光束的信号加以比较，并将两个信号的比值经过对后转换为相应的吸光度值。,如下图所示：,双光束分光光度计的基本原理 从光源中发出的光经过单色,5,紫外分光光度计课件,6,仪器的基本组成部件,紫外分光光度计都是由光源、单色器、样品吸收池、检测器和信号显示系统五大部件组成,光源,单色器,样品吸收池,检测器,信号显示系统,仪器的基本组成部件紫外分光光度计都是由光源、单色器、样品吸收,7,光源,光源的作用是供给符合要求的入射光。分光光度计对光源的要求是：在使用波长范围内提供连续的光谱，光强应足够大，有良好的稳定性，使用寿命长。光源一般分为可见光光源和紫外光光源。,可见光光源 常用钨丝灯，并且需要采用稳压电源供电或者是12V的直流电供电。,紫外光光源 此类多为气体放电光源，应用最多的是氢灯及同位素氘灯。,光源光源的作用是供给符合要求的入射光。分光光度计对光源的要求,8,单色器,单色器的作用是把光源发出的连续光谱分解成单色光，并能准确方便地“取出”所需要的某一波长的光，它是分光光度计的心脏部分。单色器主要是由狭缝、色散元件和透镜系统组成。,其中最为关键的是色散元件。它是由棱镜和反射光栅或两者的组合。,单色器单色器的作用是把光源发出的连续光谱分解成单色光，并能准,9,吸收池,吸收池又叫比色皿，是用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件。根据光学透光面的材质，吸收池有玻璃吸收池和石英吸收池两种。前者用于可见光光区测定，紫外光区则用石英吸收池。,吸收池吸收池又叫比色皿，是用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度,10,在使用吸收池的时候必须注意以下几点：拿取吸收池时，不可接触光学面；不可将光学面与硬物或赃物接触；不能再吸收池中长时间盛放含有腐蚀玻璃的物质；吸收池使用之后应立即清洗干净；不得在火焰或电炉上面进行加热或烘烤吸收池。,在使用吸收池的时候必须注意以下几点：拿取吸收池时，不可接触光,11,检测器,检测器又称接收器，其作用是对透过吸收池的光做出响应，并把它转变成电信号输出，其输出电信号大小与透过光的强度成正比。,作为检测器，对光电转化器的要求是：光电转换有恒定的函数关系，响应灵敏度要高、速度要快，噪声低、稳定性高，产生的电信号易于检测放大等。,检测器检测器又称接收器，其作用是对透过吸收池的光做出响应，并,12,信号显示器,由检测器产生的电信号，经放大等处理后，用一定方式显示出来，以便于计算和记录。,信号显示器分为两类：以检流计或微安表为指示仪表；数字显示和自动记录型装置。,数据显示装置方便、准确，避免了人为读数错误，而且还可以连续数据处理装置，能自动绘制工作曲线，计算分析结果并打印报告，实现分析自动化,信号显示器由检测器产生的电信号，经放大等处理后，用一定方式显,13,仪器的主要特点,优良的光学系统，先进的电子学系统，保证了0.015%T的低杂散光。,采用进口全息光栅，进一步降低仪器的杂散光。，使仪器分析更加准确。,双光束动态反馈比例记录测光系统保证了基线稳定性。,光栅、氘灯、光电倍增管等关键器件均用进口件，保证优良性能和长寿命。,仪器的主要特点优良的光学系统，先进的电子学系统，保证了0.0,14,独特的插座式钨灯和氘灯，换灯时免去光学调试。,有丰富的定量分析软件和光谱扫描及处理软件。,有蠕动进样器、超微量池架、恒温池架、光学积分球、镜面反射、光纤附件和比色皿系列等大量 用户可选专用附件，使仪器的应用范围大大扩展。,基于WINDOWS环境设计的UV Win中文操作软件,提供了丰富的仪器控制和操作功能，充分利用 了现代先进的计算机技术，提高工作效率。,独特的插座式钨灯和氘灯，换灯时免去光学调试。,15,仪器的操作步骤,一、开机 打开稳压电源，等5-10秒，稳压电源稳定后依次打开打印机、计算机，等待计算机正常进入到桌面后，再打开仪器主机电源。,二、仪器初始化 打开仪器主机电源后，确定样品池内没有挡光物（干燥袋或比色皿等）。双击桌面的“紫外软件”图标，（或点击“开始”菜单，选择“程序”，找到“Uvwin5紫外软件”，选择“Uvwin5紫外软件”）；等待仪器进行初始化，每一项检查“正确”后进行测量。,仪器的操作步骤一、开机 打开稳压电源，等5-10秒，,16,三、测量,1.