骨髓细胞微核实验课件

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,L o g o,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,L o g o,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,骨髓细胞微核实验,骨髓细胞微核实验,1,微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。,微核,(,Micronucleus,MCN),是指细胞中主核之外的颗粒，染色与细胞核一致，相当于细胞直径的,1/20-1/5,，呈圆形或杏仁状。是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。,实验原理,微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检,2,机理：,1,有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,2,断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,结论：,微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点,实验原理,机理：实验原理,3,无核细胞,红细胞,有核细胞中,微核难与正常核分叶,及核突出物区别,微,核,实,验,无核细胞红细胞有核细胞中微,4,红细胞的分化成熟过程,红细胞的分化成熟过程,5,骨髓细胞微核实验课件,6,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成,7,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,MCN多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色,如PCE/NCE0.,冲洗：蒸馏水冲洗，晾干,固定：甲醇固定10min, 需要晾干；,具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初期时给予可致畸胎。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。,如PCE/NCE0.,本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示.,NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。,是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。,本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示.,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核,染毒方法（30h两次给药法）：两次给受试物间隔24h，第二次给药后6h取材,2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,8,环磷酰胺（,CTX,）,最常用的烷化剂类抗肿瘤药。,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。,具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初期时给予可致畸胎。,用药后,24-30,小时，骨髓中微核形成达峰。,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤,8,9,结果,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核,示小鼠骨髓正常嗜多染红细胞,9结果示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核示小鼠骨髓正常嗜多染,9,10,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,10示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,10,11,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核,11示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核,11,Giemsa,染色,PCE,胞质内含有核糖体，染色呈灰蓝色；,MCN,多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色,NCE,的核糖体已消失，被染成淡桔红色。,NCE,PCE & MCN,Giemsa染色PCE胞质内含有核糖体，染色呈灰蓝色；MCN,12,实验目的,用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型,观察小鼠骨髓嗜多染红细胞（,PCE,）微核,实验目的用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型,13,【Animal】,小鼠是微核试验的常规动物，通常用,7,12,周龄，体重,18,20g,的小鼠。,【Reagents 】,小牛血清,Giemsa,染液,环磷酰胺,实验动物及试剂,【Animal】实验动物及试剂,14,实验分组和染毒方法,环磷酰胺,40mg/kg,模型组,等体积溶剂,对照组,染毒方法（,30h,两次给药法）：两次给受试物间隔,24h,，第二次给药后,6h,取材,实验分组和染毒方法环磷酰胺40mg/kg 模型组等体积溶剂对,15,处死：小鼠颈椎脱臼处死；,取股骨：防止出血；,取骨髓：小牛血清,1,滴,推片：,30,度角；,晾干：一定要干；,固定：甲醇固定,10min,需要晾干；,染色：,Gimesa,染液染色（,1015min,）,冲洗：蒸馏水冲洗，晾干,阅片,:,观察微核。,染毒后操 作步骤,处死：小鼠颈椎脱臼处死；取股骨：防止出血；取骨髓：小牛血清1,16,推 片 方 法,推 片 方 法,17,观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域,油镜下观察计数,多染红细胞（,PCE,）呈灰蓝色，正染红细胞（,NCE,）呈橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。,计数,1000,个,PCE,中含微核的,PCE,数，并且计数,200,个细胞中,PCE,与,NCE,的比值。,微核率（,）,=,含微核,PCE,细胞数,PCE,细胞总数,1000,实验方法和步骤,观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域微核率（）,18,实验结果,组别,动物数,受检,PCE,总数,含微核,PCE,数,微核率,阴性对照组,模型组,实验结果组别动物数受检PCE总数含微核PCE数微核率阴性对照,19,结果分析与评价,本试验中只计数,PCE,中微核，微核率以千分率表示,.,PCE/NCE,为评价细胞毒性的指标：,正常,PCE/NCE,比值约为,l(,正常范围为,0.6,1.2),；,如,PCE/NCE,0.1,，则表示,PCE,形成受到严重抑制；,如,PCE/NCE,0.05,，则表示受试化学毒物的剂量过大，试验结果不可靠。,结果分析与评价本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示,20,Thank You !,Thank You !,环磷酰胺,是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初期时给予可致畸胎。,如PCE/NCE0.,染毒方法（30h两次给药法）：两次给受试物间隔24h，第二次给药后6h取材,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,固定：甲醇固定10min, 需要晾干；,2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,冲洗：蒸馏水冲洗，晾干,MCN多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色,典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。,副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。,如PCE/NCE0.,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,环磷酰胺40mg/kg,固定：甲醇固定10min, 需要晾干；,如PCE/NCE0.,如PCE/NCE0.,染毒方法（30h两次给药法）：两次给受试物间隔24h，第二次给药后6h取材,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,环磷酰胺40mg/kg,1，则表示PCE形成受到严重抑制；,是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成,【Reagents 】 小牛血清,Thank You !,NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。,具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初期时给予可致畸胎。,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。,是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。,如PCE/NCE0.,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,用药后24-30小时，骨髓中微核形成达峰。,Thank You !,典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,环磷酰胺40mg/kg,染毒方法（30h两次给药法）：两次给受试物间隔24h，第二次给药后6h取材,如PCE/NCE0.,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,如PCE/NCE0.,2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。,固定：甲醇固定10min, 需要晾干；,如PCE/NCE0.,小鼠是微核试验的常规动物，通常用712周龄，体重1820g的小鼠。,NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.,计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。,如PCE/NCE0.,油镜下观察计数,本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示.,如PCE/NCE0.,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,用药后24-30小时，骨髓中微核形成达峰。,1，则表示PCE形成受到严重抑制；,冲洗：蒸馏水冲洗，晾干,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,MCN多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色,观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域,环磷酰胺40mg/kg,在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成,典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。,1，则表示PCE形成受到严重抑制；,本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示.,副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。,如PCE/NCE0.,用药后24-30小时，骨髓中微核形成达峰。,油镜下观察计数,2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中,NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。,环磷酰胺,1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中,示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核,是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。,固定：甲醇固定10min, 需要晾干；,微核(Micronucleus,MCN)是指细胞中主核之外的颗粒，染色与细胞核一致，相当于细胞直径的1/20-1/5，呈圆形或杏仁状。,谢谢观看！,环磷酰胺正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.示小鼠骨,