溶血性贫血的实验室检查课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,溶血性贫血的分类,按发病机制分类,1.,RBC,内在因素（遗传性/获得性）,RBC,膜缺陷：遗传球、,PNH,RBC,酶缺陷：,G-6PD,缺乏症,珠蛋白异常（肽链不平衡）：海洋性贫血、异常血红蛋白病,2. RBC,外在因素（获得性）,免疫性溶贫:,AIHA 、,新生儿溶血症,、,药物诱发红细胞相关抗体,机械损伤性：,DIC 、 TTP、,人造瓣膜,感染：疟疾,物理因素：灼伤,毒素：蛇毒,脾亢: 单核巨噬细胞功能亢进,溶血性贫血的分类 按发病机制分类,1,溶血性贫血的分类,按溶血发生部位分类（,RBC,破坏场所）,血管内溶血：,RBC,在血管内破坏,见于,DIC、,机械性微血管病变、烧伤、输血、,PNH,血管外溶血：,RBC,在单核-吞噬细胞系统吞噬或破坏,AIHA,，遗传性球形细胞增多症,溶血性贫血的分类按溶血发生部位分类（RBC破坏场所）,2,溶血性贫血,第一步 确定是否有溶血（筛查检测）,1.,红细胞破坏增加,2.,红细胞代偿性增生,第二步 哪一类溶贫（病因检测）,溶血性贫血第一步 确定是否有溶血（筛查检测）,3,一、溶血性贫血的筛查检测,一、溶血性贫血的筛查检测,4,（一）、红细胞破坏增加,RBC,寿命测定,51,Cr,同位素标记,参考值：2532天,半衰期15天，说明有溶血存在,（一）、红细胞破坏增加RBC寿命测定,5,2.,血浆游离血红蛋白测定（,plasma free hemoglobin）,【,参考值,】,：,50mg/L,【,意义,】,：血管内溶血时明显增高,血管外溶血时正常或轻度升高,2.血浆游离血红蛋白测定（plasma free hem,6,3.,血清结合珠蛋白 （,haptoglobin,，,Hp）,【,参考值,】,：,0.7,1.5 g/L,【,临床意义,】,：,Hp,减少，提示溶血存在，血管内溶血时显著减低,Hp,增加，提示急慢性感染、恶性肿瘤、创伤、风湿性关节炎、,SLE,等,鉴别肝内外阻塞性黄疸,肝内阻塞性黄疸显著减少或缺乏,肝外阻塞性黄疸正常或增高,3.血清结合珠蛋白 （haptoglobin， Hp）【参,7,【临床意义】 阳性提示PNH。,【参考范围】 外周血中CD55，CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5,主要取决于红细胞表面积与体积之比。,【临床意义】 阳性提示PNH。,反之，抵抗力较小（即脆性较大）。,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。,脆性增高 遗传性球形红细胞增多症,血清结合珠蛋白 （haptoglobin， Hp）,红细胞孵育渗透脆性试验,常见于骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫等,抗人球蛋白是完全抗体，可与多个红细胞表面不完全抗体结合，使红细胞相互连接起来出现凝集现象，称为抗人球蛋白试验阳性。,（二）、红细胞代偿增生,外周血红细胞形态改变,【参考值】 未孵育 50%溶血4.,免疫性溶贫: AIHA 、新生儿溶血症、药物诱发红细胞相关抗体,血浆游离血红蛋白增高，结合珠蛋白(Hp)降低，血红蛋白尿及尿中出现含铁血黄素等,可能是纺锤体的残余物或是胞质中脂蛋白变性所致。,GPI锚连蛋白缺失是由于体细胞发生X连锁的PIG-A基因突变造成的。,第一步 确定是否有溶血（筛查检测）,4.,尿含铁血黄素试验（,Rous test,）,肾小管上皮细胞吸收血红蛋白，代谢成含铁血黄素。当细胞脱落至尿中，铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的 铁氰化铁，显微镜下尿沉渣可有深蓝色物质出现，即为阳性。,【,结果判定,】,阴性,【,临床意义,】,见于慢性血管内溶血，如,PNH,【临床意义】 阳性提示PNH。4.尿含铁血黄素试验（Rou,8,5.,血红蛋白尿测定（,hemoglobinuria）,血管内有大量红细胞破坏，血浆中的游离血红蛋白量超过1000,mg/L,时出现酱油色尿,【,结果判定,】,阴性,【,临床意义,】,溶血时阳性,5. 血红蛋白尿测定（hemoglobinuria）血管内有,9,6.,血浆高铁血红素白蛋白试验 （,methemalbumin test）,血浆中游离血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，接着分解为高铁血红素，后者与白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白,【,结果判定,】,阴性,【,临床意义,】,见于各种原因所致的严重血管内溶血,6.