糖化血红蛋白测定方法与其在临床中应用课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,糖化血红蛋白的测定方法及其在临床中的应用价值,糖化血红蛋白的测定方法及其在临床中的应用价值,1,1,、糖化血红蛋白的定义,糖化血红蛋白（,GHb,）是红细胞在生存期间HbA与己糖（主要是葡萄糖）缓慢、持续且不可逆地进行非酶促反应的产物。,由于HbA所结合的成分不同，,又分为,HbA1a,（与磷酰葡萄糖结合）、,HbA1b,（与果糖结合）、,HbA1c,（与葡萄糖结合），其中,HbA1c,含量最高，占,60%-80%,，是目前临床最常检测的部分。,1、糖化血红蛋白的定义,2,糖化血红蛋白的测定结果以百分率表示，指的是和葡萄糖结合的血红蛋白（,HbA1c,）占全部血红蛋白的比例。非糖尿病患者的糖化血红蛋白的水平为,4,%,-6%,。,糖化血红蛋白测定方法与其在临床中应用课件,3,正常成人体内的血红蛋白,Hb,HbA0,HbA1,HbA1a,HbA1b,HbA1c,HbA,(,),HbA2,(,),HbF,(,),97%,0.5%,2.5%,成人,Hb,胎儿,Hb,未糖化,糖化,6%,94%,-,主要的糖化血红蛋白,80%,A1a,和,A1b,含量极低,正常成人体内的血红蛋白HbHbA0HbA1HbA1aH,4,HbA1c,由蛋白的非酶法糖化形成,不稳定的,Schiff,（醛亚胺结构）,可逆,快速,稳定的,HbA1c,（醛酮结构 ）,不可逆,慢速,葡萄糖进入红细胞后与,HBA,的,链,N,端缬氨酸残基缩合,再经,Amadori,分子重排后,HbA1c由蛋白的非酶法糖化形成不稳定的可逆 稳定的HbA1,5,2,、糖化血红蛋白的特性,2、糖化血红蛋白的特性,6,（,1,）糖化血红蛋白比例高低的决定因素,取决于血糖的浓度,血糖与血红蛋白的接触时间,红细胞的存活时间,血糖浓度越高，接触时间越长，,HbA1c,的比例越大,（1）糖化血红蛋白比例高低的决定因素,7,（,2,）反应近,2-3,个月的平均血糖水平,人体内红细胞的寿命一般为,120,天，在红细胞死亡前，血液中糖化血红蛋白含量也会保持相对不变。因此糖化血红蛋白水平反映的是在检测前,2-3,个月,内的平均血糖水平。,稳定性好。,糖化血红蛋白是逐渐生成的，,且,不易分解,，,短,期内,的血糖升高,或降低,，不会引起糖化血红蛋白的,波动,，能更好地反映较长时间的血糖控制程度。,（2）反应近2-3个月的平均血糖水平人体内红细胞的寿命一般为,8,（,3,）可以,随机抽血进行检测，简便易行，可重复性好。,（3）可以随机抽血进行检测，简便易行，可重复性好。,9,HbA1c,的测定方法,HbA1c的测定方法,10,通常分为两大类：,一类是基于,GHb,和,Hb,的电荷不同，如离子交换层析法、电泳法。,另一类是基于,Hb,上糖化基团的结构特点，如亲和层析法、免疫法和酶法等。,通常分为两大类：,11,电泳法 与离子交换层析法一样也是基于糖化和非糖化的,Hb,所带的电荷不同进行分离。此法精密度高，但分析时间较长。,亲和层析法 基于糖化和非糖化,Hb,结构不同进行分析的。除外,HbA1c,外，血液中的其他糖化的,Hb,也可与亲和物结合，因此该方法的检测结果为,GHb,总量，而不是,HbA1C,含量,免疫法 可在全自动生化分析仪上用免疫抑制比浊法测定,HbAlc水平。具有良好的精密度和抗干扰能力。,电泳法 与离子交换层析法一样也是基于糖化和非糖化的Hb所,12,酶法 原理是在蛋白酶的作用下，切断HbAlc 的,链,N,末端的糖化二肽，糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成过氧化氢，在过氧化氢酶的作用下与显色剂产生显色反应，通过测定吸光度求出定HbAlc 的百分数。