一种新的乙肝诊断血清免疫学指标-乙肝病毒大蛋白课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,一种新的乙肝诊断血清免疫学指标,乙肝病毒大蛋白,一种新的乙肝诊断血清免疫学指标乙肝病毒大蛋白,乙型肝炎流行现状,?,乙型肝炎是一个严重的公共卫生问题。,?,?,全球,60,亿人口中，约,1/2,人口生活在,HBV,高流行区，,约,20,亿人证明有,HBV,感染，,3,4,亿人为,HBV,慢性感,染，其中,25%,40%,最终将死于肝硬化和肝癌。,全球前,10,位疾病死因中乙肝占第,7,位，每年因乙肝死,亡约,75,万例,?,乙型肝炎流行现状?乙型肝炎是一个严重的公共卫生问题。?全球,中国乙型肝炎流行现状,?,(,一,) HBeAg,?,(,二,) HBV,阴性活动期肝炎增多,变异株增加,HBV,的突变率较高，,中国乙型肝炎流行现状?(一) HBeAg?(二) HBV阴性,HBeAg,阴性活动期肝炎,?,临床特点：,?,(1),转为肝硬化和肝癌比例较大；,?,(2),与年龄相关：患者年龄较大；,?,(3),疾病自发或持续减轻极少发生；,?,(4),何时停药难以确定；,?,(5),治疗后复发率高。,HBeAg阴性活动期肝炎?临床特点：?(1) 转为肝硬化和肝,HBeAg,阴性活动期肝炎,?,HBeAg,阴性乙肝与,HBeAg,阳性乙肝不同点：,?,(1),慢性肝炎病情不减轻；,?,(2),生化学和病毒学标志反复升高；,?,(3),可,30,40,年无症状；,?,(4),约,45,岁左右发生肝硬化；,?,(5) 10,年后约,25%,发生并发症。,HBeAg阴性活动期肝炎?HBeAg阴性乙肝与HBeAg阳性,HBeAg,阴性活动期肝炎,HBeAg,阴性的慢性乙肝流行率升高原因：,?,(1),持续免疫压力导致突变株选择；,?,(2),长期治疗导致病毒变异；,?,(3),前,C,和,C,启动子变异；,?,(4),检测方法的灵敏度提高。,HBeAg阴性活动期肝炎HBeAg 阴性的慢性乙肝流行率升高,HBeAg,阴性活动期肝炎,HBeAg,阴性活动期肝炎临床诊断现状：,?,(1),传统“两对半”指标不能反映此类患者,HBV,复制程度；,?,(2),缺乏指导合理治疗的指标；,?,(3) HBV DNA,检测不易于各级医疗机构广泛开展；,?,(4),临床上急需能够反映,HBV,复制程度及指导治疗的指标。,HBeAg阴性活动期肝炎HBeAg 阴性活动期肝炎临床诊断现,抗病毒治疗效果监测,?,临床上用于抗病毒治疗的药物,?,干扰素,?,核苷类似物,抗病毒治疗效果监测?临床上用于抗病毒治疗的药物?干扰素?核苷,抗病毒治疗效果监测,临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。,?,?,以,HBV DNA,阴转作为治疗的终点不恰当，,此时停药病情易反复。,抗病毒治疗效果监测临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。?以,乙肝病毒实验室检测的缺陷,抗病毒治疗效果评价血清学指标缺乏,临床上评价抗乙肝病毒治疗效果时存在一个很大的问题，即其评价指标,主要是肝功能的改善与否、血清乙肝病毒,DNA,水平的变化以及肝组织的病理学,改变等。诚然，这些指标对临床医生判断患者病情而言非常重要和实用，也,是临床医生选用抗乙肝病毒药物时的依据，,然而对于何时停用抗病毒药物、停用抗病毒药物后,乙肝病毒是否会重新复制活跃导致乙肝复发则缺乏客观,而有效的指标。,乙肝病毒实验室检测的缺陷抗病毒治疗效果评价血清学指标缺乏临床,乙型肝炎血清学诊断技术,新突破,乙肝病毒大蛋白（,HBV-LP,）前,S,区,酶免定量试剂盒,?,?,-,直接,定量检测,乙肝大蛋白,-,不用分开检测前,S1,和前,S2,乙型肝炎血清学诊断技术新突破乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）前,HBV-LP,诊断试剂新颖之处,?,采用病毒样颗粒制作针对构象结构的高活性抗体,?,?,同时检测前,S1,和前,S2,进行定量检测，用于评估抗病毒治疗效果和预后,?,?,诊断,HBeAg,阴性活动期肝炎的唯一血清学指标,评估治疗效果及判定治疗终点唯一血清学指标,?,大蛋白完全消退意味患者预后良好,HBV-LP诊断试剂新颖之处?采用病毒样颗粒制作针对构象结构,乙肝病毒包膜蛋白研究进展,?,?,?,?,?,1995-2004,年,发现大蛋白前,S,区有复杂构象结构,1996,年,发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用,2002,年,发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大,蛋白,2004,年,实验室成功构建针对构象型抗原的单克隆抗,体,2005,年,国内公司成功研制乙肝表面抗原大蛋白酶联,免疫定量试剂盒,乙肝病毒包膜蛋白研究进展?1995-2004年发现大,Hepatitis B,乙型肝炎,Hepatitis B乙型肝炎,HBV,模型,HBV模型,HBV,包膜蛋白,HBV包膜蛋白,HBV,的表面抗原的组成,HBV的表面抗原的组成,HBV,病毒结构成分,HBV病毒结构成分,HBV-LP,与病毒复制密切相关,HBV,L-HBs,大蛋白,M-HBs,中蛋白,S-HBs,小蛋白,Dane,存在,存在,存在,管形,存在,存在,存在,球型,不含,1%,含量,存在,血流中的分布,仅病毒复制期存,在,非复制期少量存,在,存在,根据检测血液中大蛋白的有无，判断病毒携带者体内的,HBV,病毒是否在进行复制。