第12讲-免疫检测与防治课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Company Logo,免疫学检测方法：,依据,免疫学理论,设计的,测定,抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子,的,实验方法,。,免疫学检测方法：,一、基本原理,抗原与相应抗体特异性结合，并呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，以此检测抗原或抗体。,第一节 体外抗原抗体结合反应,的特点及其影响因素,一、基本原理 抗原与相应抗体特异性结合，并呈现某种反应,抗原抗体反应的特点,1.,抗原抗体结合的特异性,抗原抗体结合除,空间构型,互补外，还以,氢键,、,静电引力,、范,德华力,和,疏水键,等非共价方式,结合，,一定条件下,复合物可,解离,成游离状态，,且仍,保持原有性质,。,抗原抗体反应的特点 1.抗原抗体结合的特异性 抗原抗体结合,2.,抗原抗体结合的可逆性,复合物,解离度,主要取决于特异性抗体,超变区,与相应,抗原表位,三维空间构型的,互补程度,，,互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，,两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易,发生解离。,2.抗原抗体结合的可逆性 复合物解离度主要取决于特异性抗体超,3.,抗原抗体结合的比例与浓度,抗原与抗体结合,比例合适,，则可形成,肉眼可见的,大结合物,；反之形成肉眼,不可见的小结合物。,3.抗原抗体结合的比例与浓度 抗原与抗体结合比例合适，则可形,4.,抗原抗体反应的阶段性,第二阶段：,可见反应阶段。,数分钟、数小时至数日，因素影响多。,第一阶段：,特异结合阶段。,仅几秒到几分钟、尚无可见反应；,4.抗原抗体反应的阶段性 第二阶段：可见反应阶段。第一阶,抗原抗体反应的主要影响因素,1.,抗原和抗体浓度、比例,2.,电解质,3.,温度,4.,酸碱度,抗原抗体反应的主要影响因素1.抗原和抗体浓度、比例2.电解,二、血清学反应的种类,1.,凝集反应,细菌、细胞等,颗粒性抗原,与,相应的抗体,，,或表面,包被抗原,的颗粒状物质与,相应的,抗体,在电解质存在的条件下结合，出现,肉眼可见,的,凝集团,现象。,二、血清学反应的种类 1.凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原与相,第12讲-免疫检测与防治课件,2.,沉淀反应,毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等,可溶性抗原,与,相应抗体,反应后，出现,肉眼可见,的,沉淀物,。,2.沉淀反应毒素、组织浸液以及血清中的蛋白等,第12讲-免疫检测与防治课件,第12讲-免疫检测与防治课件,第12讲-免疫检测与防治课件,第12讲-免疫检测与防治课件,3.,免疫标记技术,用,酶、荧光素、同位素,等物质,标记,抗体或抗原进行抗原抗体反应，检,测,抗原或抗体,的技术。,如免疫酶技术、免疫荧光技术、,放射免疫测定。,3.免疫标记技术用酶、荧光素、同位素等物质标记如免疫酶技术、,第一抗体,抗原,第一抗体,抗原,第二抗体,生物酶,第一抗体,抗原,-,第二抗体,显色,第一抗体抗原第一抗体抗原第二抗体生物酶第一抗体抗原-第二,第二节 免疫细胞的测定,淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。,一 、淋巴细胞的分离,常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞（PBMC），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴细胞。若要分离T细胞，可用尼龙毛柱、抗CD3单抗、E花结试验等分离。,第二节 免疫细胞的测定,第12讲-免疫检测与防治课件,二、免疫细胞细胞的鉴定,根据细胞的某些标志，采用免疫荧光法、磁珠分离法、流式细胞术等方法可确定细胞不同类型和比例。,（一）T细胞功能测定,1. T细胞增殖试验,植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等丝裂原及抗CD3单抗等能非特异性激活培养的T细胞，使其转化成淋巴母细胞的试验。,二、免疫细胞细胞的鉴定,淋巴细胞功能测定,在该增殖过程中，细胞DNA、RNA、蛋白质的合成增加，细胞形态改变。也可检测特异性抗原致敏的T细胞。,（1）氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法：该法灵敏、可靠，应用广泛，但需特殊仪器（液体闪烁仪），易有放射性污染。,（2）MTT法：该法操作简单，无放射性污染，但敏感性相对较差。,淋巴细胞功能测定 在该增殖过程中，细胞DNA、,淋巴细胞功能测定,2. 细胞毒试验：,Tc、NK细胞对靶细胞有直接杀伤作用，可根据待检效应细胞的性质，选用相应的靶细胞。,（1）,51,Cr释放法：用,51,Cr标记靶细胞，记数仪测定释放的,51,C活性。,（2）MTT法：其原理与增殖试验相同，但甲 生成量与靶细胞溶解破坏水平呈负相关。,（3）乳酸脱氢酶释放法：细胞受损致膜通透性改变，乳酸脱氢酶释放到培养液中。,淋巴细胞功能测定2. 细胞毒试验：,3 细胞因子检测：,CK的检测有助于了解其在免疫调节中的作用，鉴定分离的淋巴细胞，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。