需氧革兰阳性杆菌及检验课件

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,需氧革兰阳性杆菌及检验,华中科技大学同济医学院附属协和医院,熊 艳,需氧革兰阳性杆菌及检验华中科技大学同济医学院附属协和医院,1,革兰阳性杆菌菌属间的鉴别,棒状杆菌属,芽胞杆菌属,李斯特菌属,丹毒丝菌属,加特纳菌属,形态,棒状,杆菌有芽胞,短杆、链或丝状,细杆或丝状,杆菌、多形性,触酶,+,+,+,-,-,动力,-,V,+,-,-,对氧,需氧，兼性厌氧,需氧，兼性厌氧,兼性厌氧,兼性厌氧,兼性厌氧,V：,炭疽芽胞杆菌阴性，其它芽胞杆菌阳性。,革兰阳性杆菌菌属间的鉴别棒状杆菌属芽胞杆菌属李斯特菌属丹毒,2,第一节 棒状杆菌属,第一节 棒状杆菌属,3,棒状杆菌属的共同特征,革兰阳性多形态杆菌,无荚膜、无鞭毛、无芽胞,细菌呈不规则栅栏状排列,需氧或兼性厌氧,触酶试验阳性,细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。,棒状杆菌属的共同特征 革兰阳性多形态杆菌,4,一,白喉棒状杆菌,一白喉棒状杆菌,5,（一）生物学特性,形态与染色,培养特性,菌落特征,生化反应,抗原构造,抵抗力,（一）生物学特性形态与染色,6,形态与染色,细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在,L、V、Y,字形及不规则栅栏状。,用美蓝、,Neisser,法、,Albert,法等染色时，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，此颗粒与菌体着色不同，称为,异染颗粒,，为本菌重要形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。,2024/8/31,形态与染色 细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无,7,培养特性,需氧或兼性厌氧，生长温度为1540，最适生长温度为3537，,pH7.27.8。,营养要求高，在普通培养基上虽能生长，但生长不良，形态不典型，大多需要特殊氨基酸。在加有血液、血清或鸡蛋的培养基上生长迅速，形态典型，异染颗粒明显。,2024/8/31,培养特性 需氧或兼性厌氧，生长温度为1540,8,菌落特征,血平板：灰白、狭窄,溶血环。,鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光泽菌落。,亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。,菌落特征血平板：灰白、狭窄溶血环。,9,生化反应,触酶（+），氧化酶（,-,）,能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等，产酸不产气。,不分解乳糖、多数不分解蔗糖。,靛基质试验、明胶液化、尿素分解,2024/8/31,生化反应 触酶（+），氧化酶（-）2023/9/6,10,抗原构造,菌体,O,抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。,K,抗原：型特异性抗原，不耐热。,抗原构造,11,抵抗力,对湿热和一般消毒剂敏感。,对冷和干燥有一定抵抗力。,抵抗力,12,（二）致病性,致病物质：白喉外毒素,由携带,-,棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。,作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。,经呼吸道飞沫传播，引起白喉。,假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。,中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。,（二）致病性致病物质：白喉外毒素,13,（三）免疫性,抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。,成人绝大多数具有免疫性，主要由于隐性感染所获得的免疫力。,锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存在。,（三）免疫性抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。,14,（四）微生物学检验,标本采集,检验程序,检验方法,生化反应,毒力试验,（四）微生物学检验 标本采集,15,标本采集,用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采集分泌物。,未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。,标本采集用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采集分泌物。