血浆高铁血红素白蛋白试验 （methem,10,7.,外周血红细胞形态改变,7. 外周血红细胞形态改变,11,裂细胞,schistocyte,（,红细胞异形症,poikilocytosis,）,系指红细胞发生各种明显的形态学异常改变而言。红细胞可呈梨形、泪滴性、新月形、长圆形、哑铃型、逗点性、三角形、盔形，以及球形、靶形等。,见于红细胞因机械或物理因素所致的破坏，如微血管病性溶血性贫血如弥散性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜、溶血尿毒症综合征等,。,也可见于严重烧伤病人。,裂细胞schistocyte,12,8.,血清胆红素（,TBIL,）增高，已非结合胆红素（间接胆红素，,IBIL,）增高为主,【,参考值,】,TBIL,01.2mg/dl ( 020.5 ummol/L),IBIL,00.8mg/dl ( 013.7 ummol/L),【,临床意义,】,提示溶血,8.血清胆红素（TBIL）增高，已非结合胆红素（间接胆红素，,13,8.,血清乳酸脱氢酶,【,参考值,】,80,220 U/L,【,临床意义,】,提示溶血,8.血清乳酸脱氢酶【参考值】 80220 U/L,14,（二）、,红细胞代偿增生,红细胞大小不均,网织红细胞增多,外周血见有核,RBC,骨髓红细胞系统增生明显活跃，形态异常,细胞嗜多色性,出现嗜碱点彩红细胞,出现豪乔小体,出现卡波环,（二）、红细胞代偿增生红细胞大小不均,15,红细胞大小不均,anisocytosis,红细胞大小悬殊，直径可相差一倍以上。,反映骨髓中红细胞增生明显旺盛。见于增生性贫血，而在巨幼细胞贫血中尤为明显。,MDS,中也可见。,溶血性贫血的实验室检查课件,16,嗜多色性,红细胞呈淡灰蓝或紫灰色，是未完全成熟的红细胞，体积较正常红细胞稍大，胞质呈嗜碱性着色的物质为少量残留的核糖体、线粒体等成分。,其增多反映骨髓造血功能活跃，红细胞系增生旺盛。见于增生性贫血，尤以急性溶血性贫血时为最多见。,嗜多色性,17,嗜碱性点彩,细胞内见到散在的大小和数量不一深蓝色颗粒。点彩红细胞属于未完全成熟的红细胞，有时与嗜多性并存。,多见于铅中毒及骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫。,嗜碱性点彩,18,Hp减少，提示溶血存在，血管内溶血时显著减低,【临床意义】溶血时阳性,可能是纺锤体的残余物或是胞质中脂蛋白变性所致。,动态检测，凝集效价增高4倍以上较有诊断价值。,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。,酸化血清溶血试验(Hams试验)、蔗糖溶血试验、蛇毒因子溶血试验等,【临床意义】有异常血红蛋白区带见于海洋性贫血、异常血红蛋白病,(一)红细胞膜缺陷的检验,用正常人血清免疫家兔，获得抗人球蛋白血清。,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,红细胞孵育渗透脆性试验,常见于骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫等,【临床意义】正常阴性。,血浆中游离血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，接着分解为高铁血红素，后者与白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白,抗人球蛋白试验 ( Coombs test),裂细胞schistocyte,见于：各种溶血性贫血红白血病髓外造血骨髓转移肿瘤,血清结合珠蛋白 （haptoglobin， Hp）,半衰期15天，说明有溶血存在,RBC膜缺陷：遗传球、PNH,【参考值】 溶血度5%,染色质小体,又称豪乔小体，,为紫红色圆形小体，是核染色质的残留部分。,常见于骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫等,Hp减少，提示溶血存在，血管内溶血时显著减低染色质小体,19,卡波环（,Cabot),一种紫红色成圆形或8字形细线状环。可能是纺锤体的残余物或是胞质中脂蛋白变性所致。