第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌,第一节 芽孢杆菌属,（,Bacillus,）,第二节 类芽孢杆菌属（,paenibacillus,）,第三节 梭菌属,（,Clostridium,）,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌第一节 芽孢杆菌属（Bacil,1,第一节 芽胞杆菌属（,Bacillus,）,芽胞杆菌属是一群,需氧、能形成芽孢的革兰阳性,大杆菌。 -,炭疽芽胞杆菌,，是引起动物和人炭疽的病原菌；,- 蜡状芽胞杆菌,的某些菌株可产生肠毒素，引致食物中毒；,其他大多为腐生菌,，主要存在于土壤、水和灰尘中，如枯草芽孢杆菌。,第一节 芽胞杆菌属（Bacillus） 芽胞杆菌,2,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,3,炭疽芽胞杆菌（,B. anthracis,）,炭疽芽胞杆菌俗称炭疽杆菌，是引起人类、各种家畜和野生动物炭疽（Anthrax）的病原。,炭疽芽胞杆菌（B. anthracis） 炭疽芽胞杆菌俗称,4,一、形态及染色特性,*,革兰阳性大杆菌，菌体平直,，两端平截。,* 在组织和血液中，单在或短链，经培养后形成长链，呈,竹节状,。,*,在组织中或含血液的培养基中可形成荚膜。芽孢在有氧条件下形成,，,位于菌体中央，不膨出菌体。无鞭毛。,一、形态及染色特性,5,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,6,二、培养特性,1.需氧菌或兼性厌氧，最适生长温度30-37，营养要求不高，普通培养基中即能生长良好。,强毒菌株形成灰白色不透,明、大而扁平、表面干燥；,无毒或弱毒菌株形成稍小,而隆起、表面较为光滑湿,润、边缘比较整齐的光滑,型菌落。,强毒株菌落,二、培养特性 强毒株菌落,7,2. 在血琼脂上一般不溶血，但个别菌株也可,轻微溶血。,2. 在血琼脂上一般不溶血，但个别菌株也可轻微溶血。,8,3.液体培养基中呈絮状沉淀生长,4.明胶穿刺培养，,能液化明胶,沿穿刺线向四周呈放射状生长,如倒松树状。,3.液体培养基中呈絮状沉淀生长,9,5.在含青霉素的培养基中，可形成串珠反应，与其它需氧芽孢杆菌区别。,串珠反应 ：在含青霉素0.5U/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串 。,5.在含青霉素的培养基中，可形成串珠反应，与其它需氧芽孢杆菌,10,三、,抵抗力,* 本菌,繁殖体,的抵抗力不强 ，同一般无芽孢杆菌。 常用消毒剂均能于短时间内将其杀死。,* 芽孢抵抗力较强，在干燥背光处可存活40年以上。煮沸1h或干热140 3h可杀灭芽孢，对碘敏感。,三、抵抗力 * 本菌繁殖体的抵抗力不强 ，同一般无芽孢杆菌,11,五、,抗原结构,1.荚膜抗原：,多肽，仅见于有毒菌株，与毒力和抗吞噬有关,2.菌体抗原：,多糖，与细菌毒力无关。性质稳定，经加热煮沸,甚至高压蒸汽处理，抗原性不被破坏。,在病畜皮毛或腐败脏器中经长时间煮沸特异性Ag依然存在，仍能与特异性抗体发生反应形成环状沉淀，称为,Ascoli,反应(沉淀反应)。,Ascoli,反应是用已知抗体来检测未知抗原。在小口径试管中先加入已知抗血清，然后将待检抗原小心地加在血清的表面，成为界面清晰的两层。数分钟后，两界面交界处出现白色沉淀环，为阳性反应。本试验常用做抗原定性。,3. 芽胞抗原,：,是芽胞的外膜和皮质组成，具有免疫原性。,五、抗原结构,12,六、致病性,本菌可引致各种家畜（牛、羊、鹿最易感）、野兽和人类的炭疽，草 食动物易感性最强，此菌主要通过消化道传染，也可经呼吸道及皮肤创伤或通过吸血昆虫传播。,此菌毒力主要与,荚膜和毒素,有关，荚膜可增强细菌抗吞噬能力，使之易于扩散；,炭疽毒素是造成感染、动物致病和死亡的主要原因，三种成分单独无毒性，只有EF或LF与PA结合时，才有致死或水肿效应。