,HBV-LP与病毒复制密切相关HBV L-HBs 大蛋白M-,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,乙肝病毒包膜蛋白,preS,特性,:,(1),暴露在病毒颗粒表面,(2),高免疫原性,(3),参与了病毒与细胞受体的相互作用,(4),诱导抗感染的保护性抗体的产生,?,Neurath AR,Kent SB,Strick N,Parker K,.,Delineation of contiguous determinants essential for biological,functions of the pre-S sequence of the hepatitis B virus envelope protein: its antigenicity, immunogenicity,and cell-receptor recognition.,Ann Inst Pasteur Virol. 1988 Jan-Mar;139(1):13-38.,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究乙肝病毒包膜蛋白preS特,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,?,HBV,病毒颗粒表面的,PreS,已经被证实具有独立,的,结构域和天然构象,很多研究致力于表达并观测,PreS,的结构，但是,极少成功。其原因是单独表达的,PreS,很容易被,蛋白酶所降解。,?,?,Prange R, Streeck RE. Novel transmembrane topology of the hepatitis B virus envelope proteins. EMBO J,1995; 14: 247-,256,?,Lambert C.et al. Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral lare envelope,proteins J.General Virology 2004 85,1221-1225.,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究?HBV病毒颗粒表面的Pr,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,(A),内质网（,ER,）膜上乙肝大蛋白的拓扑结构模型,。,(B),病毒体包膜上的乙肝大蛋白的拓扑结构模型。,Volker Bruss, Xuanyong Lu1, Reiner Thomssen and Wolfram H.Gerlich.Post-translational alterations,in transmembrane topology of the hepatitis B virus large envelope protein. The EMBO Journal vol.13,no.10 pp.2273-2279, 1994,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究(A)内质网（ER）膜上乙,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,HBV L,包膜蛋白（大蛋白）的结构域和穿膜拓扑结构,A.,大蛋白的构成组分，含,preS1,、,preS2,及,S,结构,B.,大蛋白在内质网（,ER,）膜上的拓扑结构,?,Carsten Lambert, Sylvia Mann and Reinhild Prange. Assessment of determinants affecting the dual topology of,hepadnaviral large envelope proteins. Journal of General Virology (2004), 85, 1221,1225,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究HBV L包膜蛋白（大蛋白,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,AA99,169,形成一个环状结构，这一序列横跨前,S1,和前,S2,，是其主要免疫表位。,AA99,169,?,Volker Bruss Envelopment of the hepatitis B virus nucleocapsid Virus Research 106 (2004),199,209 29 September 2004,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究AA99169形成一个环,L,蛋白,i-pre-S,形式的功能模式图。,黑点表示,L,蛋白,pre-S,结构,略去,S,和,M,蛋白,分泌的病毒体表面的,e-pre-S,结构很可,能具有结合病毒受体的功能。目前的,数据显示,L,蛋白的,i-pre-S,结构是一种蛋,白矩阵，在病毒体的形成过程中负责,与核壳体相接触，包装外膜。