酶联免疫吸附测定法开发及应用课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,菌联兔蜜吸魔测定法,菌联兔蜜吸魔测定法,1,酶联免疫吸附测定法,概述,抗原合成,抗体制备,ELISA检测方法建立,酶联免疫吸附测定法,2,第一节枫述,1.1.简介,免疫检测技术发展历程,中国,国际(欧美为主),兴起于20世纪70年代,现仍普遍使.兴起于20世纪60年代,现已基本退,用于县级以上E,出临床应用:,放射兔疫法,产品处于衰退期:,品生命周期已终结,厂商试剂与仪器共同开发,试剂基本.厂商试剂和仪器共同开发,试剂基本,系列化,系列化。,兴起于20世纪80年代,现普遍使用.兴起于20世纪70年代,现仍在临床,于各级临床机构,为我国临床免疫诊断应用:,酶联免疫法,的基本方法,产品处于衰退期:,产品处于成熟期,厂商试剂与仪器共同开发,试剂基本,CELISA),厂商试剂与仪器共同开发,试剂尚未系列化,系列化。,导入于20世纪90年代,现个别较大.兴起于20世纪80年代,现已被临床,医院开展个别项目,普遍使用,成为临床免疫诊断的支柱方,化学发光免疫法.产品处于导入期或成长期:,(C LIA,无厂商开发生产,完全依赖进口。,品处于成熟期,厂商试剂与仪器共同开发,仪器自动,化程度高,试剂系列化状态好,第一节枫述,3,第一节概述,1.2.基本原理,免疫分析是建立在标记抗原(g和非标记抗原(Ag与限量的特异抗体(Ab),的竞争结合反应,这种竞争作用构成了免疫分析的理论基础。,在这种测定方法中有3种必要的试剂,固相的抗原或抗体(免疫吸附剂),酶标记的抗原或抗体(标记物),酶作用的底物(显色剂),第一节概述,4,1.3.免疫分析特点:,灵敏度高,通常生化分析的最小检出值可达到10-3-10-g水平,而免疫分析最小检,出值可达到10-9-10-12g水平,近年来检测方法的灵敏度向着10-15g发展,比一般生化分析提高1000-100000,特异性:,由于抗原抗体反应的高度特异性,免疫分析具有很强的特异性。一种物,质(如激素)的免疫分析能辨别区分结构非常相似的物质。,操作简便:,主要是免除了烦琐的样品前处理,适用于大量样品筛选、分析。,仪器简单,应用广泛,1.3.免疫分析特点:,5,14.ELSA技术流程图:,抗原合成与鉴定,抗体制备,ELSA方法建立,半抗原修饰,动物免疫,基本原理,半抗原与载体偶联,多克隆抗体制备,分类,人工抗原鉴定,单克隆抗体制备,操作流程,14.ELSA技术流程图:,6,第二节抗原合成,21.基本概念,(1)抗原:能够剌激机体产生免疫反应的,一切具有抗原性的物质。,(2)抗原决定簇:指位于抗原分子表面或其它部位的具有一定组成和结构的,特殊化学基团,它能与免疫系统中的淋巴细胞上的受体及相应的抗体分子结,合。多数天然抗原具有多个抗原决定族,不冋的抗原其抗原决定族不同,也,有共冋抗原决定族的现象一交叉反应的原因。,22.抗原特性,(1)免疫原性:能够诱导机体产生抗体或形成免疫回答反应的特性,2)反应原性:能够与其诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性。,3)特异性:由特异的抗原决定族决定,一种抗原只能诱发一种特异的免疫,应答,产生特异的抗体或致敏淋巴细胞,且只能与与其诱导产生的,抗体或致敏淋巴细胞发生反应,第二节抗原合成,7,23.构成抗原的基本条件,1)异物性:即不是机体正常组织成分,2)化学性:分子量大,分子有一定的特殊化学结构。,3)完整性:完整地进入免疫活性细胞所在的场所。,24抗原的基本类型,)天然(半)抗原:天然的生物、细胞及天然产物-颗粒抗原和可溶性抗原,2)人工抗原:人工化学改造后的抗原,3)合成抗原:经过化学合成的具有抗原性质的分子,主要是氨基酸的聚合,物,23.构成抗原的基本条件,8,2.5抗原的制备一天然抗原,颗粒抗原:包括人、动植物、微生物和寄生虫的细胞或细胞的组成结构,物(壁、膜、鞭毛)。,收集含有目标抗原细胞的,制备过程:组织,或通过细胞培养等,离心或过滤收集细胞或,方法扩增细胞的数量,者细胞的组成结构物,可溶性抗原:蛋白质、多糖、细茵毒素等,可存在细胞内,或胞外,胞外:收集胞外分泌液或细胞培养液,然后进行分离、提取和纯化,胞内:细胞破碎、释放抗原,然后进行分离、提取和纯化。,2.5抗原的制备一天然抗原,9,2.5蛋白质抗原分离与纯化一细胞的破碎,研磨,机械破碎,超声,细胞破碎,千燥,非机械破碎,酶溶法,纯化与浓缩,化学渗透,硫酸铵盐祈,粗純,聚乙二醇,有机溶剂沉淀法,精制,离子交换色谱,凝胶色谱,亲和色谱,吸附色谱,2.5蛋白质抗原分离与纯化一细胞的破碎,10,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,11,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,12,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,13,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,14,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,15,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,16,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,17,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,18,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,19,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,20,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,21,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,22,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,23,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,24,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,25,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,26,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,27,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,28,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,29,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,30,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,31,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,32,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,33,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,34,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,35,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,36,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,37,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,38,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,39,酶联免疫吸附测定法开发及应用课件,40,