,16,检验程序,咽拭标本,亚碲酸钾,血平板,观察菌落特征,直接涂片,革兰染色,异染颗粒染色,血平板,吕氏血清斜面,直接涂片,革兰染色,异染颗粒染色,涂片染色镜检,生化反应,毒力试验,检验程序咽拭标本亚碲酸钾观察菌落特征 直接涂片血平板,17,检验方法,标本直接涂片,革兰染色：观察形态、染色性,异染颗粒染色：观察异染颗粒,初步报告：检出形似白喉棒状杆菌,分离培养,吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显,亚碲酸钾血平板：黑色菌落,检验方法标本直接涂片,18,生化反应,根据,糖发酵是否产酸,可鉴别棒状杆菌中的不同种。,白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产酸，不分解蔗糖；尿素酶（）、硝酸盐还原试验（+）等可用于与其他棒状杆菌的鉴别。,生化反应 根据糖发酵是否产酸可鉴别棒状杆菌,19,毒力试验,意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据,方法,艾立克平板毒力试验,对流电泳法,协同凝集试验,动物实验,毒力试验意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据,20,二,其他棒状杆菌,二其他棒状杆菌,21,第二节 需氧芽胞杆菌属,第二节 需氧芽胞杆菌属,22,芽胞杆菌属共同特点,绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞,除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力,非抗酸性,营养要求不高，在普通培养基上生长良好,芽胞杆菌属共同特点 绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横,23,一,炭疽芽胞杆菌,一炭疽芽胞杆菌,24,（一）生物学特性,形态与染色,培养特性,菌落特征,生化反应,抗原构造,抵抗力,（一）生物学特性形态与染色,25,形态与染色,为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。,无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。,人工培养或在外界环境中易产生芽胞，在活体或完整未经解剖的尸体内不形成芽胞，所以,炭疽病尸体严禁解剖,。,2024/8/31,形态与染色 为致病菌中最大的革兰阳性杆,26,培养特性,需氧或兼性厌氧。,营养要求不高，普通培养基上生长良好。,2024/8/31,培养特性 需氧或兼性厌氧。2023/9/6,27,菌落特征,普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈,卷发状,。,血液琼脂平板：培养1215,h，,菌落周围,无溶血环,，1824,h,后可有,轻微溶血,，而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显而快速。,液体培养基中呈絮状生长,明胶培养基中呈倒置的杉树,有毒株在,NaHCO,3,培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝。,2024/8/31,菌落特征普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无光泽，,28,有毒株,在,NaHCO,3,血琼脂平板上置5%,CO,2,环境中培养1824,h，,可产生荚膜，菌落由粗糙型变为,粘液型,，而呈现半圆形，突起，有光泽的菌落。以接种针挑取时,呈拉丝状,，此为鉴别菌落要点，而无毒株则形成粗糙型菌落。,有毒株在NaHCO3血琼脂平板上置5%CO2环境中培养,29,生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。不分解乳糖。触酶（+），,VP（），,吲哚（），尿素（） 。,生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不,30,抗原结构,炭疽毒素,：由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成的蛋白质复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。,具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。,荚膜抗原,：与细菌毒力有关，失去荚膜后毒力也就消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊断中有鉴别诊断价值。,抗原结构炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成的蛋白,31,菌体抗原,：耐热、耐腐败，无毒性，有种特异性。,芽胞抗原,：芽胞的外膜含有抗原决定簇，与皮质层一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原，此抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。