流式细胞仪---教材课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,流式细胞仪,流式细胞仪,1.流式细胞术概述,2.流式细胞仪概述,3.流式细胞仪系统结构,4.流式细胞仪软件介绍,目 录,5.流式细胞仪其它,1.流式细胞术概述 2.流式细胞仪概述3.流式细胞仪系统结构,1.流式细胞术概述,1.流式细胞术概述,流式细胞术定义,流式细胞术发展史,流式细胞术特点,1.流式细胞术概述1.流式细胞术概述流式细胞术定义,1.流式细胞术概述,1.流式细胞术定义：,流式细胞术,(,Flow Cytometry，FCM或 FACS,)：是,利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术,。,流式细胞术是一项新型的、发展迅速的生物医学分析技术,它是集激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学以及细胞免疫荧光化学技术,、,单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术,。,1.流式细胞术概述1.流式细胞术定义：,1.流式细胞术概述,2.流式细胞术发展史：,1930年Caspersson和Thorell开始致力于细胞计数的研究,；,1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化，用光电仪记录流过一根毛细管的细胞,；,1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白,；,1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计数粒子的方法的专利,；,1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞,1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功设计红细胞光学自动计数器,1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计,1972年Herzenberg研制出细胞分选器,1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为细胞研究提供大量的特异免疫试剂大量厂家不断生产流式细胞仪,1.流式细胞术概述2.流式细胞术发展史：,1.流式细胞术概述,3.流式细胞术特点：,分析对象：单细胞悬液或生物颗粒,分析速度：快速，最高达上万个细胞/秒,检测参数：多参数（两个散射光参数、多个荧光参数）,可同时测定多种可溶性细胞成分：流式微球芯片技术（Cytometric Beads Array,CBA）,检测结果：精度高、准确性好,先进的细胞定量技术,1.流式细胞术概述3.流式细胞术特点：,2.流式细胞仪概述,2.流式细胞仪概述,流式细胞仪定义,流式细胞仪的发展史与商品化,流式细胞仪的生产厂家,流式细胞仪的分类,BD公司、Beckman公司的分析仪及分选仪外观,2.流式细胞仪概述2.流式细胞仪概述流式细胞仪定义,2.流式细胞仪概述,贝克曼库尔特Gallios流式细胞仪,2.流式细胞仪概述贝克曼库尔特Gallios流式细胞仪,2.流式细胞仪概述,1.流式细胞仪定义：,流式细胞仪(,Flow Cytomet,o,r, FCM)是以流式细胞术为核心技术，对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器,主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术,计算机对数据的采集和分析技术等。,2.流式细胞仪概述1.流式细胞仪定义：,2.流式细胞仪概述,2.流式细胞仪的发展史与商品化：,1953年,：,Parker 和 Hutcheon 描述一种全血细胞计数器装置，成为流,式细胞仪的雏型；,1969年,：,Van Dilla Fulwyler 发明第一台荧光检测细胞计；,1970年：Phywe研制脉冲细胞光度计，备有荧光镜的FCM，DNA定量；同年Kamensky发明白细胞分类流式细胞仪，激光光源，吖啶橙染色，测定淋巴、单核、中性粒C；,1972年： Len Herzenberg等在斯坦福大学研制荧光激活细胞分选仪（FACS），氩离子激光，标志着流式细胞仪商品化时代到来；,1973年：,Becton Dikinson (BD),公司投入市场，第一台FACS-问世，其后20多年来不断改进完善产品，先后推出FACSAnalyzer、FACScan、FACSCalibur、FACSLSR-、FACSVantage、FACSDiva、FACSAria等；,1975年,：,Kochler 和 Milstein 提出单克隆抗体技术，为细胞研究中大量的特异性免疫试剂的应用奠定基础；鉴于商业仪器的发展,;,2.