需氧革兰阳性杆菌课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,需氧革兰阳性杆菌,芽胞杆菌属,Bacillus,李斯特菌属,Listeria,丹毒斯菌属,Erysipelothrix,加德纳菌属,Gardnerella,需氧芽胞杆菌属（,Bacillus,）,48,个种,与医学有关,5,个种,炭疽芽胞杆菌（,B.anthracis,）,蜡样芽胞杆菌（,B.cereus,）,蕈状芽胞杆菌（,B.mycoides,）,巨大芽胞杆菌（,B.megaterium,）,苏云金芽胞杆菌（,B.thuringiensis,）,1,需氧革兰阳性杆菌芽胞杆菌属Bacillus需氧芽胞杆菌属（B,临床意义,引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽、败血性炭疽，烈性传染病,死亡率极,致病因子：,荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散,炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子,病后可获得持久免疫力,炭疽芽胞杆菌,2,临床意义引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭疽、肠,炭疽芽胞杆菌,革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央，多在有氧条件下形成，,25,30,，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，,尸体严禁解剖,3,炭疽芽胞杆菌革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、无,普琼平板：灰色、粗糙型菌落；卷发状边缘（低倍镜下）,BAP,：不溶血,NaHCO,3,BAP,：,有毒株产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状,(,鉴别要点,),无毒株,粗糙型菌落,培养特性,肉汤培养基：絮状沉淀,明胶,3718,24h,表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。,4,普琼平板：灰色、粗糙型菌落；卷发状边缘（低倍镜下）培养特性肉,生化反应,葡萄糖,+,、麦芽糖,+,、蔗糖,+,、,卵磷脂酶弱,+,、触酶,+,硝酸盐还原试验,+,、,VP,、吲哚、硫化氢、柠檬酸盐、尿素,明胶液化,胨化牛乳：在牛乳中生长,2,4,天后牛乳凝固并缓慢胨化,5,生化反应葡萄糖+ 、麦芽糖+ 、蔗糖+、5,抗原,菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体反应，称,Ascoli,热沉淀反应,荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关,芽胞抗原：,炭疽毒素,Anthrax toxin,： 由保护性抗原、致死因子、水肿因子形成。,6,抗原菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性不高，病兽脏器皮毛,抵抗力,耐热、耐干燥,对氧化剂敏感,对青霉素、磺胺类抗生素敏感,7,抵抗力耐热、耐干燥7,微生物学检查,标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死蓄。,标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直接分离培养,8,微生物学检查标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊,痰、呕吐物、,CSF,及炎症分泌物,2%,兔血清肉汤快速增菌,374h,荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色,G,染色,初步报告,0.2ml,注射小白鼠腹腔，,8h,后解剖,涂片,G,染色、荚膜染色,初步报告,快速检验程序,核酸检测,Ascoli,试验,皮毛、腐败脏器等,9,痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌374,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,皮毛、腐败脏器等,血液,以,NG,制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP,或戊烷脒平板,2%,兔血清肉汤,4,8h,G,染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,分离培养检验程序,法定报告传染病，发现疑是病例应于,24,小时内上报,CDC,10,生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验皮毛、腐败脏器等血液以N,戊烷脒多粘菌素琼脂,基础培养基,25g/L,戊烷脒,:,杀灭利什曼原虫等寄生虫,3000IU/L,多粘菌素,2%,脱纤维羊血,11,戊烷脒多粘菌素琼脂 基础培养基25g/L戊烷脒:,检验方法,涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞,初步报告,荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验,核酸检测：核酸杂交,分离培养：,BAP,或戊烷脒多粘菌素,B,等选择性培养基。,2%,兔血清肉汤增菌分离培养,12,检验方法涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽,菌落特征,形态染色,生化试验,:,表,13,1,串珠试验,:,接种于含青霉素,(0.05,0.5U/ml),的肉汤中，,37 6h,，大而均匀成串的圆球状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，类炭疽无此现象,鉴定试验,13,菌落特征鉴定试验13,接种于含青霉素,5,、,10,、,100U/ml,琼脂平板，,3724h,生长 受抑制不生长,串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,青霉素抑制试验,串珠形成区,14,接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，兔血琼脂平板,噬菌体裂解试验：,AP631,炭疽噬菌体,NaHCO,3,毒力试验：,接种于含,0.5%NaHCO3,和,10%,马血清的平板，,10%CO2,、,37,、,24,48h,，有毒株形成荚膜,黏液型菌落，无毒株不形成荚膜,粗糙型菌落,毒素动物试验：,小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,植物凝集素试验：,荧光或酶标记,PHA,与菌体多糖反应,Ascoli,热沉淀试验,：,可作追溯性诊断,其它实验,15,噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体其它实验15,临床意义,食物中毒：,含菌量达,10,5,/g,以上，夏、秋季多见，中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,呕吐型,耐热肠毒素,腹泻型,不耐热肠毒素,全眼球炎（外伤后）,心内膜炎、败血症和脑膜炎,蜡样芽胞杆菌,Bacillus cereus,16,临床意义食物中毒：含菌量达105/g以上，夏、秋季多见，中毒,蜡样芽胞杆菌,Bacillus cereus,形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆、有芽胞、周鞭毛、无荚膜,培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度,3035,，营养要求不高。