,床旁检验或快速检验（,POCT,）有,2,种方法，一种是利用硼酸亲和原理在颜色反射计上进行检测。HbAlc特异性地与硼酸复合物结合呈蓝色，而未糖化,Hb,呈红色，通过两者光强度的比例计算。另一种是基于免疫反应原理在荧光分析仪上检测含HbAlc 的荧光染料分子的斑点数，换算成HbAlc 的数值。此方法便携、快速，但精密度较其他方法要差。,酶法 原理是在蛋白酶的作用下，切断HbAlc 的链N末,13,离子交换色谱法,葡萄糖与血红蛋白,链,N,端缬氨结合后等电点降低，导致糖化的,Hb,所带的正电荷比未糖化的,Hb,少，与树脂的附着力小，可分别用不同离子强度的缓冲液在不同时间将,Hb,从阳离子交换柱中洗脱下来，再根据峰值下面积来计算,HbAlc占总,Hb,的比例。,目前临床上较常采用高效液相色谱法（,HPLC,）和低压液相色谱（,LPLC,），,HPLC,被国际上列为测定HbAlc 的参考方法。,离子交换色谱法 葡萄糖与血红蛋白链N端缬氨结合后等电,14,干扰因素,1.,Hb,的变异体对HbAlc 测定的影响,常见的变异体有,HbF,即,Hb,的,链由,链替代：如地中海贫血、镰状细胞病患者。还如,HbS,、,HbC,、,HbE,等。,Hb,的变异体会随着,HbAlc 一起洗脱而影响HbAlc的测定值。,干扰因素,15,2.,Hb,的化学修饰产物,最常见的是,氨基甲酰化,Hb,(,肾病患者,),和,乙酰化,Hb,(,接受阿司匹林治疗者,),。氨甲酰化为高浓度尿素在体内形成异氰酸,结合到,Hb N,末端氨基酸上，形成氨基甲酰血红蛋白。其与HbAlc的等电点相似，使得HbAlc 测定结果假性升高。,有关报道，此法测定HbAlc时，如果尿素浓度超过,17mmol/L,，每升高,1mmol/L,会使测定值升高,0.04%,。另外肾病患者常伴有贫血,红细胞寿命缩短,在解释检测结果时，要综合考虑。,2. Hb的化学修饰产物 最常见的是氨基甲酰化Hb(肾病,16,3.,红细胞生存期的改变,当患有溶血、失血性贫血等时，红细胞代谢加快，HbAlc值通常下降。缺铁性贫血时，衰老的红细胞所占的比例增高， HbAlc值会假性增高。,3.红细胞生存期的改变 当患有溶血、失血性贫血等时，红细胞,17,全自动糖化血红蛋白测定装置,ADAMSTMA1c,HA-8160,全自动糖化血红蛋白测定装置ADAMSTMA1c HA-8,18,HA-8160,的技术参数,测定对象,：,全血,测定项目：,HbA1c,、,HbA1,、,HbF,及图样,测定原理：,逆相分离阳离子交换层析柱,样本使用量,：,约,4uL,（全血样本）,样本容器： 采血管（,EDTA,，,NaF,、肝素）,必须样本量： 采血管,1mL,HA-8160的技术参数,19,HA-8160,的特点,HPLC,法：,高速分离稳定性HbA1c，特异性强、精密度高。,自动去除不稳定性,HbA1c,同时测定,HbA1,、,HbF,能发现变异,Hb,，修饰,Hb,高速测定：,90,秒,/,样本,HbA1c,的测定范围在,3,20%,之间,。,HA-8160的特点,20,HA-8160,波形,HbA1a1,HbA1a2,HbA1b,C,HbF,HbA0,HbA1c,HA-8160波形HbA1a1HbA1a2HbA1bCHb,21,HA-8160,结果样图,测定信息,测定结果,波峰信息,色谱图,HA-8160结果样图测定信息测定结果波峰信息色谱图,22,糖化血红蛋白测定方法与其在临床中应用课件,23,糖化血红蛋白测定方法与其在临床中应用课件,24,影响测定结果的标本因素,测定前标本的储存 室温（,15-25,）下保存,2,周，冰箱 （,2-8,）保存,1,个月，测定结果的变异率均低于,3%,，稳定性良好。