正确放入比色皿： TU-1901仪器是双光束分光光度计，要在两个样品池内都放入空白溶液（或参比溶液）进行空白校正。然后只取出外侧的比色皿，放入测量的样品进行读数。(备注：样品池内侧的参比溶液在测量中不能取出，除非空白溶液改变或测量波长改变才拿出重新进行空白校正。),2.选择测量功能： Uvwin5紫外软件提供了丰富的测量功能，根据需要在“工作室”内选择所需要的测量方式。,三、测量,17,附：测量方式的简介,光度测量：可以做单个波长或多个波长下的吸光度（或透过率）测量。,光谱扫描：主要测量样品的图谱做定性分析，即寻找测量样品的最大吸收峰。,定量测定：主要通过测量标准样品自动建立工作曲线，来测量样品的浓度。,时间扫描：主要测量样品在一定波长下随时间的变化曲线。也称动力学测量。,附：测量方式的简介光度测量：可以做单个波长或多个波长下的吸光,18,3.设置参数 选择好测量方式后，直接按F4，（或点击“测量”，在下拉菜单中选择“参数设置”）进入参数设置界面。主要设置测量波长。设置完成后一定单击“确定”，完成设置。,4.空白校正 正确放入空白溶液后，点击“校零”（在光谱扫描功能下是“基线”）键进行空白校正。,5.读数 空白校正完成后，正确放入样品，点击“开始”键（或按F9）进行测量。,3.设置参数 选择好测量方式后，直接按F4，（或点击“,19,四、完成 测量完成后根据需要保存或打印测量数据。退出紫外程序后如果不保存数据将清除。,五、关机 一定要取出样品池内的所有比色皿，关闭Uvwin5紫外软件。,退出,紫外,操作系统后，依次关掉主机、计算机 、打印机电源。最后关闭稳压电源。,四、完成 测量完成后根据需要保存或打印测量数据。退出,20,注意事项：,本仪器位精密电子仪器，切忌带电插拔电源线及连接电缆，误操作有可能损坏仪器及计算机。,仪器电压与实验室电压相匹配（本次电源电压为220V，50HZ交流电），最好配置交流稳压器功率不小于500VA，电源盒应该有地线并保证仪器良好接地 。,所用的比色皿必须配对要清洗干净，否则会给测量带来较大的误差。,注意事项：本仪器位精密电子仪器，切忌带电插拔电源线及连接电缆,21,TU-1901双光速紫外可见分光光度计是实验室常用精密仪器，为提高仪器工作质量，及延长仪器的使用寿命，应按住那个在合适的工作场所，注意以下几点：,避开高温高湿，在室温1535度、湿度4580%的条件下使用。如果室温在30度以上，请再湿度为70%以下使用。,仪器应置于稳固的工作台上，不应该有强震动源。,室内无强电磁干扰源及有毒有害气体。,TU-1901双光速紫外可见分光光度计是实验室常用精密仪器，,22,紫外分光光度法测定水中苯酚的含量,一、实验目的,1.学习紫外分光光度法的基本原理及定量分 析方法。,2.掌握紫外-可见分光光谱仪的基本结构和一般操作。,二、实验步骤,1.苯酚标准溶液的配置,紫外分光光度法测定水中苯酚的含量一、实验目的,23,称取0.1000g分析纯苯酚，用蒸馏水溶解后转移至100mL容量瓶中定容，移取5.00mL于另一100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，置于冰箱中保存，此溶液含苯酚50ug/mL。,2.最大吸收波长的测定,移取苯酚标准溶液2.00mL于25mL容量瓶中，定容，摇匀，取适量倒入石英比色皿中，以蒸馏水为参比溶液，在波长200400nm范围类进行扫描，得到吸收曲线，由吸收曲线确定最大吸收波长。,称取0.1000g分析纯苯酚，用蒸馏水溶解后转移至,24,3. 标准曲线及样品的测定,在6个25mL容量瓶中，分别加入0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL的苯酚标准溶液，用蒸馏水定容。在max处测定各种溶液的吸光度值，同时测定含苯酚水样（调整至合适浓度且溶液澄清）的吸光度值，由仪器打印出标准曲线及样品的测定结果。,3. 标准曲线及样品的测定,25,数据处理方法,完成试验后，得到一个吸光度值A与加入量V的工作曲线，我们可以根据这个工作曲线作出苯酚的吸光度值A。,根据公式计算得出苯酚的含量。,C=A/(kb),A溶液的吸光度值；,b比色皿的宽度；,k摩尔吸光系数；（由标准溶液的吸光度和浓度求出）,数据处理方法完成试验后，得到一个吸光度值A与加入量V的工作曲,26,工作曲线图（例）,工作曲线图（例）,27,