肿瘤药物敏感实验课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,肿瘤药物敏感实验,肿瘤药物敏感实验,1,化疗的重要性,自,1946,年,Gillman,和,Phillip,报道氮芥类药物治疗造血系统肿瘤以来,化学治疗巳取得很大的进步。目前化学治疗已使绒癌、恶性淋巴瘤、睾丸精原细胞瘤、小细胞肺癌等多种恶性肿瘤获得治愈的机会,大多数恶性肿瘤能得到缓解,化疗在恶性肿瘤的治疗中具有不可替代的地位。,化疗的重要性 自1946年Gillman和Phil,2,肿瘤化疗的局限性,肿瘤的化学治疗在半个世纪以来,虽然取得显著进展,但临床抗肿瘤药物治疗的总有效率并不高,阻碍化学治疗取得更好疗效的原因众多,主要包括,:,肿瘤化疗的局限性 肿瘤的化学治疗在半个世纪以来,3,抗肿瘤药物研究表明,即使是相同组织学类型的肿瘤对同一抗肿瘤药物的反应也并不尽一致,对不同脏器或不同组织学类型的肿瘤采用相同的用药方案,效果更是千差万别。目前大多数化疗是采用的对某种脏器既定的联合方案,仍有一定的盲目性。,1.,现行化疗的盲目性,抗肿瘤药物研究表明,即使是相同组织学类型的肿瘤对同一,4,2.化学治疗的抗药性,有些肿瘤对某些药物存在先天耐药,还有些肿瘤经化疗缓解,肿瘤敏感株杀灭,耐药株成为复发的根源,而且对以后的化疗抵抗,。,2.化学治疗的抗药性 有些肿瘤对某些药物存在先天耐药,5,3. 抗癌药物的毒性,所有抗肿瘤药物在杀伤肿瘤细胞的同时,也杀伤正常的组织细胞,尤其是增殖旺盛的骨髓造血细胞和胃肠道细胞。期望通过增大剂量、增加用药品种、缩短间隔时间的方法来提高抗癌效果,则将进一步加重毒性作用。,3. 抗癌药物的毒性 所有抗肿瘤药物在杀,6,如何解决这些问题,?,肿瘤化疗个体化,:,研究发现,根据药敏检测结果指导选药,有效率可在原来固定化疗方案的基础上提高一倍以上,于是提出了肿瘤化疗个体化的概念(即预见性化疗)。根据个体肿瘤敏感性检测的结果,选用敏感的药物的联合方案,无疑将会大大提高肿瘤的治疗水平。,如何解决这些问题?肿瘤化疗个体化: 研究发现,根据药敏检测,7,肿瘤药敏的可行性,七十年代细胞培养技术的突破,新型培养材料、培养基的问世。,1983,年,Mosmann,建立了,MTT,法,方法简便,设备要求不高,检测时间短,便于在临床上广泛开展。,新的抗癌药不断问世,同一种肿瘤有多种联合化疗方案可供选择。,肿瘤药敏的可行性七十年代细胞培养技术的突破,新型培养材料、培,8,肿瘤药敏的方法学,裸鼠皮下移植,裸鼠肾包膜下移植,裸鼠原位移植,肿,瘤,细,胞,药,敏,体内法,体外法,染料排斥法,集落形成法,同位素法,四唑蓝比色法,肿瘤药敏的方法学裸鼠皮下移植肿体内法体外法染料排斥法,9,裸鼠肾包膜下移植,裸鼠肾包膜下移植实验是肿瘤细胞药敏体内实验最常用的方法,但由于裸鼠需要在无菌条件下饲养,而且肾包膜下移植实验操作复杂,实验周期长,不易在临床广泛开展。,裸鼠肾包膜下移植裸鼠肾包膜下移植实验是肿瘤细胞药敏体内实验最,10,染料排斥实验,原理是细胞死亡后膜通透性增加,染料通过细胞膜而使细胞着色,故通过计数未着色细胞可计算出药物的杀伤率。但由于某些受杀伤尚未死亡的细胞也不易着色,故假阴性率较高。另外在计数时主观的因素会出现较大的误差,目前较少应用。