,HbA1c,通常用翻倒混合的血或者自然沉降血球。,如用和血糖测定共用,NaF,抗凝采血管，也可用离心分离的血球。但要在,700g (1500rpm),、,5min,左右温和的离心条件下做前处理，否则,HbA1c,的测定值有若干偏高的情况出现。,影响测定结果的标本因素,25,对于非重度溶血标本，可进行测定。,HPLC,分析图中可出现变性峰形。,存在未检出结果的情况,贫血患者当,Hb,浓度太低时,65g,左右，低于最低检出量，可采取低速离心后适当弃去部分血浆调节,Hb,浓度至正常水平。,对于非重度溶血标本，可进行测定。 HPLC分析图中可出现变性,26,HbA1c,的临床应用,HbA1c的临床应用,27,主要有三方面,糖尿病的诊断,监测糖尿病患者长期血糖的控制状况,HbA1C,的监测目的在于消除血糖波动对病情控制的影响,。是国际公认的糖尿病监控“金标准”。,糖尿病并发症的风险评估,其水平高低与糖尿病并发症的风险密切相关,主要有三方面,28,一 糖尿病诊断,DM,的诊断标准：,DM,(1),具有糖尿病的症状，,FPG,7.0mmol/L,（,2,）具有糖尿病的症状，随机血糖,11.1mmol/L,，且伴有尿糖阳性者。,(3)OGTT,峰值,11.1mmol/L,，,OGTT2hPG,11.1mmol/L,IFG,FPG 6.1-6.9mmol/L,，,2hPG,7.8,mmol/L,。,IGT,FPG,7.0mmol/L,，,2hPG7.8-11.1mmol/L,临床症状不典型者，需要另,1d,重复检测确诊，但不主张做第,3,次,OGTT,。,一 糖尿病诊断 DM的诊断标准：,29,（一）,HbA1c,用于糖尿病的诊断,随着,HbA1c,检测标准化的逐步完善，,2010,年美国,DM,协会（,ADA,）更新,DM,诊疗指南，将其和,FPG,、,OGTT,一起列为,DM,诊断标准之一。并指出,HbA1C 6.5,作为诊断,DM,的标准，,HbA1C,在,5.7-6.4%,为,DM,前期，,5.7-6.0%,为,DM,高危期，,6.1-6.5%,为,DM,超高危期。,（一）HbA1c用于糖尿病的诊断,30,ADA,的诊断标准是否适用于中国人，此标准颁布后，不少文献报告以,OGTT,为金标准评价,HbA1C,诊断糖调节受损（,IGR,）和,DM,的诊断效能。,北京大学第一附属医院徐国宾教授在他的, HbA1C,对糖调节受损和,2,型糖尿病的诊断价值,文章中指出，推荐,6.5%,作为诊断,DM,的,cut off,值或医学决定水平是合理的，其具有较高的特异性和阳性预测值，一般,96%,，生理变动较,FPG,低，但敏感性不如,FPG,，,HbA1C,6.5%,不能排除经血糖检测和,OGTT,试验确诊的,DM,患者。因此，与血糖联合检测有助于提高糖尿病诊断的敏感性和特异性。另外，在他的此项研究中不支持,HbA1C,在,5.7-6.4%,为,IGR,的诊断标准。,ADA的诊断标准是否适用于中国人，此标准颁布后，不少文献报告,31,（二）,HbA1C,在妊娠期糖尿病中的诊断,妊娠期糖尿病（,GDM,）是指在妊娠期发生或首次发现的不同程度的高血糖症，包括妊娠前已经存在但漏诊的孕前,DM,及孕期伴随发生的糖耐量异常。,GDM,发病率逐年呈上升趋势，孕期随着血糖水平的升高，妊高症、剖宫产率、巨大儿、胎儿畸形、早产以及子代患糖尿病、心血管疾病的风险也会增加。,GDM,对母婴近期和远期都会造成很多不良影响。