,普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽,BAP,有,溶血,卵黄平板,生长迅速，培养,3h,后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,17,蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus形态：革兰阳性,生化反应,葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等,卵磷脂酶,+,、,VP,胨化牛乳、液化明胶，,多次传代后生化特性常可改变,18,生化反应葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等18,微生物学检查,呕吐物、残留食物等,活菌计数,接种,BM,BAP,卵黄琼脂平板,371824h,直接涂片染色镜检,动物试验,生化反应,血清凝集,报告结果,19,微生物学检查呕吐物、残留食物等活菌计数接种371824h,结果解释,因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,从食物中分离出菌数,10,5,CFU/g,，提示本菌活跃生长，构成潜在危险,从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和,(,或,),呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,20,结果解释因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以,三、枯草芽胞杆菌,21,三、枯草芽胞杆菌21,生物学性状,形态染色,革兰阳性大杆菌、两端钝圆,有芽胞、无荚膜、有鞭毛,22,生物学性状形态染色革兰阳性大杆菌、两端钝圆22,培养特性,BM,：灰白色、不透明、干燥、锯齿状粗糙大菌落,BAP,：,溶血大菌落,23,培养特性BM：灰白色、不透明、干燥、锯齿状粗糙大菌落23,生化反应,触酶,+,葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖,串珠试验,卵磷脂酶,24,生化反应触酶+24,炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别,鉴别项目 炭疽芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 蜡样及其他芽胞杆菌,形态 菌体两端平截、长链 两端钝园、短链 两端钝园、短链,荚膜 多肽荚膜 ,动力 ,+ +,菌落 卷发状，有毒株为,M,型 锯齿状、,R,型 蜡样或,R,型,肉汤生长 絮状沉淀、上层清 形成菌膜 均匀混浊有菌膜,卵磷脂酶,+,+,溶血反应 不溶或微溶血,溶血,溶血,Ascolis,试验,+, ,串珠试验,+, ,青霉素抑制试验,+, ,植物凝集素试验,+, ,荚膜肿胀试验,+, ,荧光抗体染色,动物毒力试验,+, 蜡样芽胞杆菌的肠毒素可致小鼠等动物发病致死，但不产生荚膜，其他需氧芽胞杆菌（）,噬菌体裂解试验,+, ,25,炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别 鉴别项目,李斯特菌属,产单核细胞李斯特菌,红斑丹毒丝菌,26,李斯特菌属产单核细胞李斯特菌26,一、产单核细胞李斯特菌生物学性状,革兰阳性短小杆菌成双排列,有鞭毛（,1820,有动力；,37,动力缓慢），无芽胞，无荚膜,4,可生长,BAP,：灰白色菌落，有狭窄的,溶血环,半固体培养基：倒伞形生长,27,一、产单核细胞李斯特菌生物学性状革兰阳性短小杆菌成双排列2,生化反应,发酵多种糖类,硝酸盐还原试验,甲基红,+,V,P,试验,+,抵抗力,耐碱不耐酸,对热敏感,对多种抗生素敏感（首选氨苄青霉素）,对磺胺、杆菌肽、多粘菌素耐药,28,生化反应发酵多种糖类抵抗力耐碱不耐酸28,临床意义,主要引起脑膜炎、败血症,传播途径：粪口途径，胎盘和产道,致病因子：溶血素和菌体表面成分,29,临床意义主要引起脑膜炎、败血症29,微生物检查,标本,涂片革兰染色镜检,荧光抗体染色,动力检查,（,25,，,37,）,血液,肉汤增菌,脑脊液沉淀物,咽喉拭子、组织、粪便冷增菌,接种羊血琼脂平板,生化反应,血清学试验,动物试验,30,微生物检查标本涂片革兰染色镜检荧光抗体染色动力检查血液肉汤增,二、红斑丹毒丝菌,革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜,厌氧或微需氧,BAP,：形成两种菌落,光滑型小菌落和粗造型大菌落。,发酵葡萄糖及乳糖、液化明胶、产生硫化氢,主要引起家畜感染及人类丹毒,31,二、红斑丹毒丝菌革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜31,加德纳菌属,阴道加特纳菌,32,加德纳菌属阴道加特纳菌32,生物学性状,多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌龄和菌种而定：临床株,G+,，保存株,G,），无芽胞、无荚膜、无鞭毛,兼性厌氧，营养要求高，,BAP,：可有,溶血,葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,氧化酶、触酶,对青霉素类敏感、对磺胺类耐药,33,生物学性状多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌龄和菌种而定,临床意义,与非特异性阴道炎（,BV,）有关,BV,是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧菌为主的细菌取代，同时伴有阴道分泌物性质改变的一组综合征。,主要病因为阴道内乳酸杆菌大量减少，伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化球菌及支原体大量增殖。,34,临床意义与非特异性阴道炎（BV）有关34,微生物学检查,分泌物（阴道、宫颈）,涂片染色镜检,分离培养（,5%,人血平板）,溶血菌落,纯培养（,5%,人血平板）,触酶、氧化酶（）,初步报告,GV,的主要鉴定试验,最后报告,35,微生物学检查分泌物（阴道、宫颈）涂片染色镜检分离培养（5%人,本章要点,概念：串珠试验、,Ascoli,热沉淀试验、青霉素抑制试验、,NaHCO3,毒力试验,炭疽芽胞杆菌所致疾病与致病机理、微生物学诊断方法与判断依据,36,本章要点概念：串珠试验、 Ascoli热沉淀试验、青霉素抑制,思考题,如何鉴定炭疽杆菌与非炭疽杆菌？,37,思考题如何鉴定炭疽杆菌与非炭疽杆菌？37,