,六、致病性本菌可引致各种家畜（牛、羊、鹿最易感）、野兽和人类,13,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,14,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,15,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,16,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,17,七、微生物学诊断,1.细菌学检查,（）染色镜检：美兰、瑞氏等,大杆菌，两端平截，竹节状,（）分离培养：,用普通琼脂或血琼脂，低倍镜下，菌落边缘卷发丝。,（）纯培养:,镜检、串珠试验、生化试验,（）动物试验：,将检验材料制成悬液或纯培养物,给小鼠注射，24-36h,小鼠死于败血症,。,七、微生物学诊断 1.细菌学检查,18,2.血清学检查,（）Ascoli沉淀反应,用加热抽提待检炭疽菌体多糖抗原与已知抗体,进行的沉淀试验。,（）间接血凝试验,间接血凝试验(IHA)是将抗原(或抗体)包被于红细胞表面，成为致敏的载体，然后与相应的抗体(或抗原)结合，从而使红细胞拉聚在一起，出现可见的凝集反应。,（3）串珠荧光抗体检查,（4）琼脂扩散试验,（5）PCR检测荚膜或毒素基因,2.血清学检查,19,炭疽痊愈动物可获得坚强的免疫，再次感染者很少,第号炭疽芽胞苗、无毒炭疽芽胞苗预防接种,高免血清进行紧急预防接种,青霉素作为首选药物进行治疗,八、免疫防治,八、免疫防治,20,蜡状芽胞杆菌（B.cereus）,蜡状芽胞杆菌（B.cereus）,21,第三节 梭菌属（,Clostridium,）,该属细菌多数,严格厌氧,，革兰染色,阳性,，能,形成芽孢,，芽孢直径往往比菌体粗，使菌体膨胀成梭状，但并非梭菌属的细菌均为梭状，如破伤风梭菌，芽孢位于菌体顶端，菌体呈鼓槌状。,该属细菌能产生多种外毒素和侵袭性酶，致病性强。,产气荚膜梭菌,、腐败梭菌、诺维梭菌、肉毒梭菌和,破伤风梭菌,等。,第三节 梭菌属（Clostridium） 该属细菌多数严格,22,一、产气荚膜梭菌（,Cl. perfringens,）,旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。一定条件下，可引起多种严重疾患，局部组织出现坏死、水肿、产气。,一、产气荚膜梭菌（Cl. perfringens）旧名魏氏梭,23,主要技术内容,引起多种动物的感染、猝死症,主要技术内容引起多种动物的感染、猝死症,24,一、形态及染色特征,菌体直杆状 ，革兰染色阳性。,一般条件下不形成芽胞，在无糖培养基上可形成。,芽胞大而卵圆，位于菌体中央或近端，使菌体膨胀。多数菌株可形成荚膜，无鞭毛。,无芽孢 有芽孢 有荚膜,一、形态及染色特征 无芽孢,25,本菌厌氧培养，但对厌氧程度的要求并不严 ，在普通培养基 上可生长，若加葡萄糖、血液，则生长更好。菌落多为圆形、,光滑、隆起、灰白色的,圆屋顶样,，也可形成圆盘形、边,缘成锯齿状、表面有辐射状条纹的大菌落。,生长非常迅速,，43 C，快速移植法可帮助此菌的分离。,厌氧肉肝汤中培养，呈均匀浑浊，并,产生大量气体,。,二、培养特性,二、培养特性,26,血平板上，多数菌株有,双层溶血环,，内环,完全溶血，外环不完全溶血。,血平板上，多数菌株有双层溶血环，内环,27,三、,生化特性,肉渣汤培养基,牛乳培养基,高糖琼脂培养基,接种产气荚膜杆菌,本菌最突出的生化特性是对牛乳培养基的“,暴烈发酵,”。,产生大量气体使凝块破裂成多孔海绵状，严重时被冲成数段或被喷出管外，是本菌突出的生化特性。,三、生化特性 肉渣汤培养基牛乳培养基高糖琼脂培养基接种,28,A型,：,人气性坏疽和食物中毒,B型,：,羔羊痢疾,C型,：,绵羊猝狙,D型,：,牛肠毒血症,E型,：,犊牛、羔羊肠毒血症,四、,致病性,A型：人气性坏疽和食物中毒 四、致病性,29,1. 直接涂片镜检：,G,+,大杆菌，并有荚膜,2. 分离培养：,接种血平板，有双层溶血环,3.纯培养：,引起牛奶暴烈发酵,4. 动物试验：,小鼠、家兔或鸽,5. 肠毒素检查,：,取回肠内容物加适量灭菌生理盐水稀释，经离心沉淀后取上清液分成两份 ，一份不加热，一份加热，分别静脉注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加热组动物常于数分钟至数小时内死亡，而加热组动物不死亡。进一步用毒素中和试验定型。,目前用多重PCR方法用于毒素基因检测，更加快速方便。,五、,微生物学诊断,1. 