,（二） HbA1C在妊娠期糖尿病中的诊断妊娠期糖尿病（GD,32,美国糖尿病学会（,ADA,）,2011,年制定了新的,GDM,诊断标准，孕,24-28,周用,75g,葡萄糖进行口服葡萄糖耐量试（,OGTT,），以空腹、糖后,1h,2h,血糖,5.1,、,10.0,、,8.5mmol/L,作为,cut off,值，,3,项中任何,1,项值达到或超过上述标准即可诊断,GDM,。,但此项检测过程需要多次采血，操作繁琐，给孕妇带来痛苦和不便。,HbA1C,是否可以作为,GDM,一个辅助诊断指标，使用普通人群的,HbA1C cut off,值诊断,GDM,是否合理有待进一步探讨。,美国糖尿病学会（ADA）2011年制定了新的GDM诊断标准，,33,我国有文献报道，,HbA1C,诊断,GDM,的最佳,cut off,值,4.9%,，他的特异性和敏感性均高于,80%,，诸多研究显示，孕期,HbA1C,升高的水平与孕期母婴健康关系密切。但,HbA1C,并未被推荐作为,GDM,的诊断指标之一。这还需进行更广泛的临床验证。（妊娠期由于红细胞周转加快，红细胞寿命缩短，空腹血糖降低，使得糖化时间缩短，导致妊娠期,HbA1C,生理性下降）。,我国有文献报道， HbA1C诊断GDM的最佳cut off值,34,（三）与应激性高血糖的鉴别诊断,各种应激反应如,手术、创伤，感染、,急性心肌梗死、脑血管意外等疾病和输注了含葡萄糖注射液后，都可以使血糖升高，但这种高血糖的 HbAlc 不一定升高，若为糖尿病患者HbAlc则升高，对两者签别诊断和指导治疗很有价值，,（三）与应激性高血糖的鉴别诊断各种应激反应如手术、创伤，感染,35,二 监测糖尿病患者长期血糖的控制状况,对于血糖控制状态较为平稳的患者，每年至少应接受,2,次,HbA1c,的检测。,对于血糖控制状态不稳定的、需要改变治疗方案及正在进行胰岛素治疗的患者，应该每,3,个月检测,1,次。,二 监测糖尿病患者长期血糖的控制状况对于血糖控制状态较为平,36,(,三,),评估糖尿病慢性并发症的发生与发展,HbAlc是监测糖尿病患者血糖控制情况的金标准,是评估糖尿病并发症风险的有效指标,.,糖尿病足病、糖尿病性周围神经炎、眼病、肾病、心脏病以及脑血管病变等是,DM,最常见的慢性并发症。也是导致,DM,死亡的主要原因。,DM,的早期诊断、生活方式的干预、治疗、监控对于延缓并发症的发生具有重要意义。,(三)评估糖尿病慢性并发症的发生与发展HbAlc是监测糖尿病,37,8%,9%,8%9%,38,心力衰竭的几率,Hb,死亡的几率,心肌梗死的几率,中风的几率,微血管病变的几率,白内障摘除手术的几率,1%,21%,14%,12%,37%,19%,16%,心力衰竭的几率Hb死亡的几率心肌梗死的几率中风的几率微血管病,39,糖化血红蛋白检测的标准化,实验室中由于不同的测定原理方法所得到的测定值存在较大差异，为了解决检测结果的可比性和溯源性问题，国际上,GHb,测定的标准化工作已进行了多年，美国（,NGSP,美国糖化血红蛋白标准化计划,）、日本（,JDS,日本糖尿病学会）、瑞典（,SFKK,瑞典临床化学学会）等国家分别建立了,HbA1c,的国家标准计划。并且在参考方法、标准物质、检测与治疗界值、测定方法及数据转换公式上达成共识。,我国在,GHb,测定一致性和标准化工作方面也作出了不少努力并取得了一定成绩。,糖化血红蛋白检测的标准化实验室中由于不同的测定原理方法所,40,IFCC-NGSP,换算公式,NGSP,（,%,）,=0.09148*IFCC,（,mmol/mol,）,+2.152,糖化血红蛋白测定方法与其在临床中应用课件,41,谢谢,谢谢,42,