,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,卡波环（Cabot),20,有核红细胞,有核红细胞即幼稚红细胞，均存在于骨髓中，正常人外周血中不能见到，在出生一周之内的新生儿外周血中可见到少量。,见于：,各种溶血性贫血,红白血病,髓外造血,骨髓转移肿瘤,有核红细胞,21,二、哪一类溶血性贫血？,二、哪一类溶血性贫血？,22,(一)红细胞膜缺陷的检验,红细胞渗透脆性试验,红细胞孵育渗透脆性试验,酸溶血试验,蔗糖溶血试验,蛇毒溶血试验,CD55,CD59,检测,(一)红细胞膜缺陷的检验 红细胞渗透脆性试验 红细胞孵育渗透,23,1.,红细胞渗透脆性试验,【,原理,】,是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗能力。主要取决于红细胞表面积与体积之比。,表面积大而体积小，对低渗盐水抵抗力大（即脆性较小）。反之，抵抗力较小（即脆性较大）。,【,参考值,】,开始溶血：,0.42%0.46%（4.24.6,g/L）NaCL,完全溶血：,0.28%0.34%（2.83.4,g/L）NaCL,【,临床意义,】,（1）脆性增高 遗传性球形红细胞增多症（开始溶血,5.2g/L,，甚至在,6.8g/L,即开始溶血）,（2）脆性减低 小细胞低色素性贫血：海洋性贫血、缺铁性贫血,1. 红细胞渗透脆性试验【原理】是测定红细胞对不同浓度低渗,24,2.,红细胞孵育渗透脆性试验,【,原理,】 37,孵育24小时，细胞内葡萄糖消耗增加，,ATP,减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀脆性增高,【,参考值,】,未孵育 50%溶血4,.04.45 g/L,孵育 50%溶血4.655.9,g/L,【,意义,】,脆性增高 遗传性球形红细胞增多症,脆性减低 缺铁性贫血 珠蛋白生成障碍性贫血,2.红细胞孵育渗透脆性试验【原理】 37孵育24小时，细,25,阵发性睡眠性血红蛋白尿症(,PNH),一种后天获得性血细胞膜缺陷的克隆性疾病，临床上可表现血管内溶血、栓塞、全血细胞减少等，有时可出现骨髓衰竭。,大多数,PNH,患者异常克隆与正常造血并存，使本病的诊断和发病机制的研究受到限制。,PNH,患者红细胞膜表面缺乏加速衰变因子（,DAF，CD55,）反应性溶血的膜抑制物（,MIRL，CD59,）等，使红细胞对补体敏感而溶血。,上述3种蛋白都经糖基化磷脂酰肌醇(,GPI),连接在细胞膜上，称为,GPI,锚连蛋白。,GPI,锚连蛋白缺失是由于体细胞发生,X,连锁的,PIG-A,基因突变造成的。,阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)一种后天获得性血细胞膜缺陷,26,3.,酸溶血试验 (,Ham,试验,),【,原理,】,膜蛋白缺陷的,红细胞对补体敏感增加，在弱酸血清（,pH6.66.8）,中，经,37,孵育后红细胞发生溶血。,【,临床意义,】,正常人阴性，阳性见于阵发性睡眠性血红蛋白尿（,PNH）,。该法敏感性较高。特异性高。,3. 酸溶血试验 (Ham试验) 【原理】膜蛋白缺陷的红细胞,27,Ham,试验,Ham试验,28,【临床意义】溶血时阳性,一、溶血性贫血的筛查检测,【参考值】正常人直接、间接均抗人球蛋白试验均阴性,红细胞孵育渗透脆性试验,点彩红细胞属于未完全成熟的红细胞，有时与嗜多性并存。,红细胞孵育渗透脆性试验,其增多反映骨髓造血功能活跃，红细胞系增生旺盛。,【原理】 蔗糖离子浓度低，增强补体与红细胞结合，使红细胞膜上形成小孔，蔗糖进入红细胞而致溶血。,主要取决于红细胞表面积与体积之比。,【临床意义】见于各种原因所致的严重血管内溶血,可作为PNH筛选试验，阴性可排除，阳性应作Ham 试验。,CD55,CD59检测,红细胞孵育渗透脆性试验,肝外阻塞性黄疸正常或增高,一、溶血性贫血的筛查检测,红细胞大小悬殊，直径可相差一倍以上。,红细胞孵育渗透脆性试验,酸化血清溶血试验(Hams试验)、蔗糖溶血试验、蛇毒因子溶血试验等,又称豪乔小体，为紫红色圆形小体，是核染色质的残留部分。,裂细胞schistocyte,【临床意义】溶血时阳性,Coombs 试验、酸溶血试验、渗透脆性试验等的临床意义,血红蛋白尿测定（hemoglobinuria）,大多数PNH患者异常克隆与正常造血并存，使本病的诊断和发病机制的研究受到限制。,【原理】机体存在抗自身红细胞抗体，在低温时与相应抗原结合，使红细胞凝集，特别是在4时最强烈，但温度升高到37 后凝集消失，称为冷凝集试验。