,VOLKER BRUSS* AND KERSTIN VIELUF. Functions of the Internal Pre-S Domain of the,Large Surface Protein in Hepatitis B Virus Particle Morphogenesis. JOURNAL OF,VIROLOGY, Nov. 1995, p. 6652,6657 Vol. 69, No. 11,L蛋白i-pre-S形式的功能模式图。黑点表示L蛋白pre-,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,横跨前和前之间,?,肝炎病毒物种特异性的感染取决于病毒进入的水平，并由病毒,L,蛋白上的,pre-S,结构决定。,?,Arg 103,和,Ser 124,之间的序列在不同的,HBV,之间是高度保守的。,?,Arg 103,和,Ser 124,之间的,pre-S,序列对于,HBV,的形成具有重要功能。,?,VOLKER BRUSS. A Short Linear Sequence in the Pre-S Domain of the Large Hepatitis B Virus Envelope,Protein Required for Virion Formation. JOURNAL OF VIROLOGY, Dec. 1997, p. 9350,9357 Vol. 71, No. 12,?,TAKASHI ISHIKAWA AND DON GANEM. The pre-S domain of the large viral envelope protein determines,host range in avian hepatitis B viruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 92, pp. 6259-6263, July 1995,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究横跨前,乙肝病毒大蛋白和,Pre-S,区的研究,形成特殊的矩阵结构,跨膜区，维持它们正常结构的最短距离,是个,?,Determination,of,the,Minimal,Distance,between,the,Matrix,and,Transmembrane,Domains,of,the,Large,Hepatitis,B,Virus,Envelope,Protein,Journal,of,Virology,June,2005,p.,7918-7921,V,ol.,79,No.120022-538X,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究形成特殊,Pre-S,的反式激活作用,乙肝病毒大分子表面抗原,（大蛋白）是一种转录活化因子,The hepatitis B virus large surface protein (LHBs) is a,transcriptional activator.,Virology. 1996 Nov 1;225(1):235-9.,Pre-S的反式激活作用乙肝病毒大分子表面抗原（大蛋白）是一,亚病毒颗粒上,pre-S,的反式激活作用,?,乙肝鸭模型证实由大蛋白组装成的亚病毒颗粒能,够反式激活病毒继续复制,?,这个研究具有临床意义,对于大蛋白阳性而,DNA,阴,性患者容易停药反跳具有参考意义,.,?,Bruns,M,Miska,S,Chassot,S,Will,H.,Enhancement,of,hepatitis,B,Virus,infection,by,noninfections,subviral,particles.J,Virol,1998;76,;1462-8.,亚病毒颗粒上pre-S的反式激活作用?乙肝鸭模型证实由大蛋白,大蛋白与肝细胞病变研究,?,在乙肝病毒感染的,HepG2,细胞中对亚病毒纤,维体的形态发生进行的超微结构分析,?,?,?,?,?,原,文：,Ultrastructural Analysis of Hepatitis B Virus in HepG2-,Transfected,Cells With Special Emphasis on Subviral Filament Morphogenesis,作,者：,PHILIPPE ROINGEARD AND CAMILLE SUREAU,作者单位：,Laboratoire de Biologie Cellulaire, EP CNRS 117,Faculte,de Me,decine de Tours, 2 bis Boulevard Tonnelle,F-,37032 Tours Cedex France.,发表刊物：,HEPATOLOGY Vol. 28, No. 4, 1998,?,大蛋白与肝细胞病变研究?在乙肝病毒感染的HepG2细胞中对亚,大蛋白的过量表达,管状颗粒在细胞,内堆积,导致体外培养的细胞,5,天内,死亡,大蛋白的过量表达,管状颗粒在细胞内堆积,导致体外培养的细胞5,?,Chisari,等和,Fernandes,等已经证实，在转基,因小鼠中过量表达大的表面蛋白会使肝细,胞凋亡并且产生慢性肝炎。