常用的检测方法有以下三种：,（1）ELISA法：,（2）生物活性测定法：,（3）聚合酶链反应（PCR）：,3 细胞因子检测：,淋巴细胞功能测定,4 皮肤实验,正常机体对某种抗原产生细胞免疫后，用相同抗原做皮肤试验时出现以局部红肿为特征的DTH。细胞免疫正常时出现阳性反应，细胞免疫低下则呈阴性反应。,该方法简便，可帮助诊断某些病原微生物感染（如结核杆菌、麻风杆菌等）及免疫缺陷病等。,淋巴细胞功能测定 4 皮肤实验,淋巴细胞功能测定,（二）B细胞功能测定,B细胞介导体液免疫，检查B细胞的数量与功能是确定体液免疫是否正常的重要手段。,1 B细胞增殖试验,2 抗体形成细胞的测定：吸附有特异性抗原的SRBC与抗体形成细胞分泌的Ig特异性结合后活化补体，溶解SRBC。又称溶血空斑试验。,淋巴细胞功能测定（二）B细胞功能测定,第,12,讲 免疫学防治,“国防建设”,学习要求：,1.,掌握人工主动免疫与人工被动免疫的,概念,；掌握死疫苗和活疫苗,概念,以及,特性；,2.,熟悉疫苗的基本要求。,免疫学防治,：,应用,免疫学理论,预防,和,治疗,疾病，包括,免疫预防,和,免疫治疗,。,第12讲 免疫学防治 “国防建设”学,一、疫苗,1.,定义：,为,预防、控制,传染病的发生和流行，,用于,人体预防接种,的,生物制品,。,包括疫苗、菌苗和类毒素。,一、疫苗1.定义：为预防、控制传染病的发生和流行，,2.,基本要求：,安全,实用,有效,对绝大多数人群有保护性作用，,使用后群体抗感染能力强，,理想的疫苗：同时诱导细胞和体液免疫，维持时间长。,接种程序简单，无严重不良反应，便于运输和储存，价格低。,活疫苗要求遗传性状稳定，,无返祖、致癌和致畸作用，,无热原性和过敏原。,2.基本要求：安全实用有效对绝大多数人群有保护性作用，接种程,抗感染,抗肿瘤,计划生育,防止免疫病理损伤,3.,疫苗应用,抗感染3.疫苗应用,二、免疫预防方式,免疫预防,自然免疫：显性或隐性感染，,胎儿从母亲获得,人工免疫：人工主动免疫,人工被动免疫,免疫预防,自然免疫：显性或隐性感染，,胎儿从母亲获得,人工免疫：人工主动免疫,人工被动免疫,二、免疫预防方式免疫预防自然免疫：显性或隐性感染，人工免疫：,（一）人工主动免疫,1.,定义：,用疫苗接种机体，使之产生,特异性免疫，从而预防感染的措施。,（一）人工主动免疫1.定义：用疫苗接种机体，使之产生,2.,疫苗,灭活,疫苗,（,死疫苗）与减毒活疫苗,活疫苗,：人工的方法使病原体,减毒,或从自然界,筛选病原体,无毒株,或,微毒株,所制成的,活的,微生,物制剂。也称减毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。,死疫苗,：选用,免疫原性强,的病原微生物，经人工,大量培养，经理化方法将其,杀死,后制成的疫苗。,无毒力,，但仍保持其,免疫原性,。伤寒、百日咳、,钩端螺旋体、斑疹伤寒、乙型脑炎等疫苗,2.疫苗灭活疫苗（死疫苗）与减毒活疫苗活疫苗：人工的方法使,死疫苗与活疫苗特点的比较,死疫苗与活疫苗特点的比较,含义：,细菌外毒素经,0.3,0.4%,甲醛处理。,类毒素,特点：,失去毒性,而仍保留其,免疫原性,。,新型疫苗,亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。,食用转基因植物以预防接种已初步成功。,含义：,细菌外毒素经,0.3,0.4%,甲醛处理。,类毒素,特点：,失去毒性,而仍保留其,免疫原性,。,含义：细菌外毒素经0.30.4%甲醛处理。类毒素特点：失,（二）人工被动免疫,1.,定义：,给人体注射含,特异性抗体,的,免疫血清或,细胞因子,等制剂，以,治疗,或,紧急预防,感染的措施。,（二）人工被动免疫1.定义：给人体注射含特异性抗体的,2.,制剂,抗毒素：细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的血清。,注意,：对人而言既是抗体也是抗原，因而要防止超敏反应的发生，使用前需皮试。,举例,：破伤风抗毒素，白喉抗毒素,2.制剂抗毒素：细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的血清。,人免疫球蛋白制剂：混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂。,举例,：肝炎、麻疹、脊髓灰质炎。,细胞因子和单克隆抗体：,IFN-,IFN-,、,G-CSF,、,GM-CSF,、,IL-2,，人源单抗。,举例,：肿瘤、艾滋病有效预防手段。,人免疫球蛋白制剂：混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓,（三）人工主动与被动免疫的特点比较,（三）人工主动与被动免疫的特点比较,3.,计划免疫,3.计划免疫,第三节 免疫治疗,针对异常的免疫状态，应用免疫制剂、免疫调节药物或其他措施来调节或重建免疫功能，以达到治疗疾病的目的。,第三节 免疫治疗 针对异常的免疫状态，应用免疫制,免疫增强疗法,免疫抑制疗法,感染、肿瘤,超敏反应、自身免疫病、,移植排斥反应、严重炎症,免疫重建疗法,再障、免疫缺陷,免疫增强疗法免疫抑制疗法感染、肿瘤超敏反应、自身免疫病、免疫,主动免疫治疗,被动免疫治疗,刺激或增强机体免疫系统，使机体自身产生抵抗疾病的能力,输注免疫效应细胞或分子，发挥治疗疾病的作用,又称 过继免疫疗法,主动免疫治疗被动免疫治疗刺激或增强机体免疫系统，使机体自身产,特异性免疫疗法,非特异性免疫疗法,主动,被动,主动,被动,瘤苗,抗体、,TIL,佐剂（卡介苗）,LAK,、细胞因子,特异性免疫疗法非特异性免疫疗法主动主动瘤苗抗体、TIL佐剂（,