,Ascoli,热沉淀反应,：感染动物尸体组织浸出液煮沸半小时后，耐热的菌体抗原不被破坏，能与特异性抗体发生环状沉淀反应，称,Ascoli,热沉淀反应，对炭疽病具有一定的诊断价值。,2024/8/31,Ascoli热沉淀反应：感染动物尸体组织浸出液煮,32,抵抗力,本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，,芽胞抵抗力很强,。在干燥的土壤或者皮毛中可存活20余年。,芽胞对碘和氧化剂敏感。,耐药性：本菌对磺胺类、青霉素、四环素、环丙沙星敏感。,抵抗力 本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，芽胞抵抗力很强。,33,（二）致病性与免疫性,致病物质：炭疽毒素、荚膜,所致疾病,经多途径感染，引起炭疽病。,临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。,属人畜共患传染病，死亡率高。,免疫性：病后可获得持久性免疫力，再次感染者甚少。,（二）致病性与免疫性致病物质：炭疽毒素、荚膜,34,（三）微生物学检验,标本采集,检验程序,检验方法,（三）微生物学检验标本采集,35,标本采集,标本采集,病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等。,死亡病畜标本：,死于败血症的动物，严禁宰杀、解剖,，可在消毒皮肤后割取耳朵、舌尖、采集少量血液。,污染物品：皮革、兽毛、土壤等。,标本处理,：无杂菌污染标本直接接种，有杂菌污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种。,标本采集标本采集,36,已处理标本,直接涂片,增菌培养,分离培养,Ascoli,试验,革兰染色,荚膜染色,初步报告,血平板,戊烷脒琼脂平板,可疑菌落,菌落涂片,染色镜检,鉴定试验,肉汤培养,动物实验,动物死亡,分离培养,噬菌体裂解,串珠试验,青霉素抑制试验,已处理标本直接涂片增菌培养分离培养Ascoli试验革兰染色初,37,检验方法,涂片染色镜检,革兰染色：涂片后升汞固定，革兰染色发现革兰阳性粗大杆菌、有荚膜，呈竹节样排列可初步报告。,分离培养：一般接种血平板，37培养24,h,后观察菌落特点。污染的标本先加热处理再接种。,动物试验：注射部位胶样水肿，肝脾肿大，出血等。,在芽胞杆菌属中，除蜡样芽胞杆菌毒素对动物有致病作用外，炭疽芽胞杆菌是唯一具有致病力者。,检验方法涂片染色镜检,38,鉴定试验,青霉素抑制试验,炭疽芽胞杆菌在含5,IU/ml,的青霉素培养基上能生长，而在含10、100,IU/ml,的青霉素培养基上受到抑制不生长。,鉴定试验青霉素抑制试验,39,鉴定试验,串珠试验,与类炭疽芽胞杆菌鉴别,炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后，在形态上发生明显的变化。,如将本菌幼稚培养物接种于含0.050.5,U/ml,青霉素的培养基上，376,h，,菌体肿大呈圆珠状，称串珠反应。,此反应可能与青霉素抑制细菌胞壁的合成作用有关，为炭疽杆菌所特有，可用于与其他,类炭疽,芽胞杆菌的鉴别。,鉴定试验串珠试验 与类炭疽芽胞杆菌鉴别,40,鉴定试验,青霉素和串珠联合试验,噬菌体裂解试验,与类炭疽芽胞杆菌鉴别,NaHCO,3,毒力试验,有毒力的炭疽杆菌形成荚膜，菌落呈粘液型，无毒力的炭疽杆菌不形成荚膜，菌落呈粗糙型。,鉴定试验青霉素和串珠联合试验,41,鉴定试验,植物凝集素试验,根据炭疽芽胞杆菌菌体多糖是植物凝集素受体的原理。,Ascoli,热沉淀试验,用已知的抗炭疽杆菌抗体测定标本中未知的抗原。炭疽杆菌沉淀原具有耐高热特征，在尸体组织和皮毛中数年仍能检出，故可作追溯性诊断。,2024/8/31,鉴定试验植物凝集素试验2023/9/6,42,炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别,鉴别项目,炭疽芽胞杆菌,枯草芽胞杆菌,蜡样芽胞杆菌及其它需氧芽胞杆菌,形态,菌体两端平整或凹陷,两端钝圆,两端钝圆,荚膜,+,-,-,动力,-,+,+,菌落,有小突起，边缘呈卷发状，粘稠菌落,锯齿状粗糙菌落,蜡样或粗糙不粘稠菌落,肉汤,絮状沉淀，上层清晰,均匀混浊有菌膜,均匀混浊有菌膜,Ascoli,+,-,-,溶血,不溶血或微溶血,+,+,串珠试验,+,-,-,炭疽芽胞杆菌与其它需氧芽胞杆菌的鉴别 鉴别项目炭疽芽胞杆菌枯,43,二,蜡样芽胞杆菌,二蜡样芽胞杆菌,44,（一）生物学特性,形态与染色,培养特性,菌落特征,生化反应,抵抗力,（一）生物学特性形态与染色,45,形态与染色,革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，长短不一，有鞭毛，无荚膜，可形成芽胞。,形态与染色 革兰阳性大杆菌，两端较钝、链杆状，长短不一,46,培养特性,需氧或兼性厌氧，营养要求不高。,普通琼脂平板：可形成圆形、隆起、灰白色、不透明、,R,型,蜡滴样,大菌落。,血琼脂平板：菌落呈浅灰色，似毛玻璃状，菌落周围有,或,溶血,。,2024/8/31,培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高。