,染料排斥实验原理是细胞死亡后膜通透性增加,染料通过细胞膜而使,11,集落形成法,集落法(,Human Tumor Cell Cloning Assay, HTCA,),肿瘤组织由增殖和非增殖细胞组成,其中仅有 1具有旺盛的增殖能力,是肿瘤浸润扩散和复发的根源。 这种细胞具有形成细胞集落的能力,故又称为肿瘤干细胞。 测定肿瘤干细胞对药物的敏感性符合临床药物治疗的需要。,集落形成法集落法(Human Tumor Cell Clon,12,集落形成法方法学,双层琼酯法,:,底层加入,0.5%,的琼脂培养液, 上层加含肿瘤细胞悬液的,0.3 %,琼脂培养液。上层培养液供肿瘤细胞生长,下层防止细胞贴壁及成纤维细胞的过度生长。,玻璃毛细管法,: 培养基,0.6,ml,瘤细胞悬液,0.1,ml,抗癌药0.1,ml, 1,琼脂糖0.2,ml,加在一起混匀后向玻璃毛细管内加入,50,l,冷却凝固后置37二氧化碳培养箱内培养。,集落形成法方法学双层琼酯法:底层加入0.5% 的琼脂培养液,13,集落形成法的优点,抑制纤维母细胞的增殖,不受肿瘤细胞以外的细胞的影响。,下层滋养层可加入各种辅助分子,更利于肿瘤的生长。,直接测定药物对肿瘤细胞中最活跃的成分肿瘤干细胞的影响。,集落形成法的优点抑制纤维母细胞的增殖,不受肿瘤细胞以外的细胞,14,集落形成法的缺点,高纯度单细胞悬液的制备困难。,所形成的细胞集落并非都是肿瘤细胞集落。,成功率低,有一定的难度。,培养周期长,需10天左右。,集落形成法的缺点高纯度单细胞悬液的制备困难。,15,放射性同位素标记的核苷酸容易掺入,DNA,和,RNA,分子中,放射性同位素发灵敏度高,重复性好。,时间短,可较快地得到结果。,仪器设备要求高。,由于具有放射性,故操作时需要一定的防护措施。,废料需特别处理。,放射同位素法,3,H,的,射线能量低,分辨率高,半衰期长达,12年,3,H,标记胸腺嘧啶核苷(,3,HTdR),为最常用。,放射性同位素标记的核苷酸容易掺入DNA和RNA分子中仪器设备,16,3,HTdR,掺入法,用培养液调整细胞浓度为110,5,/,ml。,将此浓度的细胞接种于微量培养板,每孔100,l,每3孔为一组,加入100,l,含有化疗药的培养基,培养52小时,加入20,l,3,HTdR,实验结束后,吸弃上清,加入0.3胰蛋白酶消化细胞,用多头细胞收集器收集细胞。最后用液体闪烁计数仪测定每分钟脉冲数,(CPM),值。,3HTdR掺入法 用培养液调整细胞浓度为1105/m,17,四唑蓝比色法,(MTT,法,),原理,:,活细胞内线粒体脱氢酶能将四甲基偶氮唑盐转化为蓝紫色结晶物(,formazan),用二甲亚砜,(DMSO),溶解后,可在酶标仪上记录吸光度。,优点:1.操作简便,设备要求不高,时间短。,2.实验精确,重复性好,而且无主观人为,因素影响,临床符合率85。,3.成功率高,约为8090,四唑蓝比色法(MTT法)原理:活细胞内线粒体脱氢酶能将四甲基,18,MTT,法操作方法,用培养液调整细胞浓度为110,5,/,ml,后接种于微量培养板,每孔100,每组设三个平行孔,加入100,l,含有化疗药的培养基,置培养箱内培养68小时,加入20,l MTT,后再培养4小时,吸弃上清,每孔加二甲亚砜,200,l,用微量震荡器震荡,使结晶产物充分溶解,在自动酶标仪上比色,测出波长570,nm,处的吸光度,最后计算细胞杀伤活性。