然而，在他们,模型中的这种损伤相对比较温和，没有小,鼠死于肝功能衰竭,.,转基因小鼠的肝细胞带有这种蛋白,L,的积累,滞留，则会发展为细胞的损伤作用，它会,诱导肝的再生，在这个模型中最终导致肝,癌,?,?Chisari等和Fernandes等已经证实，在转基因小,大蛋白导致肝细胞病变研究,大蛋白是导致,FCH,中肝细胞损伤,纤维化的主要原因,大蛋白导致肝细胞病变研究大蛋白是导致FCH中肝细胞损伤,纤维,FCH,与肝细胞内大蛋白过量表达,?,蛋白,L,的滞留也被发现和一种独特的综合症，,即纤维淤胆性肝炎（,FCH,）相联系，它的,特征为肝细胞的空气球化和有着显著的胆,汁阻塞，但是它一般只有很少的炎症发生，,它发生于免疫抑制的乙肝携带者。来自于,发生了,FCH,的病人的肝脏样品，通过电镜,观察发现在细胞内膜系统中有着同样的乙,肝亚病毒包膜纤维体的积累。,FCH与肝细胞内大蛋白过量表达?蛋白L的滞留也被发现和一种独,2002,年国际肝病杂志,2002年国际肝病杂志,?,实验证实，表达的乙肝大表面蛋白致使培,养的肝细胞在一些天内死亡。,乙肝大的表面蛋白会致使体外培养的细胞,的液泡化和细胞凋亡。这些结果和,FCH,下,的肝脏病理情况相当地相似，,?,?实验证实，表达的乙肝大表面蛋白致使培养的肝细胞在一些天内死,国内,pre-S,研究（部分）,?,文献一：,Establishment and preliminery use of hepatitis B Virus Pre S1/2,antigen assay,World Journery of Gastroenterology,99,年,军事医学科学院所,文献二,xpression and purification of the complete preS region of hepatitis,B Virus,World Journal of Gastroenterology,2005,年,中科院上海生化和细胞所,?,国内pre-S研究（部分）?文献一：Establishmen,抗原表位,?,?,目前生物科学领域，对天然表位的研究借助现代科学,技术的进步，对表位已经有比较深刻的认识。,表位的构成方式至少有两种：,?,由某些氨基酸残基按一定顺序连续排列组成的线状序列，,称为顺序（,sequential,）表位或,线性,(linear),表位,。顺序,表位是蛋白分子的一级结构，比较稳定，不受蛋白质加热变,性和空间构形改变的影响。,?,由分子内不连续的,2,3,个氨基酸残基折叠排列所形成的三,维结构构成，,称为构象,(conformational),表位,；有时候，,呈螺旋式排列的连续肽链序列也可起到构象表位的作用。,抗原表位?目前生物科学领域，对天然表位的研究借助现代科学技,多肽无法模拟构象表位,?,商品化的前,S1,定性检测试剂上市，其单抗是用,AA21-47,化学合成的多肽而制作的。而应用该多肽,免疫制作的抗体在科研中就已经发现，只能检测,到微弱的抗,-pre-S1,抗体的产生,多肽无法模拟构象表位?商品化的前S1 定性检测试剂上市，其单,多肽无法模拟构象表位,?,Schodel,等人曾以,100ug,的,pre-S1(21-47),合成多肽免疫,Balb/c,小鼠，诱导生成的抗,pre-s1,抗体的滴度只有,160,，,?,上海生化所改进应用,pre-S1-BSA,偶联复合物免疫,Balb/c,小鼠，也只能检测到微弱的抗,Pre-S1,的活力，,多肽无法模拟构象表位?Schodel等人曾以100ug的pr,目前临床使用乙肝前,S1,以及前,S2,试剂,?,大部分研究主要集中在前,S1,区、前,S2,区。研究表,明前,S1,区、前,S2,区蛋白及其抗体都与,HBV-DNA,、,HBeAg,、肝脏损害、乙肝的转归等都有极其密切的,关系。,?,临床应用：前,S1,试剂、前,S2,试剂诊断的结果与,HBV-DNA,、,HBeAg,三者之间有一定的关系，但符合,率却只有,0,%,，甚至更低。,目前临床使用乙肝前S1以及前S2试剂?大部分研究主要集中在前,目前临床使用乙肝前,S1,以及前,S2,试剂,?,使用针对化学合成多肽的单克隆抗体，,?,无法定量监测，无法用于疗效观察,?,临床应用年，灵敏度不理想，,?,?,杨海林等,完整病毒颗粒,Dane,颗粒标志物,PreS1,蛋白药盒的研制,上海医学检验杂志,1995 vol.10:204-206,杨海林等,抗乙肝炎病毒表面抗原,PreS1,（,20,47,）多肽的制备、性质和应用。生物化,学与生物物理学报,1994 vol 26 145-151,目前临床使用乙肝前S1以及前S2试剂?使用针对化学合成多肽的,乙肝大蛋白定量诊断试剂,?,应用结构生物学、蛋白晶体学的研究，研发出针对乙,肝病毒前,S,区的构象型单抗，,?,大大提高了乙肝病毒感染者中前,S,区抗原即,LP,大蛋白,的检出率，,?,临床应用表明大蛋白的检出率与血液中病毒,DNA,的符,合率高度符合（,90%,）。,?,比原来的前,S1,试剂效果大大提高，可作为病毒复制的,一个指标。,乙肝大蛋白定量诊断试剂?应用结构生物学、蛋白晶体学的研究，研,乙肝大蛋白,re-S,抗原蛋白晶体结构,乙肝大蛋白re-S抗原蛋白晶体结构,HBV-lp,晶体结构,空间模型,HBV-lp晶体结构空间模型,针对大蛋白构象表位单抗研制简要过程,（本方法是我们已经申请的专利的一部分）,获得体外重组的,PRE-S,抗原,?,获得多抗，亲和层析,?,从强阳性标本中获得病毒样颗粒,?,病毒样颗粒制作抗体,?,针对大蛋白构象表位单抗研制简要过程（本方法是我们已经申请的专,大蛋白试剂临床研究,1,、,HBV DNA,阳性标本中,HBV,LP,的阳性符合率,考,核,单,位,HBV DNA,（）,例（次）数,北京地坛医院,1,北京地坛医院,2,（治疗系列）,1,268,152,254,149,HBV,LP,（）,例（次）数,比例（）,94.78,98.03,解放军传染病研究所,辽宁沈阳传染病医院,浙江省湖州中心医院（治疗系列）,2,合,计,170,143,133,848,135,134,128,783,79.41,93.71,96.24,92.33,注：,1,阿德福韦抗病毒治疗患者,43,例，共检出,HBV DNA,阳性,152,次；,2,拉米夫定抗病毒治疗患者,51,例，共检出,HBV DNA,阳性,133,次。