,47,乳光反应或卵黄反应：,在卵黄琼脂平板上生长迅速，培养3,h,后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成,白色的混浊环,，即为乳光反应或卵黄反应。,乳光反应或卵黄反应：,48,生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，不分解乳糖。,VP（+），,液化明胶。,生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，不分解乳,49,抵抗力,耐热，抵抗力强,能耐受,10030min,。,抵抗力 耐热，抵抗力强, 能耐受10030min。,50,（二）致病性,条件致病菌，主要引起食物中毒。,临床上分为两种类型：,腹泻型：由不耐热的肠毒素引起。,呕吐型：由耐热的肠毒素引起。,（二）致病性 条件致病菌，主要引起食物中毒。,51,（三）微生物学检验,1标本采集,除进行本菌的分离培养外，必须作,活菌计数,。因暴露于空气中的食物，在一定程度上都受本菌污染，故,不能因分离出蜡样芽胞杆菌则认为是引起食物中毒的病原菌,。,2检验程序,（三）微生物学检验 1标本采集,52,3检验方法,直接镜检,：,活菌计数,：,一般认为蜡样芽胞杆菌的活菌数,大于10,5,/mL,时，即有发生食物中毒的可能。,分离培养,：,鉴定,3检验方法 直接镜检：,53,第三节 产单核李斯特菌,第三节 产单核李斯特菌,54,一,生物学特性,形态与染色,培养特性,生化反应,抗原结构,抵抗力,一生物学特性形态与染色,55,（一）形态与染色,革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈,V,字形成对排列，有时呈丝状，偶尔可见双球状。,多数菌体一端较大，似棒状，易误认为是污染的类白喉棒状杆菌；,又因菌体短小，三、五成链，并有,溶血性，易与链球菌混淆，用触酶试验加以区别。,2024/8/31,（一）形态与染色2023/9/6,56,在2225环境中形成4根鞭毛，故在,25,肉汤培养液中,运动活泼,；而在,37,时仅形成1根鞭毛，,动力缓慢,。,在2225环境中形成4根鞭毛，故在25肉汤培养,57,（二）培养特性,需氧或兼性厌氧，营养要求不高。,4,45,均能生长，最适温度30,37,。因在,4,能生长，故可进行,冷增菌,。,初时菌落极小似,露珠状,、光滑透明，通过侧光微显蓝绿色，37培养数日，菌落增大变成灰暗，血平板上的菌落有狭窄的,溶血环。,2024/8/31,（二）培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高。445,58,（三）生化反应,12,d,内发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖，产酸不产气，在310,d,内可发酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖。触酶阳性，,VP（+），MR（+）。,（三）生化反应 12d内发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖，产酸不,59,（四）抗原结构,分为,4,个血清型，,1,型主要感染啮齿动物，各型对人类均可致病，但以,1a,和,lb,最为多见。,本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及大肠埃希菌等具有共同抗原。,2024/8/31,（四）抗原结构 分为4个血清型，1型主要感染啮齿动物，各型,60,（五）抵抗力,在土壤、粪便、饲料中能长期存活。,耐盐、耐碱、不耐酸。,对热敏感，对,般消毒剂敏感，,70,的乙醇,5min,即可杀死本菌。,（五）抵抗力在土壤、粪便、饲料中能长期存活。,61,二致病性,本菌常伴随,EB,病毒引起传染性单核细胞增多症。,二致病性 本菌常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增,62,三微生物学检验,（一）标本采集,（二）检验程序,三微生物学检验 （一）标本采集,63,（三）检验方法,1分离培养,2鉴定要点,形态染色：革兰阳性小杆菌。,溶血：本菌的,溶血环很窄，往往把菌落刮去，方可见菌落下面的,溶血环。,动力试验：25动力阳性。,4能生长,2024/8/31,（三）检验方法 1分离培养 2023/9/6,64,第四节 红斑丹毒丝菌,第四节 红斑丹毒丝菌,65,一,生物学特性,形态与染色,培养特性,生化反应,一生物学特性形态与染色,66,（一）形态与染色,革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，粗糙型菌落形成长丝状。无鞭毛，无荚膜，无芽胞。,2024/8/31,（一）形态与染色 革兰阳性杆菌，单个或形成短链状，,67,（二）培养特性,厌氧或微需氧菌。初次分离需在厌氧环境中培养，传代后在有氧条件下也能生长。,（二）培养特性 厌氧或微需氧菌。初次分离需在厌氧环境中,68,（三）生化反应,氧化酶（），触酶（），发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气。