流式细胞仪概述2.流式细胞仪的发展史与商品化：,2.流式细胞仪概述,1983年,：,Shapiro 认为多参数分析流式细胞仪可以实现。,此后,，流式细胞仪进入一个快速发展的时期,；,1994年：美国Cytomation公司推出高性能、高速分选装置MoFlo，,该机以出色的性能和创新设计理念，一经推出即受到广泛关注；,2008,年：,美国BD公司推出Influx，在MoFlo基,础上实现了原位、立体分选。,2.流式细胞仪概述1983年：Shapiro 认为多参数分析,2.流式细胞仪概述,4.流式细胞仪生产厂家：,目流式细胞仪生产厂家主要有 BD、Beckman Coulter、Partec、Guava、Union Biometrica、ABI、Amnis 等等,。,美国 BD、Beckman,Coulter 和德国的 Partec 占领着流式细胞仪市场的统治地位,。,BD、Beckman Coulter 产品型号种类齐全，,占市场份额较大，如：,经济普及型流式细胞仪,：,FACSCount、Cytomics FC500,；,大型科研型流式细胞仪,：,BD FACSAria、EPICS,；,特点：,产品价格昂贵，我国使用的单位基本上是科研机构。,Partec 产品结构紧凑，造价低，便于携带，适合边远地区和发展中国家，在植物学的研究中占有较大份额。Partec 公司的 CyFlow 于2004 年 1 月进入太空站用于研究工作，成为世界上首台升上太空的流式细胞仪，证明其结构紧凑，性能优越的特点。,2.流式细胞仪概述4.流式细胞仪生产厂家：,2.流式细胞仪概述,5.流式细胞仪分类：,临床型：光路调节系统固定，自动化程度高，操作简便，易掌握，适用于临床常规测试,；,科研型：分辨率高，选配多种波长和类型激光器，可将感兴趣细胞分选到特定培养孔或板上，适用于科研,。,2.流式细胞仪概述5.流式细胞仪分类：,2.流式细胞仪概述,BD公司的流式细胞,分析仪,2.流式细胞仪概述BD公司的流式细胞分析仪,2.流式细胞仪概述,BD公司的流式细胞,分选仪,2.流式细胞仪概述BD公司的流式细胞分选仪,2.流式细胞仪概述,Beckman公司的流式细胞,分析仪,2.流式细胞仪概述Beckman公司的流式细胞分析仪,2.流式细胞仪概述,Beckman公司的流式细胞,分选仪：,2.流式细胞仪概述Beckman公司的流式细胞分选仪：,3.流式细胞仪系统结构,3.流式细胞仪系统结构,流动室与液流系统,激光光源与光学系统,信号检测与分析系统,分选系统,3.流式细胞仪系统结构3.流式细胞仪系统结构流动室与液流系统,3.流式细胞仪系统结构,流 式 细 胞 仪 结 构 图,3.流式细胞仪系统结构流 式 细 胞 仪 结 构 图,3.流式细胞仪系统结构,1.,流动室和液流系统,流动室：仪器核心部件，被测样品在此与激光相交,液流驱动系统（压力泵）：空气泵+压力传感器,3.流式细胞仪系统结构1.流动室和液流系统,3.流式细胞仪系统结构,流动室：,流动室由,样品管、鞘液管和喷嘴,等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作,样品管,贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出;,鞘液,由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出;,流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。,3.流式细胞仪系统结构流动室：,3.流式细胞仪系统结构,流体的,动力学,聚焦,3.流式细胞仪系统结构流体的动力学聚焦,3.流式细胞仪系统结构,液流系统：,由样本和鞘液组成,待测细胞 单个细胞的悬液,荧光染料标记的单抗对其染色,受清洁气体压力,从样品管进入流动室形成样本流,鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。,为了保证液流是稳液，一般限制液流速度98%。,流式细胞仪性能技术指标流式细胞仪性能技术指标,参考资料,参考资料,参考资料参考资料,谢谢!,谢谢!,