,大蛋白试剂临床研究1、HBV DNA阳性标本中HBVLP的,大蛋白试剂临床研究,2,、不同,HBV DNA,拷贝数中,HBV,LP,阳性率以及,OD,值比较,组别,1,2,3,4,5,6,HBV DNA,大蛋白试剂结果,HBVDNA,拷贝数,10,4,(,阴性,),10,4,10,5,10,6,10,7,10,8,例数,84,43,63,24,17,23,阳性例数,23,29,46,21,16,23,阳性率（）,21.38,67.44,73.02,87.50,94.12,100.00,大蛋白,OD,0.266,0.044,0.416,0.081,0.504,0.205,0.898,0.180,1.275,0.319,1.428,0.238,注：,解放军传染病研究所，,HBV DNA,拷贝数对数值与,HBV,LP OD,值的相关系数,r=0.945,大蛋白试剂临床研究2、不同HBV DNA拷贝数中HBVLP,大蛋白试剂临床研究,3,、不同,HBV DNA,拷贝数中,HBV,LP,阳性率以及含量比较,组别,HBV DNA,HBVDNA,拷贝数,1,2,10,3,10,4,例,(,次,),数,54,38,阳性,例,(,次,),数,48,37,大蛋白试剂结果,阳性率,（）,88.89,97.37,阳性含量均值,（,ng,）,17.60,24.69,3,4,5,10,5,10,6,10,6,58,65,80,56,63,80,96.55,96.92,100,30.44,55.46,86.61,合计,/,295,281,95.25,/,注：北京地坛医院与沈阳传染病医院汇总，其中北京地坛医院为阿德福韦抗病毒治疗患者,标本。,HBV DNA,拷贝数对数值与,HBV,LP,含量（,ng,）的相关系数,r=0.935,大蛋白试剂临床研究3、不同HBV DNA拷贝数中HBVLP,大蛋白试剂临床研究,PresAg含量与HBV DNA含量相关性,P,r,e,S,A,g,O,D,值,（,含,量,）,3,2.5,2,1.5,1,0.5,0,1,2,3,4,5,6,HBV DNA拷贝对数值,7,8,均值,中位数,大蛋白试剂临床研究PresAg含量与HBV DNA含量相关性,大蛋白试剂临床研究,4,、,HBV,LP,试剂与乙肝前,S1,试剂比较,考,核,单,位,HBVDNA,（）,例数,北京地坛医院,解放军传染病研究所,合,计,268,170,438,HBV,LP,（）,乙肝前,S1,（）,例数,比例（）,例数,254,135,389,94.78,79.41,88.81,176,97,273,比例,（）,65.67,57.06,62.33,大蛋白试剂临床研究4、HBVLP试剂与乙肝前S1试剂比较考,大蛋白试剂临床研究,5,、,HBV DNA,、,HBeAg,与,HBV,LP,三者在乙肝患者中的比较,考,核,单,位,北京地坛医院,沈阳传染病医院,HBVDNA,（）,例数,HBV,LP,（）,例数,比例,（）,HBeAg,（）,例数,比例,（）,391,368,94.12,177,45.27,大蛋白试剂临床研究5、HBV DNA、HBeAg与HBVL,大蛋白试剂临床研究,5,、,HBV DNA,、,HBeAg,与,HBV,LP,三者在乙肝患者中的比较,HBV DNA,（）,HBeAg(,),177,#,HBV,LP,（）,HBeAg(,),214,*,合计,391,172,368,196,（,91.59%,）,（,97.18%,）,（,94.12%,）,注：,#,其中北京地坛医院,109,份；沈阳传染病医院,68,份,*,其中北京地坛医院,159,份；沈阳传染病医院,55,份,大蛋白试剂临床研究5、HBV DNA、HBeAg与HBVL,大蛋白试剂临床研究,6,、不同,HBV,模式的患者中,HBV,LP,与,HBV DNA,的比较,模,式,HBV M,例数,218,207,23,37,485,HBV DNA,（）,例数,阳性率,(%),202,167,19,13,401,92.67,80.68,82.61,35.14,82.68,HBV,LP,（）,例数,阳性率,(%),206,158,18,16,398,94.50,76.33,78.26,43.24,82.06,HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+),HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+),HBsAg(+)HBeAg(+),HBsAg(+)HBcAb(+),合计,大蛋白试剂临床研究6、不同HBV模式的患者中HBVLP与H,大蛋白试剂临床研究,7,、,HBV,LP,试剂盒抗干扰能力的考评,考核单位,干扰血清,所患疾病,甲肝,北京地坛医院,丙肝,例数,8,8,HBV,LP,结果,阳性,例数,0,0,阳性率,（）,0,0,戊肝,两种肝炎混合感染,*,8,6,20,0,0,0,0,0,0,