白细胞血小板配血试验课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,医学ppt,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,医学ppt,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,医学ppt,*,免疫血液学,-白细胞 血小板,输血前交叉配血试验,医学ppt,免疫血液学-白细胞 血小板 医学ppt,一、人类白细胞抗原,人类白细胞抗原代表个体特异性,与移植排斥有关的抗原称为,组织相容性抗原或移植抗原-MHS,编码MHS的基因组称为,主要组织相容性复合物,(MHC),人类的MHC是首先在白细胞上发现的，称为,人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA),2,医学ppt,一、人类白细胞抗原 人类白细胞抗原代表个体特异性2,HLA的研究历史,最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954年,HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。,它是分布广泛的组织抗原。,3,医学ppt,HLA的研究历史最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1,HLA的分型命名,血清学分型命名,具有临床意义的HLA基因有,A、B、C、DR、DQ、DP,等位点(Loci)，每个位点又有若干等位基因，这些基因的产物便是HLA抗原。,临床意义比较大的HLA-A、B、C称为类抗原,HLA-DR、DQ、DP称为类抗原。,4,医学ppt,HLA的分型命名 4医学ppt,HLA的遗传,单体型遗传,存在基因重组,多态性现象,连锁不平衡,5,医学ppt,HLA的遗传 单体型遗传5医学ppt,HLA抗体及抗体检测,临床上HLA抗体多由,妊娠、输血或器官移植等免疫产生,6,医学ppt,HLA抗体及抗体检测6医学ppt,HLA在医学中的应用,一、HLA与输血,HLA与非溶血性输血反应,HLA与血小板输注,二、HLA与器官移植,(一)肾移植,(二)骨髓移植,三、HLA与亲子鉴定,7,医学ppt,HLA在医学中的应用 一、HLA与输血7医学ppt,二、血小板血型,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称,血小板相关抗原,另一类为,血小板特异性抗原,8,医学ppt,二、血小板血型8医学ppt,血小板血型,相关抗原：,主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)有关,特异性抗原：,由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞和组织上不能发现,9,医学ppt,血小板血型相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细,血小板血型,血小板表面存在红细胞,ABO系统,的A抗原和B抗原,可能是从,血浆中吸附,上的。,是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中,在我国，通常进行,ABO同型血小板输血,10,医学ppt,血小板血型血小板表面存在红细胞ABO系统的A抗原和B抗原,可,配合性血小板输注,ABO同型,血小板抗体的筛选,交叉配合试验：确保供受体的血小板型和HLA型的配合,11,医学ppt,配合性血小板输注ABO同型11医学ppt,血小板血型,血小板特异性抗原,具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分,血小板特异性抗原有,6个血型系统24个抗原，正式命名为HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15,12,医学ppt,血小板血型 血小板特异性抗原12医学ppt,血小板血型的临床意义,一.血小板输注无效性,(PTR),二.输血后紫癜,(PTP),三.新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜,(NAITP),四,.血小板的自身免疫作用-特发性血小板减少性紫癜,(简称ITP),13,医学ppt,血小板血型的临床意义一.血小板输注无效性(PTR)13医学p,血小板同种抗体与输血,1.ABO血型的选择,一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板,2Rh血型的选择,D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白,14,医学ppt,血小板同种抗体与输血14医学ppt,三、输血前免疫血液学检查,目的:,供者与患者的血液,安全,有效,相容,15,医学ppt,三、输血前免疫血液学检查 目的:供者与患者的血液安全有效,输血前免疫血液学检查,内容：,患者的病史、标本的核对及处理,供受双方ABO、Rh血型鉴定,不规则抗体的筛选和鉴定,交叉配血试验,报告和发血,16,医学ppt,输血前免疫血液学检查内容：16医学ppt,标 本,一、标本采集,二、红细胞悬液的配制,三、标本的保存,17,医学ppt,标 本一、标本采集17医学ppt,标 本,一、标本采集,1红细胞标本-ACD或CPD、(Na,2,-EDTA)抗凝静脉血,少数患者有一种自身抗体-不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本,18,医学ppt,标 本一、标本采集18医学ppt,2血清标本,一般实验避免使用血浆,配血试验用血清不超过72小时,19,医学ppt,19医学ppt,二、红细胞悬液的配制,1、红细胞悬液常用浓度有2、5和10,2、,2的悬液一般用于滴定抗体效价，5的悬液常用于血型鉴定和交叉配血试验，10的悬液则用于测定抗体的亲合力。,20,医学ppt,二、红细胞悬液的配制20医学ppt,三、标本的保存,1,血清标本,不稀释的血清标本如加有防腐剂可在4保存数月,在一20以下可保存数年,如用生理盐水稀释的血清只限当天使用,2红细胞标本,一般试验用的凝血标本要在5天之内使用，以不溶血为准。如用保存液可保存3周,用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用,21,医学ppt,三、标本的保存21医学ppt,供受双方ABO、Rh血型鉴定,ABO血型正反定型,Rh血型鉴定,试管法,22,医学ppt,供受双方ABO、Rh血型鉴定ABO血型正反定型试管法22,抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。,常见于多次输血的人群,不规则抗体的筛选和鉴定,23,医学ppt,抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。不规则抗体的筛选和,不规则抗体的筛选和鉴定,患者血清+试剂筛选红细胞,盐水介质,聚凝胺介质,抗人球蛋白介质,24,医学ppt,不规则抗体的筛选和鉴定患者血清+试剂筛选红细胞24医学ppt,交叉配血试验,受者血清+供者红细胞,受者红细胞+供者血清,方法,主侧,次侧,盐水介质,聚凝胺介质,抗人球蛋白介质,25,医学ppt,交叉配血试验受者血清+供者红细胞主侧次侧 盐水介质25医学,（,1,）低离子聚凝胺交叉配血技术,原理：聚凝胺（,Polybrene,），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。