,2024/8/31,（三）生化反应 氧化酶（），触酶（），发酵葡萄糖、,69,二致病性,红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原体。,主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感染发病。,人接触动物或其产品经皮肤损伤而引起类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋巴管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败血症或心内膜炎。,二致病性 红斑丹毒牡菌为红斑丹毒丝菌病的病原体。,70,三微生物学检验,（一）标本采集,（二）检验程序,（三）检验方法,1直接镜检 2分离培养,3生化反应 4动物试验,2024/8/31,三微生物学检验 （一）标本采集（三）检验方法2023/9/,71,第五节 阴道加特纳菌,第五节 阴道加特纳菌,72,一,生物学特性,形态与染色,培养特性,生化反应,抵抗力,一生物学特性形态与染色,73,（一）形态与染色,本菌革兰染色视菌株和菌龄不同而异。本菌具有多形性，两端钝圆，无鞭毛，无荚膜，无芽胞。,（一）形态与染色 本菌革兰染色视菌株和菌龄不同而异。本菌,74,（二）培养特性,兼性厌氧菌，营养要求较高，在一般营养琼脂平板上不生长。,在含5%人血琼脂平板上置5%,CO,2,，35,37,培养24,h,后，形成针尖大小菌落；经48,h,后形成,溶血、圆形、光滑不透明的菌落。,2024/8/31,（二）培养特性 兼性厌氧菌，营养要求较高，在一般营养琼,75,（三）生化反应,氧化酶（），触酶（），尿素酶（）。发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等，产酸不产气。,2024/8/31,（三）生化反应 氧化酶（），触酶（），尿素酶（）,76,（四）抵抗力,所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。,（四）抵抗力 所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉,77,二致病性,阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道病（,BV,）。,可导致妇产科多种严重并发症。如子宫全切术后感染、绒毛膜炎等。,本菌还能引起新生儿败血症和软组织感染。,二致病性 阴道加特纳菌和厌氧菌在阴道内过度生长，造成阴道,78,并非,GV,阳性者都是,BV，,因为2040%的正常妇女阴道也可检出此菌。,BV,诊断标准：,阴道分泌物增多，稀薄均质灰白色，有恶臭味。,分泌物,pH,4.5,4.7。,分泌物胺试验阳性。,镜检有线索细胞。,2024/8/31,并非GV阳性者都是BV，因为2040%的正常妇女阴道也,79,三微生物学检验,（一）标本采集,（二）检验程序,三微生物学检验 （一）标本采集,80,（三）检验方法,1阴道分泌物直接检查,直接湿片镜检：线索细胞,涂片染色镜检：,pH,测定：阴道,pH,4.7，,提示细菌性阴道炎。,胺试验：,2分离培养,2024/8/31,（三）检验方法 1阴道分泌物直接检查 2分离培养 202,81,分枝杆菌属及检验,分枝杆菌属及检验,82,分枝杆菌属主要特点,是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。,细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸。,具有抗酸性，革兰染色不易着色，常用,抗酸染色,。,专性需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢。,不产内、外毒素和侵袭性酶等致病物质，,其致病性与菌体成分有密切关系，,所致疾病呈慢性。,分枝杆菌属主要特点是一类直或微弯曲、有分枝生长趋势的杆菌。,83,分枝杆菌属种类,结核分枝杆菌复合群,结核分枝杆菌,牛分枝杆菌、,非洲分枝杆菌,田鼠分枝杆菌,非典型分枝杆菌,麻风分枝杆菌,光产色分枝杆菌,暗产色分枝杆菌,不产色分枝杆菌,迅速生长分枝杆菌,分枝杆菌属,分枝杆菌属种类结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌非典型分枝杆菌麻,84,第一节 结核分枝杆菌,第一节 结核分枝杆菌,85,一,生物学特性,形态与染色,培养特性,生化反应,抵抗力,变异性,一生物学特性形态与染色,86,形态与染色,细长略弯，分枝生长趋势。,无芽孢，无鞭毛，部分菌株有荚膜。,革兰染色阳性，不易着色。,抗酸染色阳性,，,多数菌体含有一至数个,异染颗粒,。,形态与染色细长略弯，分枝生长趋势。,87,结核分枝杆菌,（抗酸染色）,结核分枝杆菌（抗酸染色）,88,培养特性,生长条件：,细胞内寄生菌，专性需氧，8%12%,CO,2,可刺激其生长。最适,pH6.5,6.8,。,营养要求较高，必须在含有血清、卵黄、甘油、马铃薯以及无机盐类的特殊培养基上才能生长。,生长现象：,生长缓慢，在一般的培养基中,每分裂一代的速度为1824,h,。,改良罗氏培养基,菌落,特征：干燥、淡黄色、,质地较硬的,R,型菌落,液体培养基：形成菌膜，有毒株呈索状生长。