,【参考范围】 外周血中CD55，CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5,【临床意义】溶血时阳性,第一步 确定是否有溶血（筛查检测）,半衰期15天，说明有溶血存在,CD55和CD59检测：用双色荧光流式细胞术检测PNH患者红细胞膜上的CD55和CD59，当PNH患者的CD59阴性细胞占3以上时即可检出,血清 RBC 抗IgG,有核红细胞即幼稚红细胞，均存在于骨髓中，正常人外周血中不能见到，在出生一周之内的新生儿外周血中可见到少量。,（二）、红细胞代偿增生,可作为PNH筛选试验，阴性可排除，阳性应作Ham 试验。,表面积大而体积小，对低渗盐水抵抗力大（即脆性较小）。,CD55 CD59检测,免疫性溶贫: AIHA 、新生儿溶血症、药物诱发红细胞相关抗体,【参考值】正常人直接、间接均抗人球蛋白试验均阴性,常见于骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫等,机械损伤性：DIC 、 TTP、人造瓣膜,【参考范围】 外周血中CD55，CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5,GPI锚连蛋白缺失是由于体细胞发生X连锁的PIG-A基因突变造成的。,PNH,不同时间尿样,【临床意义】溶血时阳性Coombs 试验、酸溶血试验、渗透,29,4.,蔗糖水溶血试验,【,原理,】,蔗糖离子浓度低，增强补体与红细胞结合，使红细胞膜上形成小孔，蔗糖进入红细胞而致溶血。,【,临床意义,】,正常阴性。,PNH,本试验常为阳性。可作为,PNH,筛选试验，阴性可排除，阳性应作,Ham,试验。,4.蔗糖水溶血试验【原理】 蔗糖离子浓度低，增强补体与红细胞,30,5.,蛇毒溶血试验,【,原理,】,蛇毒因子是种溶血因子，能直接激活补体,C3,，激活补体系统，造成溶血。,【,参考值,】,溶血度,5%,【,临床意义,】,阳性提示,PNH,。,5.蛇毒溶血试验【原理】 蛇毒因子是种溶血因子，能直接激活补,31,6. CD55 CD59,检测,【,原理,】CD55,，,CD59,是补体调节蛋白，具有,GPI,锚定蛋白作用。,PNH,患者红细胞和粒细胞上,GPI,锚缺陷，无法结合在细胞膜上，导致对补体敏感，容易发生溶血。,【,参考范围,】,外周血中,CD55,，,CD59,阴性红细胞和中性粒细胞均,10,6. CD55 CD59检测【原理】CD55，CD59是补体,32,PNH,诊断,1.,初筛试验,血管内溶血的特点：,血浆游离血红蛋白增高，结合珠蛋白(,Hp),降低，血红蛋白尿及尿中出现含铁血黄素等,2.,诊断试验,酸化血清溶血试验(,Hams,试验)、蔗糖溶血试验、蛇毒因子溶血试验等,3.,特异的诊断,PNH,的实验方法,CD55,和,CD59,检测：用双色荧光流式细胞术检测,PNH,患者红细胞膜上的,CD55,和,CD59，,当,PNH,患者的,CD59,阴性细胞占3以上时即可检出,PNH诊断1.初筛试验,33,（二）红细胞内酶缺陷的检验,1.,自身溶血试验及纠正试验,【,原理,】,细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,G-6PD,、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量,ATP，,红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，,ATP,减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。在温育过程中分别加入葡萄糖和,ATP,作纠正物，看溶血能否纠正。,（二）红细胞内酶缺陷的检验1. 自身溶血试验及纠正试验,34,【,参考值,】,正常人轻微溶血，溶血度 ,3.5%,；加葡萄糖、,ATP,溶血明显纠正，,溶血度,1%,。,【,临床意义,】,1,） 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 （,G-6PD,）缺乏症、 蚕豆病溶血增加，加葡萄糖、,ATP,溶血部分纠正。,2,）丙酮酸激酶缺乏症加葡萄糖不能纠正，加入,ATP,能纠正。,【参考值】正常人轻微溶血，溶血度 3.5%；加葡萄糖、A,35,（三）异常血红蛋白的检测,血红蛋白电泳检测,【,参考值,】,正常成人电泳图谱显示,4,条区带，最多的是,HbA,少量,HbA2,，再后为两条两更少的红细胞内的非血红蛋白成分（,NH1,、,NH2,）。