沈阳传染病医院,丙肝,合计,/,50,0,0,注：,*,含甲肝乙肝混合感染、丙肝乙肝混合感染以及戊肝乙肝混合感染各,2,份,大蛋白试剂临床研究7、HBVLP试剂盒抗干扰能力的考评考核,大蛋白试剂临床研究,8,、,HBV,LP,试剂盒的特异性考评,考核单位,考评标本,标本来源,例数,阳性,例数,HBV,LP,结果,阴性,例数,特异性,（）,河北省血液中心,解放军传染病研究所,北京地坛医院,合,计,正常献血员,体检健康者,体检健康者,/,2118,100,57,2275,3,0,0,3,2115,100,57,2272,99.86,100,100,99.87,大蛋白试剂临床研究8、HBVLP试剂盒的特异性考评考核单位,大蛋白试剂临床研究,9,、,HBV,LP,用于抗病毒治疗的监测,?,?,?,北京地坛医院进行了阿德福韦治疗患者的过程监测,浙江湖州中心医院进行了拉米夫定治疗患者的过程监测,北京大学生物系进行了干扰素治疗患者的过程监测,大蛋白试剂临床研究9、HBVLP用于抗病毒治疗的监测?,北京地坛医院阿德福韦治疗监测,北京地坛医院阿德福韦治疗监测,地坛阿德福韦治疗系列血清,一、,治疗明显组,最终检测点比最初检测点,DNA,拷贝数至少下降,10,，共计,28,例。大蛋白与,DNA,同步消退，其中有些直至转为阴性，有些降低至低水平。大蛋白的含量可,以作为反映治疗效果的一个指标。特别是对于,eAg,阴性的肝炎患者而言，大蛋,白是有效的血清学指标。,2,地坛阿德福韦治疗系列血清 一、 治疗明显组 最终检测点比最,典型病例,典型例分析,标本采集时间,2004-7-8,2004-8-11,2004-9-7,2004-10-8,2004-12-28,2005-3-22,2005-6-14,患者,佟之振,佟之振,佟之振,佟之振,佟之振,佟之振,佟之振,核酸检测,5.04E+07,7.97E+04,4.32E+03,大蛋白含,量,（,U/ml,）,41.09,12.80,0.51,0.24,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,0.603,0.384,0.043,0.056,典型病例 典型例分析 标本采集时间 2004-7-,典型分析,标本采集时间,2004-6-9,2004-7-8,2004-8-5,2004-9-1,2004-11-26,2005-2-21,患者,黄菊,黄菊,黄菊,黄菊,黄菊,黄菊,核酸检测,4.14E+08,1.57E+08,8.06E+07,7.65E+08,1.09E+05,8.00E+04,大蛋白含量,（,U/ml,）,48.05,35.00,2.29,1.76,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,1.309,0.515,0.083,0.184,典型分析 标本采集时间 2004-6-9 2004,药物治疗无效病例,标本采集时间,2004-4-7,2004-4-21,2004-5-19,2004-6-18,2004-7-15,2004-10-10,2004-12-30,2005-3-24,患者,朱清,朱清,朱清,朱清,朱清,朱清,朱清,朱清,核酸检测,1.58E+07,9.24E+05,1.15E+06,7.38E+05,5.89E+05,2.83E+05,1.17E+06,2.53E+06,大蛋白含量,（,U/ml,）,46.03,31.18,19.88,35.38,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,1.18,1.174,1.379,1.449,药物治疗无效病例,治疗现有效果后反跳,标本采集时间,2004-4-26,2004-5-24,2004-6-21,2004-9-13,2004-12-6,患者,张贵申,张贵申,张贵申,张贵申,张贵申,核酸检测,2.68E+07,1.15E+08,1.85E+09,6.05E+02,1.23E+04,大蛋白含量,（,U/ml,）,82.08,89.61,77.99,91.20,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,0.458,0.653,0.052,0.049,治疗现有效果后反跳 标本采集时间 2,治疗先有效后反跳,标本采集时间,2004-5-8,2004-6-3,2004-7-2,2004-9-23,2004-12-17,2005-3-8,患者,穆维新,穆维新,穆维新,穆维新,穆维新,穆维新,核酸检测,8.79E+03,6.48E+03,1.12E+03,大蛋白含量,（,U/ml,）,20.56,17.01,20.56,19.32,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,0.042,0.038,0.036,0.041,治疗先有效后反跳 标本采集时间,治疗先有效后反跳,标本采集,2004-5-21,2004-9-10,2004-12-6,2005-2-25,患者,相德宽,相德宽,相德宽,相德宽,核酸检测,5.59E+03,4.62E+03,大蛋白含量,（,U/ml,）,4.33,9.69,10.37,20.41,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,0.036,0.035,0.042,0.046,治疗先有效后反跳 标本采集 