直接涂片镜检：G+大杆菌，并有荚膜五、微生物学诊断,30,API 20A 生化鉴定系统试验结果,注：+：阳性 ； -：阴性,项,目,及,结,果,靛基质 尿素 葡萄糖,- - +,4,甘露醇 乳糖 蔗糖, ,- + +,6,麦芽糖 水杨素 木糖, ,+ - -,1,阿拉伯糖 明胶 七叶灵,- + -,2,甘油 纤维二糖 甘露糖,- - +,4,松三糖 棉子糖 山梨醇, ,- - +,4,鼠李糖 海藻糖 触酶, ,- + -,2,芽胞 革兰氏染色 球菌,- + -,2,API 20A 生化鉴定系统试验结果 注：+：阳性,31,图3-1 分离株、2、毒素基因的四重PCR及、肠毒素单基因PCR检测结果,Fig. 3-1 PCR amplification results of alpha, beta, epsilon, iota, beta2 and CPE toxins of the isolates.,泳道1: B6121,cpa、etx,条带; 2: E8084,cpa、iap,条带; 3: 空白对照; 6: C 4989,cpa,、,cpb2,条带; 4,5,7-13:分离株,扩增条带。,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,32,肉毒梭菌,（,Cl.botulinum,),1、形态及染色特性：菌体直杆状，两端钝圆，单在或成双。革兰氏阳性。周鞭毛。,芽胞位于菌体近端，使菌体膨胀成球拍状。,肉毒梭菌（Cl.botulinum),33,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,34,第14章 革兰阳性产芽孢杆菌课件,35,2、培养特性：专性厌氧生长。生长温度为30-37，但产毒素的温度为25-30。,A、普通琼脂：可生长。,B、绵羊血琼脂平板：菌落为园形扇状、裂叶状或根状边缘。扁平或隆起，透明或半透明，灰色至灰白色。,溶血。,3、生化特性：变化较大，同一型不同菌株间不同。,4、抗原性：根据毒素的不同，可分为A、B、C、D、E、F、G 7个型。,2、培养特性：专性厌氧生长。生长温度为30-37，但产毒素,36,5、致病性：,A、B、E、F引起人食物中毒。,A、B引起马、牛、水貂中毒。,C引起禽、马、牛等中毒。,5、致病性：,37,6.微生物学诊断,主要做毒素检查，材料+1/10的10胰酶,腹腔接种小鼠，若有毒素，24h发病,小鼠主要表现为坚毛、四肢瘫痪、呼吸困难、呼吸呈风箱式，腰部凹陷，宛如蜂腰，最终死于呼吸麻痹。,37 60min,6.微生物学诊断37 60mi,38,破伤风梭菌（,Cl.tetani,）,破伤风梭菌是引起人畜破伤风的病原。具有芽孢，其芽孢广泛存在于各类土壤中。本病以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征，此菌也称为强直梭菌。,破伤风梭菌（Cl.tetani） 破伤风梭菌是,39,一、,形态,G+，两端钝圆、细长的杆菌 ，无荚膜，多具周鞭毛,而能运动。在动物体内外均能形成圆形芽胞，位于,菌体一端，呈鼓槌状 。,一、形态,40,二、,培养特性,严格厌氧菌,，接触氧后很快死亡。普通培养基上即能生长，形成不规则菌落，中心紧密、四周疏松似羽毛。,不易获得单个菌落,，扩散成薄膜状覆盖整个平板表面。用高浓度琼脂可抑制其扩散生长。,二、培养特性严格厌氧菌，接触氧后很快死亡。普通培养基上,41,此菌产生两种毒素,：,1. 破伤风痉挛毒素：,引起神经兴奋性的异常增高和骨骼肌痉挛。,2. 破伤风溶血素：,不耐热，对氧敏感，可溶解马及家兔的红细胞，与破伤风梭菌的致病性无关。,三、致病性,此菌产生两种毒素：三、致病性,42,四、微生物学诊断,破伤风临床症状具有特征性，一般不需微生物学诊断。如有特殊需要，可采取创伤部的分泌物或坏死组织进行细菌学检查。,四、微生物学诊断 破伤风临床症状具有特征性，一般不需微生物学,43,主动免疫预防可用明矾沉淀破伤风类毒素,破伤风抗毒素血清可用于紧急预防,五、免疫防治,五、免疫防治,44,复习思考题,1.炭疽杆菌的主要培养特性有哪些？,2.如何进行炭疽病的微生物学诊断？,3.产气荚膜梭菌的主要生化特点。,4.产气荚膜梭菌分型及其对动物的致病性?,5.破伤风梭菌的主要生物学特性。,复习思考题1.炭疽杆菌的主要培养特性有哪些？,45,