,【,临床意义,】,有异常血红蛋白区带见于海洋性贫血、异常血红蛋白病,（三）异常血红蛋白的检测 血红蛋白电泳检测,36,(四)自身免疫性溶血的检验,1.,抗人球蛋白试验 (,Coombs test),【,原理,】,红细胞的膜电位使两个红细胞间保持一定距离。,不完全抗体,IgG,分子较小，无法连接两个邻近的红细胞而只能和一个红细胞抗原相结合。用正常人血清免疫家兔，获得抗人球蛋白血清。抗人球蛋白是完全抗体，可与多个红细胞表面不完全抗体结合，使红细胞相互连接起来出现凝集现象，称为抗人球蛋白试验阳性。,直接,抗人球蛋白试验：检测,红细胞,表面结合有不完全抗体。,间接,抗人球蛋白试验 ：检查,血清,中有无游离的不完全抗体。,(四)自身免疫性溶血的检验1. 抗人球蛋白试验 ( Coom,37,抗人球蛋白,IgG,不完全抗体,RBC,抗人球蛋白IgG不完全抗体RBC,38,溶血性贫血的实验室检查课件,39,将病人血清和正常,RBC,混合，再加入抗,IgG,试剂,病人,血清,RBC,抗,IgG,将病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG试剂,40,【,参考值,】,正常人直接、间接均,抗人球蛋白试验均,阴性,【,临床意义,】,1,）阳性见于,AIHA,， 新生儿溶血病，,SLE,等,2,）,AIHA,大多为,IgG,（温抗体型 37条件下作用最强,）,，少数为,IgM (,冷抗体型 4条件下进行试验,),3,）间接试验主要见于,Rh,或,ABO,妊娠免疫性新生儿溶血病母体血清中不完全抗体检测。,【参考值】正常人直接、间接均抗人球蛋白试验均阴性,41,（五）冷凝集试验,【,原理,】,机体存在抗自身红细胞抗体，在低温时与相应抗原结合，使红细胞凝集，特别是在,4,时最强烈，但温度升高到,37 ,后凝集消失，称为冷凝集试验。,【,参考值,】,效价,1,：,40,【,临床意义,】,某些,AIHA,，传染性单核细胞增多症、恶性淋巴瘤等可阳性。动态检测，凝集效价增高,4,倍以上较有诊断价值。,（五）冷凝集试验【原理】机体存在抗自身红细胞抗体，在低温时与,42,溶血性贫血的检测,1.,是否为溶血性贫血,2.,区分溶血部位,3.,溶血原因诊断,溶血性贫血的检测1.是否为溶血性贫血,43,【原理】是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗能力。,红细胞孵育渗透脆性试验,GPI锚连蛋白缺失是由于体细胞发生X连锁的PIG-A基因突变造成的。,【参考范围】 外周血中CD55，CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5,【参考值】正常人轻微溶血，溶血度 3.,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。,(一)红细胞膜缺陷的检验,血清结合珠蛋白 （haptoglobin， Hp）,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,【原理】是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗能力。,【原理】 蛇毒因子是种溶血因子，能直接激活补体C3，激活补体系统，造成溶血。,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,裂细胞schistocyte,常见于骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫等,肝内阻塞性黄疸显著减少或缺乏,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,3）间接试验主要见于Rh或ABO妊娠免疫性新生儿溶血病母体血清中不完全抗体检测。,【临床意义】见于各种原因所致的严重血管内溶血,红细胞孵育渗透脆性试验,RBC膜缺陷：遗传球、PNH,【临床意义】 阳性提示PNH。,学习重点,Coombs,试验、酸溶血试验、渗透脆性试验等的临床意义,【原理】是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗能力。学习,44,思考题,哪些实验室检查主要提示血管内溶血？,思考题哪些实验室检查主要提示血管内溶血？