,培养特性 生长条件：,89,结核分枝杆菌菌落,结核分枝杆菌菌落,90,生化反应,生化反应不活泼，不发酵糖类。触酶阳性。,与非结核分枝杆菌鉴别：,耐热触酶试验；（非结核分枝杆菌）,与牛分枝杆菌鉴别,烟酸试验；（牛分枝杆菌）,生化反应生化反应不活泼，不发酵糖类。触酶阳性。,91,抵抗力,抵抗力特点：“三耐四敏”,耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（,1:13000,）,对湿热、,70,乙醇、紫外线、常用抗结核药物（但长期使用易产生耐药性）敏感。,结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，酒精较易渗入细胞壁将其杀死，故对,70%75%的酒精敏感,。但脂质可防止菌体内水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。,抵抗力抵抗力特点：“三耐四敏”,92,变异性,典型形态,多形性,R,型菌落,S,型菌落,有毒,无毒（用于制备疫苗）,抗结核药敏感,耐药,变异性 典型形态多形性,93,二致病性与免疫性,致病物质,所致疾病,免疫性与变态反应,二致病性与免疫性致病物质,94,致病物质,脂质,索状因子：与该菌毒力有密切关系,磷脂：,分枝菌酸：与抗酸性有关,蜡质,D,：具有佐剂作用,硫酸脑苷脂：,蛋白质,糖类,结核杆菌不产生内、外毒素，不产生侵袭性酶。,致病物质脂质,95,所致疾病,经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见,类型：原发感染和继发感染,所致疾病经多途径感染，引起结核病，以肺结核多见,96,免疫性与变态反应,抗结核免疫以细胞免疫为主,抗结核免疫属带菌免疫,抗结核免疫与,型超敏反应同时出现,免疫性与变态反应 抗结核免疫以细胞免疫为主,97,结核菌素试验,原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。,结果：根据注射部位是否出现红肿判断结果,5mm,为阴性,5mm,为阳性,15mm,为强阳性,应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者细胞免疫状态。,结核菌素试验原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核,98,结核分枝杆菌,检验程序,标本,核酸,检测,接种固体培养基,可疑菌落,涂片抗酸,染色镜检,抗体,检测,慢性生长菌,快速生长菌,菌种鉴定,标本前处理,接种液体,培养基,接种小白鼠,豚鼠,脏器涂片,镜检,抗酸染色,鉴定试验,结核分枝杆菌检验程序标本核酸接种固体培养基可疑菌落涂片抗,99,结核分枝杆菌,涂片检查,直接涂片,薄涂片,厚涂片,集菌涂片,沉淀集菌法,漂浮集菌法,荧光显微镜检查法：,金刚胺,O,染色,荧光显微镜下检查,结核分枝杆菌涂片检查直接涂片,100,抗酸染色,报告方式,报告方式,镜检结果,-,仔细检查,300,个视野未发现抗酸杆菌,300,个视野内发现,1,2,条抗酸菌,100,个视野内发现,1,9,条抗酸菌,2,10,个视野内发现,1,9,条抗酸菌,3,每个视野内发现,1,9,条抗酸菌,4,每个视野内发现,9,条以上抗酸菌,抗酸染色报告方式报告方式镜检结果-仔细检查300个视野未,101,结核分枝杆菌,分离培养,标本前处理：,目的：杀死杂菌；液化标本,方法：,4,NaOH,法；,4,H,2,SO,4,法；,胰酶,-,新洁尔灭法等,培养基选择：罗氏培养基、米氏培养基、小川培养基等,接种,培养,结核分枝杆菌分离培养标本前处理：,102,培养结果记录与报告方法,报告方式,培养结果,斜面,20,个菌落以上，占斜面,1/4,以下,2,斜面上菌落生长面积占,1/4,以上，,1/2,以下,3,斜面上菌落面积占斜面,1/2,以上，,3/4,以下,4,斜面上菌落生长密集，成菌苔,培养结果记录与报告方法报告方式培养结果斜面20个菌落以上，,103,非典型分枝杆菌,是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。,大多为环境中的腐生菌。,对酸碱比较敏感。,对常用抗结核药耐受。,为条件致病菌，艾滋病患者易感染鸟复合分枝杆菌。,非典型分枝杆菌是指结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。,104,麻风分枝杆菌,生物学性状,为抗酸杆菌,。,细胞内寄生。,有麻风杆菌寄生的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞。,体外人工培养尚未成功。,犰狳,是动物感染模型。,麻风分枝杆菌生物学性状为抗酸杆菌。,105,犰狳,犰狳,106,麻风分枝杆菌,临床意义与微检,经呼吸道、接触感染,引起,麻风病,瘤型麻风（开放型）：传染性强,结核样型（闭锁性）：传染性弱,微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的主要依据,麻风分枝杆菌临床意义与微检经呼吸道、接触感染,107,麻风杆菌,麻风杆菌,108,麻风病人,麻风病人,109,第二节 非典型分枝杆菌,第三节 分枝杆菌鉴定,第四节 麻风分枝杆菌,第二节 非典型分枝杆菌,110,