,MTT法操作方法 用培养液调整细胞浓度为1105/m,19,MTT,法注意事项,血供丰富的肿瘤组织在制取肿瘤单细胞悬液时,大量的红细胞影响测定,可用红细胞裂解液裂解红细胞。,有色的抗癌药物对吸光度有影响,可用同浓度的药物作为本底,去除药物的影响。,吸弃上清时要注意不要吸掉结晶物,一般要先离心,板底留约30,l,的培养基,MTT法注意事项血供丰富的肿瘤组织在制取肿瘤单细胞悬液时,大,20,谢 谢,!,谢 谢!,21,现今医学分为传统医学、基于“生物,-,医学模式”近代发展起来的西医，,20,世纪西医又发展到“社会,-,心理,-,生物医学”或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技大学、郑州大学等学校。 中医即中国传统医药学，是形成于数千年前的中国，是建立在人们与疾病长期斗争的经验总结及阴阳五行、八纲脏腑辨证基础上，运用朴素辩证法及思辨推理方法，认识机体、自然、疾病三者关系，发展起来的一门以“功能人”包括功能脏器为概念的独特的医学哲学理论体系。在治疗上，除了药物外，还有针灸、推拿气功、耳针等特殊疗法，它是世界传统医学中最完善的一种医学理论体系。它为人类尤其为中国人民健康和民族繁衍做出了巨大贡献。 西医学是最近三四百年来建立在解剖学、生物学及现代科学技术基础上、发展起来的一门以“解剖人、肉体人”为概念的、新兴的现代医学科学理论体系。主要采用科学实验方法，从宏观到微观，直至目前的分子基因层次水平，发展极为迅速，超过其它任何一门医学科学，成为世界医学史上的主流。 可见中西医学，一个是以“功能人”为概念的独特的哲学医学理论体系，一个是以“解剖人、肉体人”为概念的新兴的现代医学科学理论体系，二者都不是以完整人为研究对象的科学，从理论讲二者都不是科学的，势必影响各自发展。事实也证明这一切，中医长期停滞不前、疗效也不确实。西医尽管发展到目前的基因分子层次，但疾病发病率居高不下，对绝大部分疾病发病原因认识不清、发病机理弄不明白，治疗受到制约，在小小,SARS,、禽流感面前竟束手无策，在糖尿病、癌症、心脑血管疾病、尿毒症等相当多疾病面前更是不得不求助或借助中医治疗。一个是疗效不确实，一个是有些甚至相当多疾病无法治疗，这就是中西医学结合的缘由。然而，由于二者是两套理论、两股道上跑的车，风马牛不相及，从理论上讲就没有结合的可能，只是形式上的融合罢了。故出现西医对治疗不了的疾病只好求助中医，而中医则往往采用西医诊断中医治疗，以及中西治疗法一块用的局面。 至于循证医学、比较医学、后现代医学、行为医学等所谓“医学”，都称不上一门独立的医学科学，关于这一点在灵魂医学有关章节中将有相关点评。 总之，目前以中西医学为主的世界各种医学科学都存在不完整性的瑕疵，即都是以不完整的人为研究对象的医学科学，故不能解决目前存在于中西医学甚至人文社会科学史上一切疑难模糊问题，成为阻碍医学科学前进的羁绊。的确，要解决目前存在于中西医学甚至人文社会科学上一切疑难模糊问题，显然已完全超出了中西医学所涉及的范畴，我们必须跳出中西医学的理论框架，建立起一个新的医学理论体系,-,东方医学和西方医学（即西医）的融合形成现代系统医学。该体系所涉及的一切问题不管从广度上，还是从深度上，都应该远远超过现有的中西医学理论，并将现有中西医学理论纳入自己的理论框架范围之内。