2004-5,治疗先有效后反跳,标本采集,2004-7-15,2004-8-12,2004-9-9,2004-10-8,2004-12-31,2005-3-24,2005-6-16,患者,王甫胜,王甫胜,王甫胜,王甫胜,王甫胜,王甫胜,王甫胜,核酸检测,1.41E+07,7.32E+04,6.67E+03,7.14E+02,1.60E+03,2.78E+03,大蛋白含量,（,U/ml,）,37.68,28.53,27.75,26.82,eAg,检测结果,（,OD,值，,CO=0.105,）,0.049,0.036,0.041,0.04,治疗先有效后反跳 标本采集 2004-,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测,?,抗病毒治疗过程中,HBV DNA,阴转不能做为治疗终点的,指标，,HBV DNA,阴转之后患者的病情会出现反跳。,?,HBV,LP,可以做为评估抗病毒治疗效果的指标，,HBV,LP,的完全消退提示抗病毒治疗较为彻底，,此时选择停,止用药可以避免患者病情的反跳。,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测?抗病毒治疗过程中HBV D,HBV-LP,完全消退，年内不反弹,姓名,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,陈,强,检测时间,采集时间,大蛋白,基线,3,个月,6,个月,9,个月,12,个月,15个月,18个月,21个月,24个月,27个月,30个月,33个月,36个月,DNA拷贝,5.26,10,7,1.37,10,6,10,3,10,3,10,10,10,10,10,10,10,10,10,3,3,3,3,3,3,3,3,3,HBV-M,135,135,ALT,128,74,80,75,36,2001.2.15,2001.5.23,2001.8.24,2001.11.22,2002.2.25,2002.5.12,2002.8.13,2002.11.26,2003.2.27,2003.5.29,2003.9.3,2003.12.3,2004.3.15,1.592,1.838,0.378,0.024,0.026,15,15,15,15,15,145,145,145,48,52,33,78,89,23,30,27,HBV-LP完全消退，年内不反弹姓名陈 强陈 强陈 强陈,完全消退，个月内不反弹,姓名,张,镇,张,镇,张,镇,张,镇,张,镇,张,镇,张,镇,基线,3,个月,6,个月,12,个月,15个月,采集时间,拷贝,2001.2.22,2001.5.29,2001.8.31,2002.3.17,2002.5.18,2002.8.12,1.804,0.016,0.017,0.026,-,135,5,5,145,145,145,145,182,12,12,11,14,9,13,6.37,10,10,10,10,10,10,10,3,3,3,3,3,3,6,9,个月,2001.12.17,18个月,完全消退，个月内不反弹姓名张 镇张 镇张 镇,高，治疗无效,姓名,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,周,国,萍,基线,3个月,6个月,9个月,12个月,15个月,18个月,21个月,24个月,27个月,30个月,采集时间,2001.3.23,2001.6.1,2001.9.7,2001.11.26,2002.2.27,2002.5.29,2002.9.3,2002.12.3,2003.3.9,2003.6.12,2003.9.5,2.316,1.384,1.425,1.14,1.646,5.21,10,7,2.33,10,6,1.03,10,6,5.78,10,5,135,50,33,39,73,2.64,10,6,5.08,10,5,4.23,10,5,4.02,10,1.02,10,6.78,10,1.09,10,5,5,5,6,135,135,135,135,135,135,135,39,32,25,28,33,29,41,高，治疗无效姓名周 国 萍周 国 萍周 国 萍周,高，治疗无效,姓名,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,余,爱,民,基线,3个月,6个月,9个月,12个月,15个月,18个月,21个月,24个月,27个月,30个月,33个月,采集时间,2000.12.17,2001.4.10,2001.7.4,2001.10.11,2002.1.7,2002.4.12,2002.7.16,2002.10.13,2003.1.9,2003.4.15,2003.7.16,2003.10.10,2.467,1.69,1.742,1.611,1.569,8,5,86,64,37,63,44,39,42,55,46,38,24,39,10,1.53,10,1.17,10,6.31,10,3.03,10,3.02,10,6.89,10,3.58,10,6.79,10,2.06,135,135,135,135,135,135,135,135,135,135,135,135,10,5,5.95,5,5,10,5,5.56,5,5,6,10,6,4.42,6,7,高，治疗无效姓名余 爱 民余 爱 民余 爱 