,45,一、溶血性贫血的筛查检测,一、溶血性贫血的筛查检测,46,3.,血清结合珠蛋白 （,haptoglobin,，,Hp）,【,参考值,】,：,0.7,1.5 g/L,【,临床意义,】,：,Hp,减少，提示溶血存在，血管内溶血时显著减低,Hp,增加，提示急慢性感染、恶性肿瘤、创伤、风湿性关节炎、,SLE,等,鉴别肝内外阻塞性黄疸,肝内阻塞性黄疸显著减少或缺乏,肝外阻塞性黄疸正常或增高,3.血清结合珠蛋白 （haptoglobin， Hp）【参,47,卡波环（,Cabot),一种紫红色成圆形或8字形细线状环。可能是纺锤体的残余物或是胞质中脂蛋白变性所致。,常与染色质小体同时出现，见于溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒及白血病等。,卡波环（Cabot),48,(一)红细胞膜缺陷的检验,红细胞渗透脆性试验,红细胞孵育渗透脆性试验,酸溶血试验,蔗糖溶血试验,蛇毒溶血试验,CD55,CD59,检测,(一)红细胞膜缺陷的检验 红细胞渗透脆性试验 红细胞孵育渗透,49,1.,红细胞渗透脆性试验,【,原理,】,是测定红细胞对不同浓度低渗氯化钠溶血的抵抗能力。主要取决于红细胞表面积与体积之比。,表面积大而体积小，对低渗盐水抵抗力大（即脆性较小）。反之，抵抗力较小（即脆性较大）。,【,参考值,】,开始溶血：,0.42%0.46%（4.24.6,g/L）NaCL,完全溶血：,0.28%0.34%（2.83.4,g/L）NaCL,【,临床意义,】,（1）脆性增高 遗传性球形红细胞增多症（开始溶血,5.2g/L,，甚至在,6.8g/L,即开始溶血）,（2）脆性减低 小细胞低色素性贫血：海洋性贫血、缺铁性贫血,1. 红细胞渗透脆性试验【原理】是测定红细胞对不同浓度低渗,50,4.,蔗糖水溶血试验,【,原理,】,蔗糖离子浓度低，增强补体与红细胞结合，使红细胞膜上形成小孔，蔗糖进入红细胞而致溶血。,【,临床意义,】,正常阴性。,PNH,本试验常为阳性。可作为,PNH,筛选试验，阴性可排除，阳性应作,Ham,试验。,4.蔗糖水溶血试验【原理】 蔗糖离子浓度低，增强补体与红细胞,51,（五）冷凝集试验,【,原理,】,机体存在抗自身红细胞抗体，在低温时与相应抗原结合，使红细胞凝集，特别是在,4,时最强烈，但温度升高到,37 ,后凝集消失，称为冷凝集试验。,【,参考值,】,效价,1,：,40,【,临床意义,】,某些,AIHA,，传染性单核细胞增多症、恶性淋巴瘤等可阳性。动态检测，凝集效价增高,4,倍以上较有诊断价值。,（五）冷凝集试验【原理】机体存在抗自身红细胞抗体，在低温时与,52,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。,【参考范围】 外周血中CD55，CD59阴性红细胞和中性粒细胞均5,抗人球蛋白是完全抗体，可与多个红细胞表面不完全抗体结合，使红细胞相互连接起来出现凝集现象，称为抗人球蛋白试验阳性。,RBC膜缺陷：遗传球、PNH,直接抗人球蛋白试验：检测红细胞表面结合有不完全抗体。,一种紫红色成圆形或8字形细线状环。,用正常人血清免疫家兔，获得抗人球蛋白血清。,【原理】机体存在抗自身红细胞抗体，在低温时与相应抗原结合，使红细胞凝集，特别是在4时最强烈，但温度升高到37 后凝集消失，称为冷凝集试验。,肾小管上皮细胞吸收血红蛋白，代谢成含铁血黄素。,【参考值】正常人直接、间接均抗人球蛋白试验均阴性,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、丙酮酸激酶），葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，红细胞在自身血浆中温育48小时，不能继续从血浆摄取葡萄糖作能量来源，ATP减少，不能维持红细胞内钠泵作用，导致溶血增加。,常见于骨髓增生旺盛的贫血如溶贫，巨幼贫等,脾亢: 单核巨噬细胞功能亢进,孵育 50%溶血4.,【原理】 蛇毒因子是种溶血因子，能直接激活补体C3，激活补体系统，造成溶血。,（二）、红细胞代偿增生,【参考值】正常人直接、间接均抗人球蛋白试验均阴性,【临床意义】 阳性提示PNH。,半衰期15天，说明有溶血存在,【原理】 蛇毒因子是种溶血因子，能直接激活补体C3，激活补体系统，造成溶血。,【临床意义】有异常血红蛋白区带见于海洋性贫血、异常血红蛋白病,溶血性贫血的检测,1.,是否为溶血性贫血,2.,区分溶血部位,3.,溶血原因诊断,【原理】细胞内酶缺陷（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 G-6PD、,53,