,26,医学ppt,（1）低离子聚凝胺交叉配血技术26医学ppt,1 红细胞间有一定间距,2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,3 加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺,4 红细胞的非特异性凝集消失,聚凝胺交叉配血技术示意图,1,聚凝胺,枸橼酸钠,27,医学ppt,1 红细胞间有一定间距2 加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的,1 红细胞上已有不完全抗体致敏,2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集,3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺,4 由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失,聚凝胺交叉配血技术示意图,2,聚凝胺,枸橼酸钠,不完全抗体,28,医学ppt,1 红细胞上已有不完全抗体致敏2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之,试验分步原理,血清,红细胞悬液,加入LIM,混合液,Polybrene受体,血型抗原,IgG抗体迅速致敏,29,医学ppt,试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene,试验分步原理,Polybrene,上海市血液中心血,Polybrene分子连接到红细胞上,加入Polybrene,30,医学ppt,试验分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybre,试验分步原理,离心,Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集,1个IgG分子同时连接两个红细胞,31,医学ppt,试验分步原理离心Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝,试验分步原理,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,重悬液,上海市血液中心血,加重悬液,32,医学ppt,试验分步原理加入重悬液减弱了Polybrene的作用重悬液上,试验分步原理,已被血型抗体致敏的红细胞不会散开,阳性结果,33,医学ppt,试验分步原理已被血型抗体致敏的红细胞不会散开阳性结果33医学,试验分步原理,未被血型抗体致敏的红细胞很快散开,阴性结果,34,医学ppt,试验分步原理未被血型抗体致敏的红细胞很快散开阴性结果34医学,注意事项,按比例加样,致敏时间,观察非特异性凝集,观察结果,关于冷凝集,35,医学ppt,注意事项按比例加样35医学ppt,聚凝胺方法的特点,灵敏：,灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。,速度快：,实验时间5分钟左右。,准确：,准确度高于酶试验。,不适合于,Kell,系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。,操作要求较高,36,医学ppt,聚凝胺方法的特点灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。36,（2）微柱凝胶技术,37,医学ppt,（2）微柱凝胶技术37医学ppt,微柱凝胶技术,38,医学ppt,微柱凝胶技术38医学ppt,凝胶技术的原理,反应室,外管壁,反应室底孔,内套管壁,凝胶或,玻璃珠,亲和凝胶,试剂或,盐水,特殊粘液,39,医学ppt,凝胶技术的原理反应室外管壁反应室底孔内套管壁凝,凝胶技术的原理：,A、,反应室：,下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。,B、,试剂或盐水层：,红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。,C、,粘液,：,亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,40,医学ppt,凝胶技术的原理：A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不,1）敏感：,在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。,2）结果可保存,凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。,3）操作技术要求较低：,凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。,4)无需洗涤的抗球蛋白试验：,优点：,41,医学ppt,1）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。 优点,缺点：,凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。,高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/300的库血直抗阳性。,42,医学ppt,缺点：凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。42医学ppt,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。,3加入抗人球蛋白,1红细胞彼此之间有一定的间距,4抗人球蛋白可以同时和两个不完全抗体的FC段结合，从而把红细胞连接在一起。,（,3,）抗人球蛋白交叉配血法示意图,43,医学ppt,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如有抗血小板抗体,则和血小板发生特异性结合,5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）,44,医学ppt,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体) 2.加入供者血小板3,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如血清中无抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。,血小板配血实验原理示意图（阴性反应）,45,医学ppt,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体) 2.加入供者血小板3,46,医学ppt,46医学ppt,此课件下载可自行编辑修改，供参考！,感谢您的支持，我们努力做得更好！,此课件下载可自行编辑修改，供参考！,