为了肩负起这一历史使命，原创人生、医学理论体系,灵魂医学,soul medicine,应运而生，她不但从宏观上或战略上圆满解释并解决了存在于人类医学及人文社会科学史上的一切疑难模糊问题，而且还能够使人们得以启迪人生，不得不重新认识人类自身、不得不重新认识人类赖以生存的这个多维世界。,医学化验,医学定义（,medicine,），是处理人健康定义中人的生理处于良好状态相关问题的一种科学，以治疗预防生理疾病和提高人体生理机体健康为目的。狭义的医学只是疾病的治疗和机体有效功能的极限恢复，广义的医学还包括中国养生学和由此衍生的西方的营养学。现在世界上医学主要有西方微观西医学和东方宏观中医学两大系统体系。医学的科学性在与应用基础医学的理论不断完善和实践的验证，例如生化、生理、微生物学、解剖、病理学、药理学、统计学、流行病学，中医学及中医技能等，来治疗疾病与促进健康。虽然东西方由于思维方式的不同导致研究人体健康与外界联系及病理机制的宏观微观顺序不同，但在不远的将来中西医实践的丰富经验的积累和理论的形成必将诞生新的医学,-,人类医学。 不同于现代医学，不同于传统中医， 金水医学诞生了，金水医学是以驱除病理，恢复生理为主张的全新医学，走出了人类医学的误区，治疗疾病的特色鲜明，不论是任何疾病都能做到从危为安，由重到轻的恢复办法。金水医学认识到人体是生命体，生命体有自己的强大的生理自我愈合功能，帮助生命体恢复自主作用才是治疗疾病的根本。针对当今现代文明病，现代疑难病，现代慢性病，亚健康，一体多病，取得了巨大的成功，治疗法则为“胃肠洁，气血流，玄府开，营卫昌”人生命体运动符合自然节律，最终达到人体生理增强，消灭疾病的目的。,编辑本段医学的分类,医学研究,医学可分为现代医学（即通常说的西医学）和传统医学（包括中医学、藏医学、蒙医学等）多种医学体系。不同地区和民族都有相应的一些医学体系，宗旨和目的不相同。印度传统医学系统也被认为很发达。 研究领域大方向包括基础医学、临床医学、检验医学、预防医学、保健医学、康复医学等。 基础医学包括：医学生物数学,医学生物化学,医学生物物理学,人体解剖学,医学细胞生物学,人体生理学,人体组织学,人体胚胎学,医学遗传学,人体免疫学,医学寄生虫学,医学微生物学,医学病毒学,人体病理学,病理生理学,药理学,医学实验动物学,医学心理学,生物医学工程学,医学信息学,急救学,护病学,新中心法则。 临床医学包括： 临床诊断学 实验诊断学,.,影像诊断学,+,放射诊断学,+,超声诊断学,+,核医诊断学* 临床治疗学 职能治疗学 化学治疗学 生物治疗学 血液治疗学 组织器官治疗学 饮食治疗学 物理治疗学 语言治疗学 心理治疗学 内科学 外科学 泌尿科学 妇产科学 儿科学 老年医学 眼科学 耳鼻喉科学 口腔医学 传染病学 皮肤医学 神经医学 精神病学 肿瘤医学 急诊医学 麻醉学 护理学 家庭医学 性医学 临终关怀学 康复医学 保健医学 听力学。,编辑本段医学的起源,手术治疗,中、西医学的起源大致相同。主要包括：救护、求食的本能行为。如动物受伤会舐其伤口、遇热会避入水中，人与动物一样有着本能救护。人类的求食本能在寻找食物时，逐渐发现了葱、姜、蒜、粳米、薏米等虽为食物或调味品，却具有治病作用；生活经验创造了医学。先古人类通过劳动制造出利器，从而产生了砭石、骨针等医疗器具，逐渐掌握了运用工具治疗疾病的经验。