ELISA检测乙肝抗体

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ELISA,检测乙肝抗体,组员：李家成1520210102,林其聪1520210103,付 强1520210104,郑海军1520210105,管 汝1420211143,分工,汇报：林其聪,PPT制作：李家成，付强,ELISA,检测乙肝抗体,肝外表抗体ELISA检测,实验目的,1.,掌握,ELISA,的原理和操作方法。,2.,熟悉酶标仪的使用方法。,免疫标记技术,免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反响。,细胞,1,细胞,2,标记物,分类,荧光素,放射免疫技术,放射性核素,免疫荧光技术,酶,免疫酶技术,免疫酶技术,用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反响。可用酶标测定仪测定光密度(OD来反响抗原或抗体含量，灵敏度可到达ngpg/ml。,细胞,1,标记物,DH,+H,O,D+2H,2,O,酶具有高效催化性：可加快化学反响的速率；在反响前后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用,酶联免疫吸附试验,-ELISA,ELISA是一种免疫测定immunoassay，IA。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记：参加酶反响的底物后，底物被酶催化成为有色产物；产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。,酶联免疫吸附实验,ELISA,实验原理,抗原或抗体吸附到固体相载体外表后，以及抗原抗体与酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反响的深浅进行定性或定量分析。,ELISA,可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法有三个必要的试剂：,1免疫吸附剂,2结合物,3酶反响的底物,ELISA,的类型,间接法测抗体,双抗体夹心发测大分子抗原,竞争发测小分子抗原,竞争法,用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体外表，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。,这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。,操作步骤,1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。,2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。,3.每孔加酶结合物1滴孔上方悬空滴加，无气泡，混匀，空白孔不加，置37度温箱30分钟。,4.取出反响板，弃液，拍干。,5.每孔注满洗条液，不要溢出静置5秒后弃液，拍干，重复洗条5次，拍干。,6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。,7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。,待,1,待,2,待,2,阳性,阴性,空白,