民余,与疾病反弹,姓名,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,钟鸣,基线,3个月,6个月,9个月,12个月,15个月,18个月,21个月,24个月,27个月,30个月,33个月,采集时间,2000.12.18,2001.4.3,2001.7.3,2001.10.4,2002.1.3,2002.4.12,2002.7.16,2002.10.13,2003.1.9,2003.4.15,2003.7.16,2003.10.10,1.895,1.068,0.382,1.681,1.55,5.20,10,2.06,10,2.10,10,2.05,10,1.49,10,2.38,10,5.59,10,6.34,10,1.09,10,2.86,10,8,5,135,135,135,135,15,135,135,135,135,135,135,135,67,60,55,99,177,85,93,152,73,113,150,165,3.28,10,4,8,7,5.56,10,7,7,5,5,6,7,7,与疾病反弹姓名钟鸣钟鸣钟鸣钟鸣钟鸣钟鸣钟鸣钟鸣钟,与疾病反弹,姓名,何,德,云,采集时间,基线,2001.1.12,0.418,0.182,0.177,0.351,1.261,4.5610,2.5710,10,10,3,3,8,7,8,7,4,135,15,15,15,15,135,135,120,31,30,33,387,259,196,何,德,云,3,个月,2001.4.30,何,德,云,6,个月,2001.8.2,何,德,云,9,个月,2001.11.2,何,德,云,12,个月,2002.1.30,何,德,云,15个月,2002.4.29,何,德,云,18个月,2002.7.15,1.5710,5.6810,1.0910,与疾病反弹姓名何 德 云采集时间基线,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测,拉米夫定抗治疗过程中,HBV DNA,的消减晚于,HBV DNA,的消减，由于抗病毒治疗过程中肝内,HBV DNA,的消减晚于血液中,HBV DNA,的消减，,试验结果显示在治疗过程中,HBV,LP,的消减可能,与肝内,HBV DNA,的消减存在良好相关关系。,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测拉米夫定抗治疗过程中HBV,晚于消退，与同步,姓名,王兴,王兴,王兴,王兴,王兴,王兴,王兴,王兴,王兴,王兴,基线,3个月,6个月,9个月,12个月,15个月,18个月,21个月,采集时间,2001.1.11,2001.4.23,2001.7.27,2001.11.1,2002.1.15,2002.4.23,2002.7.10,2002.10.11,2003.1.15,2003.4.30,2.107,2.026,1.487,0.853,0.409,7.66,10,10,10,10,10,10,10,10,10,10,3,3,3,3,3,3,3,3,3,8,135,135,15,15,15,145,145,145,145,145,83,217,65,99,167,67,27,32,29,28,24个月,27个月,晚于消退，与同步姓名王兴王兴王兴王兴王兴王兴王兴,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测,HBV,LP,可以作为一个评估抗病毒治疗,效果以及判定治疗终点的指标，,能够合理,的指导患者的用药，避免过早停药导致的,病情反复。,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测HBVLP可以作为一个评估,北大生物系干扰素治疗监测,应答明显组,反跳组,应答不明显组,北大生物系干扰素治疗监测应答明显组反跳组应答不明显组,乙肝病毒成分直接检测集合,sAg,+,LP,+,S2,DNA,eAg+,+,乙肝病毒成分直接检测集合sAg+LP+S2DNAeAg+,乙肝大蛋白以及乙肝标志物消减曲线,HBeAg,HBV DNA,大蛋白,HBsAg,大蛋白涵盖,HBeAg,并稍晚于血液中,DNA,的消退,乙肝大蛋白以及乙肝标志物消减曲线HBeAgHBV DNA大蛋,乙肝大蛋白试剂已经申请专利,乙肝大蛋白试剂已经申请专利,1,、病毒感染者体内病毒复制的确切血清学指标,2,、持续阳性者（特别是小三阳）预后观察,3,、临床肝炎治疗合理用药指导，避免过度用药,4,、抗病毒治疗的效果观察,5,、体检加查本指标可以判断个体是否有感染性,乙肝大蛋白临床检测意义,停药时间判断,.,?,?,?,?,?,1、病毒感染者体内病毒复制的确切血清学指标2、持续阳性者（,乙肝大蛋白临床检测意义,我国卫生资源分配不一，尚有很多医院不具备,HBV-DNA PCR,的实验水平。而免疫测定技术因其有,效、直接、简便的特点，已经在临床诊断应用上占主,导地位，在我国大中小型医院普遍应用，本试剂的诞,生有利于中小型医院也掌握血液内病毒复制指标的检,测方式。进而提高临床大夫的诊断和治疗水平。并对,临床小三阳治疗有辅助诊断的意义。,乙肝大蛋白临床检测意义我国卫生资源分配不一，尚有很多医院不具,1,、填补传统两对半试剂的空白,2,、弥补,3,、诊断,4,、抗病毒治疗终点判定的唯一血清学指标,乙肝大蛋白临床检测意义,HBV DNA,检测的不足,HBeAg,阴性活动期肝炎唯一血清学指标,?,?,?,?,1、填补传统两对半试剂的空白2、弥补3、诊断4、抗病毒治疗终,一种新的乙肝诊断血清免疫学指标-乙肝病毒大蛋白课件,