与此同时，人们发现活动肢体可以舒筋活络，强身健体，“导引术”、“五禽戏”的形成，也是古代人们积累生活经验后产生的保健养生观；医、巫的合与分。由于原始人受制于智力尚未开化，对自然界的变化以及宇宙间的一切反常现象，心存恐惧，难以做科学、合理的解释，因而误以为有超自然的力量主宰其中。故巫、医合流曾是中、西医学共有的一段历史。在中医学的历史进程中，“祝由”术沿袭数千年，属于元明临床“十三”科之一，但以医学为目的的解剖可追溯到公元,11,年,(,西汉王莽新朝三年,),，是中国古老的实证医学萌芽。由于儒、释、道三教合流所形成的中国文化格局，“重道轻器”衍生出的务虚倾向，重体悟而疏实证，必然缺少逻辑推理，致使中国的实证医学成就在日后难以与西方医学同日而语。古埃及医师运用念咒、画符和草药治病，前二者就是巫医。西医在古希腊时期就开始医巫分家，亚里士多德曾详细描述了动物的内脏和器官，古希腊医学最高成就的代表人物希波克拉底将唯物主义哲学运用于医学之中，在,论圣病,中说：“被人们称为神圣的疾病,(,指癫痫和一些精神患者,),，在我看来一点也不比其他病症更神、更圣，与其他任何疾病一样起源于自然的原因。只因这些病症状奇异，而人们对它们又一无所知，充满疑惑，故而将其原因和性质归之于神灵。”亚里士多德所创立的唯物主义医学体系，加快了医学科学化的进程；轴心时代中、西医学的峰巅之作。雅斯贝而斯曾说：“如果历史有一个轴心，那么我们就必须将这轴心作为一系列对全部人类都有意义的事件，,发生于公元前,800,至,200,年间的这种精神历程似乎构成了这样一个轴心。,非凡的事件都集中发生在这个时期。,并且是独立地发生在中国、印度和西方”。这一阶段，是东、西方哲学、科学、文化发展的重要时期。此时诸子蜂起，儒家、墨家、道家、法家学派林立，形成了空前绝后的学术繁荣局面，对中华文化的发展起了奠基作用；处在古典希腊文明的开创时期，出现了德谟克利特、费底亚斯、阿基米德、苏格拉底等哲人和智者。在东、西方科学和文化昌明的大背景下，,黄帝内经,和,希波克拉底全集,代表着中、西两座医学的峰巅之作便自然而然的诞生了。,内经,的问世，标志着中医学已从简单的临床经验积累，升华到系统的理论总结。关于,希波克拉底全集,，意大利著名医史学家卡斯蒂格略尼认为：“是自然科学几乎没有萌芽的时代，在医术上具有先进性的最宝贵的代表文献。希波克拉底学派的医学虽然在解剖学、生理学、病理学的知识上有缺陷，虽然只是很少而粗略地研究过动物，但是它主要是建立在临床实验和哲学推理的基础上，终能使医学提高到难以超过的高度。这是历史上最有意义的现象之一，并可能是最重要的，因为它说明通过经验，实际观察和正确的推理，可以得到极有价值的宝贵材料，,他的确解决了医学历史上具有决定性倾向的开端。”比较,黄帝内经,和,希波克拉底全集,，二者的理论建构有诸多相似之处：废巫存医、整体观念、调节平衡、哲学思辩、临床实践。其中,黄帝内经,强调以五脏为中心的整体观，从外测内，可以不依赖解剖形态学而照样诊治疾病。其理论体系是自洽的，难以突破；,希波克拉底全集,虽然没有系统的解剖学和生理学等基础知识，但却强调具体的解剖结构，为医学的实证开了先河。这些差异为中、西医学的日后分向而行埋下了伏笔。,医学健康系列精品课件,本文档下载后可以修改编辑，欢迎下载收藏。,现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的,22,